张丽军
- 作品数：23 被引量：59H指数：5
- 供职机构：湖南师范大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学天文地球更多>>
- 鼠肝质膜蛋白质组研究的方法评估被引量：1
- 2007年
- 细胞质膜是细胞中重要的细胞器,在肝功能的发挥中具有非常重要的作用.使用蔗糖密度梯度离心纯化细胞质膜,通过电子显微镜观察和免疫印迹法检验膜的纯度.结果显示,与组织匀浆成分相比,质膜富集了20倍,线粒体的污染减少了约50%.提取的蛋白质用二/一维凝胶电泳(2DE/1DE)分离、胰酶酶解、电喷雾四极杆飞行时间质谱(ESI-Q-TOF)和基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定,或者提取的蛋白质直接进行溶液内酶解、液相色谱串联电喷雾离子阱质谱(LC-LTQ)(鸟枪法)鉴定.一共鉴定了547个非冗余蛋白质,其中34%为质膜或质膜相关蛋白质.优化和评估了质膜蛋白质组研究的方法,且对鼠肝质膜蛋白质组进行了系统的分析.
- 陈平张丽军李选文王细娥曹锐刘珍熊继先彭霞魏颖娟银兴峰王贤纯梁宋平
- 关键词：细胞质膜蛋白质组鸟枪法
- 真核细胞质膜蛋白质组研究进展被引量：10
- 2005年
- 细胞膜(质膜)蛋白质是细胞的“门铃”与“门户”,是许多药物的作用靶标。细胞质膜蛋白质组的研究正成为蛋白质组研究的热点,这方面的研究有利于具有重要功能的低丰度蛋白质的发掘, 为药物研发和疾病的诊断提供靶体与标记蛋白质。然而,质膜蛋白质组的研究在强疏水性跨膜蛋白质和低丰度膜蚩白质的分离和鉴定上遇到了方法学的挑战。本文对质膜及其微区的纯化、质膜蛋白质组的分离与鉴定、生物信息学,以及亚细胞定位研究的近期进展作扼要介绍。
- 张丽军谢锦云李选文梁宋平
- 关键词：质膜蛋白质组学质谱
- 细胞质膜的生物素化亲和纯化法
- 膜蛋白是生物膜功能的主要体现者,可分为外周膜蛋白和内在膜蛋白(integral membrane protein)。它们行使着细胞内与细胞外的物质与能量交换,信号传导与代谢调控等生物体内的许多重要功能,很多膜蛋白也作为药...
- 陈平李选文孙亚兰张丽军王美迟谢锦云梁宋平
- 文献传递
- 乳腺癌蛋白质组学研究被引量：7
- 2003年
- 乳腺癌是妇女中最常见的一种癌症,鉴定出与乳腺癌癌变相关的蛋白质以及病情发展过程中蛋白质的变化对揭示乳腺癌变机理及早期诊断是非常重要的.早在蛋白质组学这一概念提出以前,人们已应用2 维凝胶电泳技术(2DE)研究乳腺癌的癌变机理,且随着人类基因序列测序的完成,质谱的应用,以及生物信息学的引入,蛋白质组的研究获得了飞速发展,高通量的蛋白质组研究以及新的技术如激光捕获显微切割(LCM),表面加强激光解吸 电离飞行时间质谱(SELDI TOF),蛋白质阵列,组织阵列等蛋白质组学技术已被用于乳腺癌研究并获得了很快速的发展.乳腺癌蛋白质组学研究已经鉴定了一些具有诊断潜能的生物分子靶标和信号传导因子.介绍了乳腺癌蛋白质组学研究中所使用的最新研究方法和研究进展.
- 张丽军谢锦云梁宋平
- 关键词：乳腺癌蛋白质组学二维凝胶电泳激光捕获显微切割
- 2DE-MS中膜蛋白质组的研究进展被引量：1
- 2004年
- 2-维凝胶电泳(2DE)具有高分辨率、高通量等特点,已被广泛地用于蛋白质组的研究.然而,2DE-MS在膜蛋白质组学研究方面却有其局限性,主要因为:膜蛋白具有低丰度、难溶、等电点时易沉淀、难酶解等特点.然而随着亚细胞分离技术和直接的生化方法富集等技术的发展,低丰度问题得到了极大的改善;增溶剂(尿素,硫脲),新的两性离子和非离子去垢剂,以及有机溶剂等的利用极大地改善了膜蛋白质组的溶解性能;同时,一些新的2DE技术的利用扩大了常规2DE的分离范围.在膜蛋白裂解方面,将酶解法与化学法(CNBr)相结合,另外先进的质谱技术的发展使得膜蛋白质组的研究在最近几年取得了较大的发展.现对2DE-MS途径中,膜的富集、膜蛋白的提取、分离、酶解、鉴定方面的进展进行综述.
- 张丽军谢锦云梁宋平
- 关键词：去垢剂质谱
- 星级酒店女性高层管理者职业生涯发展阶段及影响因素研究
- 女性因细致入微、独具亲和力、善于沟通等特质，是酒店人力资源的中坚力量，但女性担任酒店高层管理人员的比例却偏小，处于失衡状态。近年来酒店业越来越关注女性从业人员的职业生涯发展问题。许多世界知名的酒店集团已经开始倡导大力培养...
- 张丽军
- 关键词：星级酒店女性从业人员职业生涯发展
- 文献传递
- 强疏水性、低丰度的整合质膜蛋白质分级提取与鉴定
- 占基因编码蛋白质20-30%的整合膜蛋白有重要生物学意义,然而这类蛋白质具有强疏水性、低丰度的特点,其蛋白质组学研究在方法上具有挑战性。为了鉴定大鼠肝脏低丰度,强疏水性的质膜蛋白质,我们通过两次蔗糖密度梯度离心纯化质膜,...
- 张丽军王细娥彭霞熊继先魏颖娟陈平谢锦云梁宋平
- 文献传递
- C57小鼠肝脏质膜蛋白质组学分析
- 肝脏的细胞质膜作为细胞内外物质与信息交换,以及细胞内外因子识别的靶标所在场所,在肝脏细胞生命活动中发挥着重要作用。本研究采用两种策略分离得到C57小鼠肝脏细胞质膜。方法之一:采取小鼠肝门静脉原位灌流急性分离肝细胞,对分离...
- 李选文张丽军曹佳王细娥魏颖娟彭霞金琦慧熊继先孙亚兰陈平梁宋平
- 文献传递
- 2DE中IPG胶条转移到SDS-PAGE中的技术改进被引量：6
- 2004年
- 2-维凝胶电泳(Two-dimensionalgelelectrophoresis,2DE)因其高通量、高分辨率等特点,被广泛用于蛋白质组的分离.然而,在蛋白质从第一向-固相(ImmobilizedpHgradients,IPG)胶条转移到第二向-十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶(Sodiumdodecylsulfate,SDS;Polyacrylamidegelelectrophoresis,PAGE)时,常会引起蛋白质的损失.尤其是当将IPG胶条放入浓缩胶上时,在胶面不平、技术不熟练等情况下,常会在IPG胶条下引入气泡,导致蛋白质更多的损失.现将IPG胶条转移过程进行改进:先在第二向的十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶上加上薄薄的一层(约1～2mm厚)琼脂糖溶液,然后将IPG胶条转移上去,最后再封住胶条的上面.这样的转移不会引起气泡,可以大大提高实验的成功率及重复性,有利于蛋白质的转移(尤其是相对分子质量大于40kDa的蛋白质),提高质谱鉴定的准确性.此法操作简便,可以减少因操作不熟练而带来的麻烦.
- 张丽军谢锦云张健梁宋平
- 多维色谱-串联质谱联用技术分离和鉴定小鼠肝脏质膜蛋白质被引量：13
- 2005年
- 采用自动在线纳流多维液相色谱 串联质谱联用的方法分离和鉴定蔗糖密度梯度离心法分离和富集的小鼠肝脏质膜蛋白质 .以强阳离子交换柱为第一相 ,反相柱为第二相 ,在两相之间连接一预柱脱盐和浓缩肽段 .用含去污剂的溶剂提取细胞质膜中的蛋白质 ,获得的质膜蛋白质经酶解和适当的酸化后通过离子交换柱吸附 ,分别用 10个不同浓度的乙酸铵盐溶液进行分段洗脱 .洗脱物经预柱脱盐和浓缩后进入毛细管反相柱进行反相分离 ,分离后的肽段直接进入质谱仪离子源进行一级和二级质谱分析 .质谱仪采得的数据经计算机处理后用Mascot软件进行蛋白质数据库搜寻 ,共鉴定出 12 6种蛋白质 ,其中 4 1种为膜蛋白 ,包括与膜相关的蛋白质和具有多个跨膜区的整合膜蛋白 ,为建立质膜蛋白质组学研究的适宜方法和质膜蛋白质数据库提供了有价值的基础性研究资料 .
- 曹锐张丽军聂松王贤纯梁宋平
- 关键词：串联质谱质膜蛋白质组学
