刘月
- 作品数：25 被引量：15H指数：3
- 供职机构：内蒙古农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的评价和初步应用
- <正>对本实验室建立的检测绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的双抗体夹心ELISA方法进行敏感性、特异性、重复性的评价,检测临床样品,将该方法初步应用于临床实践,分别将羊的主要常见疫病(羊布病,口蹄疫,小反刍兽...
- 刘月刘淑英张宇飞孙晓林
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env构建及引起NIH3T3细胞恶性转化的研究被引量：9
- 2014年
- 为了构建绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因真核表达质粒并观察绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白在293T细胞中的定位情况以及探讨是否可诱导NIH3T3细胞发生恶性转化,本研究采用RT-PCR技术从自然感染绵羊肺腺瘤病的病羊肺组织中克隆完整的外源性绵羊肺腺瘤病毒囊膜基因(exJSRV-env),并将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1中。构建好真核表达质粒经PCR、酶切和测序鉴定。同时对exJSRV-env基因进行生物信息学分析。采用脂质体法将该重组质粒转染293T细胞,观察其在真核细胞中的表达及定位情况。将该重组质粒转染NIH3T3细胞,观察细胞是否发生恶性转化。用软琼脂集落实验检查转染重组质粒的NIH3T3细胞的生长状态。结果显示真核表达质粒构建成功并命名为pEGFP-C1/exJSRV-env。exJSRV囊膜蛋白的氨基酸序列与参考株比对发现该囊膜基因的跨膜区(TM区)的胞质尾区具有外源性病毒特有的YXXM基序。系统进化树也表明我们克隆的exJSRV-env基因属于致病性的外源性病毒。运用生物信息学技术分析env基因编码的蛋白质的基本性质,并预测其可能的结构。亚细胞定位表明exJSRV囊膜蛋白主要分布于细胞膜。转染pEGFP-C1/exJSRV-env质粒的NIH3T3细胞接触抑制性消失,可在软琼脂中形成集落。说明绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白可引起NIH3T3细胞发生恶性转化。研究结果为进一步探讨exJSRV囊膜蛋白的结构和功能及其致病机理提供了实验基础。
- 张宇飞刘月王专家孙晓林刘淑英
- 关键词：囊膜蛋白
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立
- 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒（Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV）囊膜蛋白（ENV）胞质尾区（CT）的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多...
- 刘月张宇飞孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白B细胞表位单克隆抗体ELISA
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位预测被引量：3
- 2013年
- 利用生物信息学预测绵羊肺腺瘤病毒(OPAV)NM株囊膜蛋白优势抗原表位,为寻找用于绵羊肺腺瘤病诊断和预防的候选抗原表位提供参考。参照OPAV-NM株env基因序列(登录号:JQ837489),应用Gamier-Robson方法、SOPMA方法和网络服务器PSIPRED、Predictprotein预测OPAV-NM株囊膜蛋白的二级结构。用Kyte-Doolittle方法预测蛋白质的疏水区和亲水区,用Emini方法预测蛋白质表面可能性,以Jamson-Wolf方法预测蛋白的抗原指数,利用Bcepred、IEDB、ABCpred网络服务器预测囊膜蛋白的抗原性,然后综合评价囊膜蛋白的B细胞抗原表位。结果表明,囊膜蛋白(ENV)二级结构丰富,α螺旋和β折叠所占比例相对较多,也具有多处转角及无规则卷曲区域,提示OPAV-NM囊膜蛋白具有较多的优势抗原表位区段。这些优势抗原表位分别为第52～76,101～110,118～165,182～196,201～215,281～305,309～332,335～356,461～476,530～574位氨基酸,其中第461～476位和第530～574位的部分氨基酸序列位于胞外区,且第530～574区段位于en-OPAV和ex-OPAV的囊膜氨基酸序列的差异区,该段氨基酸序列对绵羊肺腺瘤病毒疫苗和诊断方法的研究有重要意义。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白B细胞表位
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白B细胞抗原表位预测
- 2012年
- 为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推导的氨基酸序列,与绵羊肺腺瘤病毒代表株JSRV21(AF105220)和JSRVJS7(AF357971.1)的囊膜蛋白氨基酸序列比较同源性均为99.5%。
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病B细胞抗原表位NM囊膜蛋白GENBANK
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立
- 绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)是绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)的病原,绵羊肺腺瘤逆转录病毒囊膜蛋白(Env)具有转化...
- 刘月刘淑英张宇飞孙晓林
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的评价和初步应用
- 实验室建立的检测绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)囊膜蛋白(Env)的双抗体夹心ELISA方法进行敏感性、特异性、重复性的评价,检测临床样品,将该方法初步应用于临床实践,分别将羊的主要常见疫病(羊布病,口蹄疫,小反刍兽疫,羊痘,...
- 刘月刘淑英张宇飞孙晓林
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白多克隆抗体
- 绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
- 为了制备抗绵羊肺腺瘤病毒(Jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)囊膜蛋白(ENV)胞质尾区(CT)的单克隆抗体,利用生物信息学分析绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白氨基酸序列,根据分析结果合成多肽,将此多...
- 刘月刘淑英张宇飞孙晓林
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白单克隆抗体基因鉴定
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的原核表达
- 为了获得特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的多克隆抗体。利用DNAStar-Protean软件分析绵羊肺腺瘤病毒内蒙毒株囊膜蛋白的氨基酸序列,预测其囊膜蛋白线性B淋巴细胞优势抗原表位,在线分析囊膜基因原核表达稀有密...
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 文献传递
- 绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白B细胞抗原表位预测
- 为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推...
- 刘月张宇飞张亚坤孙晓林刘淑英
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白双抗体夹心ELISA抗原表位
