成大荣
- 作品数：145 被引量：562H指数：13
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏高校优势学科建设工程资助项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 猪干扰素α的原核可溶性表达及抗PEDV活性
- 2024年
- 旨在利用原核表达系统高效表达具有抗病毒活性的可溶性重组猪干扰素α(soluble recombinant porcine interferon-α,srPoIFN-α)。通过PCR方法扩增姜曲海猪IFNα基因成熟肽序列,将其分别克隆至原核表达载体pCold-Ⅱ、pET22b、pET30a和pET30a-ELP中并在大肠杆菌中进行表达;通过Western blot结合Image J软件或BCA定量分析不同表达载体、密码子偏好优化、培养基类别、纯化方式等因素对猪干扰素α基因在大肠杆菌中可溶性表达的影响,鉴定提高srPoIFN-α表达的有利因素;利用VSV-GFP和PEDV检测srPoIFN-α的抗病毒活性。结果显示,原核表达载体pET30a、密码子优化、HB-PET自诱导培养基和磁珠纯化均能显著提高srPoIFN-α产量(P<0.001);srPoIFN-α有效抑制VSV-GFP复制的稀释倍数为2-8.1,与重组人干扰素α2b标准品的比活为1.71×10^(8)IU/g,有效抑制PEDV复制的稀释倍数为2^(-10.29),抗PEDV活性为2.72 IU,表明srPoIFN-α具有良好抗PEDV活性。这些结果为进一步开发可溶性IFNα药物制剂提供参考。
- 朱睿张弘石吴植谢军张蕾覃光让房崇琴成大荣朱善元
- 关键词：抗病毒活性PEDV
- 选择优良菌株用于仔猪水肿病疫苗的改进被引量：19
- 2002年
- 传统的仔猪水肿病疫苗 (目前市场上广泛使用 ) ,只是以致水肿病大肠杆菌菌株的O抗原为基础 ,而没有考虑水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原 ,其免疫效果难以提高。在仔猪水肿病疫苗的改进中 ,我们除了考虑O13 9、O18、O14 1菌体抗原之外 ,还利用PCR技术、单克隆抗体技术、电镜技术筛选了含有水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原的菌株。本研究中获得用于新一代仔猪水肿病疫苗的三型大肠杆菌菌株 :O13 9:SLT_lle+ :F18ab+ 、O13 8:SLT_lle+ :F18ab+ 以及O14 1:SLT_lle+ :F18ac+ 。
- 徐建生成大荣黄维嘉张迎春李俊宝董国雄
- 关键词：仔猪水肿病疫苗
- 鸭疫里默氏杆菌的PCR检测和药敏试验被引量：4
- 2015年
- 参考文献合成两条鸭疫里默氏杆菌特异性引物,建立PCR方法。使用模板进行基因扩增,得到592bp的目的条带。以该方法对高邮、仪征等地的疑似病例进行检测,得到20株鸭疫里默氏杆菌。挑选鉴定后的纯菌落接种含血清TSB液体培养基,增菌后进行药敏试验。结果显示,所有被检鸭疫里默氏杆菌菌株对哌拉西林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁的敏感率均达到了100%;对头孢唑啉、头孢哌酮、头孢吡肟的敏感率达到了95%。
- 秦香香高梦月苏玲玲成大荣
- 关键词：鸭疫里默氏杆菌PCR药敏试验
- 大肠杆菌F18菌毛A亚单位基因的多样性分析被引量：5
- 2005年
- 根据已经发表的大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位(FedA/ab)的基因序列(fedA/ab)设计1对引物,利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM-T载体,获得重组质粒TF107A、TYCED1A、TYCED2A、TCA、TDA、TEA、T12FA、T8813A、T8199A、T2134PA。通过序列测定,并与已发表的fedA/ab进行比较、基因树分析,可将这10个菌株分为2个基因群,其中F107/86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedA/ab具有高度同源性,属于fedA/ab,大小为513bp;E、8813、8199、2134P构成另一单独的分支,属于fedA/ac,大小为516bp。
- 成大荣徐建生曹军唐波吕玲孙怀昌高崧
- 关键词：大肠杆菌F18菌毛基因多样性
- 利用PCR法鉴定产SLT-IIe大肠杆菌被引量：30
- 1999年
- 类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体（ Ｓｈｉｇａｌｉｋｅ Ｔｏｘｉｎ Ⅱ Ｖａｒｉａｎｔ， Ｓ Ｌ ＴⅡｖ ｏｒ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ），是仔猪水肿病的主要致病因子。根据 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 基因序列，合成一对针对 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 操纵子基因保守区的寡核苷酸引物，建立了聚合酶链式反应（ Ｐ Ｃ Ｒ）扩增方法。通过对产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 毒素大肠杆菌菌株 Ｔ Ｂ１、产 Ｓ Ｌ ＴⅡ毒素大肠杆菌菌株 ９３３ Ｗ 和产 Ｓ Ｌ ＴⅠ毒素大肠杆菌菌株 Ｈ３０ 的试验，结果表明用所设计的引物建立的 Ｐ Ｃ Ｒ方法可特异性鉴定产 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 大肠杆菌。用此法对本实验室从患水肿病仔猪肠道分离的 １５ 株大肠杆菌进行了鉴定，结果可从 １５ 个菌株的 １２ 株中扩增到 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ 的特异性保守序列基因片段，而其它菌株未见此保守序列的基因片段。
- 徐建生成大荣董国雄李俊宝
- 关键词：水肿病大肠杆菌PCR
- 肉羊源单核细胞增生李斯特菌及空肠弯曲菌的临床监测被引量：2
- 2018年
- 单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)及空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)均为人兽共患病原菌,与动物源食品卫生安全密切相关。为保障肉羊源食品安全,对江苏地区部分羊场的这2种细菌进行临床监测。通过对单核细胞增生李斯特菌hly基因及空肠弯曲菌gyrA基因的序列分析,选择其保守区域设计2对引物。通过对参考菌株的PCR扩增及PCR产物的序列测定,证明所建立的PCR方法可特异性检测单核细胞增生李斯特菌及空肠弯曲菌。采集江苏地区12个养殖场的肉羊肛拭子样品共199份,并接种含10%小牛血清的液体肉汤进行增菌培养。增菌物以煮沸法制备细菌DNA模板后,以建立的PCR方法对空肠弯曲菌和单核细胞增生李斯特菌进行检测。结果发现其中2个养殖场(2/12)存在单核细胞增生李斯特菌感染,4个养殖场(4/12)存在空肠弯曲菌感染。在被检的199份样品中,有2份(1.01%)为单核细胞增生李斯特菌阳性,12份(6.03%)为空肠弯曲菌阳性。
- 宋晓莉成大荣熊静禹黄亚奇吴悠肖宜容沈若子姜勇魏若瑶
- 关键词：肉羊单核细胞增生李斯特菌空肠弯曲菌
- 新鱼腥草素钠对鸡外周血T淋巴细胞增殖的影响被引量：3
- 2008年
- 采集健康鸡肝素抗凝血,按常规方法分离外周血淋巴细胞并于体外培养24 h后,加入不同剂量的新鱼腥草素钠/刀豆素A(ConA),继续培养44 h后,以MTT法测定新鱼腥草素钠对淋巴细胞增殖的影响。结果表明,新鱼腥草素钠在体外具有刺激淋巴细胞增殖的能力,且与ConA具有协同作用;进一步分析表明,不同给药剂量的新鱼腥草素钠对淋巴细胞的影响不同,其中以终浓度为250 mg/L效果最明显。
- 李萍朱善元成大荣陆广富贾宁
- 关键词：新鱼腥草素钠淋巴细胞
- 猪圆环病毒衣壳蛋白单克隆抗体的制备被引量：3
- 2008年
- 以大肠杆菌表达的猪圆环病毒2型(PCV2)重组衣壳蛋白(GST-CAP2)为抗原,以一定的免疫程序接种BALB/c小鼠后,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0按常规杂交瘤技术进行融合。以GST-CAP2以及猪圆环病毒1型(PCV1)重组衣壳蛋白(GST-CAP1)为包被抗原,经间接ELISA筛选获得2株能稳定分泌针对PCV的单克隆抗体的杂交瘤细胞株(M1和G1)。通过dot-ELISA、Western-blotting以及间接免疫荧光(IFA)技术证明G1株分泌的单抗同时识别PCV1和PCV2,而M1株分泌的单抗则特异性针对PCV2。该单抗的制备将为进一步建立快速检测PCV的方法奠定基础。
- 朱善元陈长春成大荣金山李祥瑞
- 关键词：猪圆环病毒PCV1PCV2单克隆抗体
- 传染性法氏囊病病毒毒力变异的分子生物学基础被引量：1
- 2004年
- 徐建生成大荣
- 关键词：传染性法氏囊病病毒毒力变异IBDV流行性种雏
- 志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位及酶活性部位的基因缺失、突变株表达产物免疫生物学特性被引量：3
- 2004年
- 重组志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位pGEX＿Ansp及其酶活性部位的基因缺失株pGEX＿Ade及突变株pGEX＿Amu转化的大肠杆菌经诱导后,表达产物经超声波裂解并滤过除菌。ICR小鼠腹腔注射三种重组质粒转化菌诱导后菌体裂解物的除菌滤液,以检验重组表达产物的毒性和免疫原性;在Vero细胞上检测重组菌表达产物对Vero细胞的半数致死量(CD50)及免疫鼠血清对SLT＿Ⅱe毒素的中和实验三方面来比较pGEX＿Ansp、pGEX＿Ade和pGEX＿Amu的生物学特性,结果表明这三种基因工程菌表达产物经腹腔注射后可以诱导机体产生一定程度的保护性抗体。在Vero细胞上,pGEX＿Ansp的表达产物可在一定程度上使Vero细胞产生细胞病变,pGEX＿Amu的表达产物可在一定程度上抑制Vero细胞单层形成时间,而pGEX＿Ade对Vero细胞的生长无影响。
- 徐建生成大荣陈雷董国雄李俊宝
- 关键词：毒性免疫原性
