张宇飞
- 作品数：37 被引量：35H指数：5
- 供职机构：内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- pcDNA3.1(+)/exJSRV-env重组质粒的构建及其瞬时转染293T细胞
- 肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV具有相互重叠的g...
- 张宇飞刘月张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊重组质粒瞬时转染293T细胞
- 绵羊胎盘绒毛膜滋养层细胞中enJSRV囊膜蛋白的细胞生物学作用
- 背景：几乎所有哺乳动物的基因组中都包含有很大一部分内源性逆转录病毒(ERVs)的基因组，而且这些E RV s在多个物种中发现。它们与胎盘发育的关系密不可分。在绵羊的基因组中至少包含有27株与外源绵羊肺腺瘤逆转录病毒(JS...
- 张宇飞
- 关键词：内源性逆转录病毒绵羊肺腺瘤病毒滋养层细胞囊膜蛋白酶消化法
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建、亚细胞定位及引起NIH3T3细胞转化的研究
- 为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T 细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3 细胞发生恶性转化。本研究采用RT-PCR 技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整...
- 张宇飞王专家刘月孙晓林张亚坤刘淑英
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立
- 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多...
- 刘月张宇飞孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 尾静脉注入质粒pcDNA3.1/exJSRV-env引起小鼠体内的变化
- 绵羊肺腺瘤病毒(exogenous Jaagsiekte sheep retrovirus,exJSRV)是引起绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)的病原.JSRV是反转录病毒...
- 石晶张宇飞刘淑英王金玲孙晓林杜方原
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白应激反应
- 文献传递
- 绵羊胎盘滋养层细胞的体外培养与鉴定被引量：9
- 2012年
- 为建立一种稳定、方便地获得较高纯度的绵羊绒毛膜滋养层细胞的方法,为后续的细胞转染和RNA干扰试验提供细胞学基础,采用组织块法培养滋养层细胞,消化差速法纯化细胞,相差显微镜观察滋养层细胞的形态学特点,应用常规HE染色和免疫组织化学染色、透射电镜及PCR技术鉴定细胞来源。结果显示,倒置相差显微镜下,可见细胞为上皮样细胞形态,呈片状铺展生长。免疫组织化学染色显示,细胞角蛋白染色阳性细胞占90%以上,波形蛋白染色呈阴性;透射电镜可观察到滋养层细胞所特有的结构;台盼蓝排斥试验检测细胞活力,存活率超过95%,细胞活力良好。常规RT-PCR技术可扩增出滋养层细胞所分泌的特有的干扰素蛋白-1基因片段。证实该方法可以有效获得较高纯度的、具有生物学活性的绵羊绒毛膜滋养层细胞,为本实验室后续的体外研究提供试验基础。
- 刘慧刘淑英刘丽珍张宇飞
- 关键词：绵羊滋养层细胞细胞培养
- 绵羊肺腺瘤病毒ENV蛋白的亚细胞定位及转化细胞能力的研究
- 构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达载体并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况,同时探讨其是否可以诱导NIH3T3细胞发生恶性转化。本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外...
- 张宇飞王专家刘月孙晓玲张亚坤刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白亚细胞定位致病机理细胞转化
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的原核表达
- 2012年
- 为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体。利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列,预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位,在线分析囊膜基因原核表达稀有密码子,根据分析结果选取囊膜蛋白的两段基因分别表达,命名为env-1和env-2。以本实验室构建好的pCDNA3.
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病囊膜蛋白原核表达密码子扩增片段克隆技术
- 鉴定羊源牛鼻炎B病毒的定量RT-PCR引物、探针及应用
- 本发明公开了一种鉴定羊源牛鼻炎B病毒的定量RT‑PCR引物、探针及应用，引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.2所示；探针序列如SEQ ID NO.3所示，将该引物和探针应用于羊源牛鼻炎病毒的检测中，能在...
- 周伟光李阳张宇飞张志丹希尼尼根王旭芬侯琳班亚星
- 绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究被引量：9
- 2014年
- 为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env。exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有外源性病毒特有的YXXM基序。系统进化树也表明我们克隆的exJSRV-env基因属于致病性的外源性病毒。运用生物信息学技术分析env基因编码的蛋白质的基本性质,并预测其可能的结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。说明绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白可引起NIH3T3细胞发生恶性转化。研究结果为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。
- 张宇飞刘月王专家孙晓林刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白
