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赖型钩端螺旋体外膜蛋白Loa22诱导细胞凋亡Ca^(2+)信号通路机制: 2010年; 吴秉婷孙湛李道坤鲍朗; 关键词：赖型钩端螺旋体细胞凋亡细胞内游离钙成熟肽流式细胞仪检测钙调素

赖型钩端螺旋体溶血素HlyX对血管内皮细胞通透性的影响: 2011年; 目的:克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基因hlyX,观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)通透性的影响,并初步探讨其机制。方法:将hlyX基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-hlyX,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-HlyX融合蛋白,并作亲和层析纯化。采用生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定目的蛋白对HUVECs单细胞层通透性的影响,并以流式细胞术及Ho-echst 33258荧光染色方法检测其作用于HUVECs后的细胞凋亡率。结果:成功构建了重组质粒pET-hlyX并高效表达出Trx-HlyX融合蛋白;与对照组相比较,蛋白Trx-HlyX作用于HUVECs后,明显增加其通透性(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论:重组质粒pET-hlyX高效表达出Trx-HlyX融合蛋白,纯化后的融合蛋白对HUVECs通透性有影响,且对HUVECs具有细胞毒性作用。; 孙湛吴秉婷李道坤鲍朗; 关键词：钩端螺旋体通透性人脐静脉内皮细胞

赖型钩端螺旋体外膜蛋白Loa22诱导细胞凋亡Ca2+信号通路机制: 目的:探讨赖型钩端螺旋体外膜蛋白Loa22对人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)[Ca]影响造成的细胞凋亡,初步揭示该蛋白作用细胞可能的信号机制。方法:采用特异阻断剂U73122预处理A549,阻断PLC-γ1激活细胞内Ca释...; 吴秉婷孙湛李道坤鲍朗; 文献传递

赖型钩端螺旋体OmpA外膜基因Loa22重组卡介苗的构建及其免疫蛋白表达被引量：1: 2010年; 目的以赖型钩端螺旋体外膜蛋白A(OmpA)膜蛋白基因Loa22去信号肽基因片段构建重组卡介苗并对其免疫蛋白进行表达分析。方法以赖型钩端螺旋体56601株全基因组DNA为模板,PCR扩增出Loa22成熟肽基因片段,与大肠杆菌-结核分枝杆菌穿梭整合质粒pMV361一起分别经过双酶切,连接,转化。筛选鉴定出阳性重组质粒rpMV361-loa22,电转化入BCG,经筛选鉴定后,热诱导表达,通过SDS-PAGE及Western Blotting鉴定其表达产物。分别用BCG、rBCG-pMV361、rBCG-loa22、Loa22蛋白、灭活全钩体免疫小鼠两次后,脱臼处死小鼠分离脾淋巴细胞,XTT比色法检测体外脾淋巴细胞增殖活性。结果PCR扩增获得516 bp的片段,成功构建重组穿梭质粒rpMV361-loa22,经电转化构建重组卡介苗成功,热诱导表达出相对分子质量约19×103特异条带。体外脾淋巴细胞增殖实验证实rBCG-loa22可引起细胞反应,其增殖活性与BCG组和rBCG-pMV361组相比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了赖型钩端螺旋体重组卡介苗rBCG-loa22并高效表达具有免疫学活性的外膜蛋白Loa22,为新一代钩端螺旋体疫苗研究打下了基础。; 李道坤鲍朗张英孙湛; 关键词：赖型钩端螺旋体外膜蛋白A 重组卡介苗免疫保护

赖型钩端螺旋体OmpA外膜蛋白Loa22通过Ca^(2+)信号通路介导A549细胞凋亡被引量：1: 2011年; 目的研究赖型钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白Loa22通过Ca2+信号通路对细胞凋亡的影响,探讨该基因在钩体黏附侵袭细胞并诱导其凋亡过程中可能的信号传导机制。方法以人肺腺上皮细胞(A549)为模型,用100μg/mL纯化Loa22成熟肽作用于细胞24 h,检测细胞凋亡及细胞内游离钙浓度([Ca2+]i),观察F-actin细胞骨架变化,检测钙调素(CaM)mRNA表达水平。同时设磷脂酶C(PLC)特异阻断剂U73122预处理+Loa22成熟肽组,观察上述指标变化。结果 Loa22成熟肽作用A549后,细胞凋亡率升高,并诱导[Ca2+]i增加,CaMmRNA表达水平及乳酸脱氢酶(LDH)活性上升,F-actin细胞骨架重排。而预先用U73122预处理后,细胞凋亡率、[Ca2+]i、CaMmRNA和LDH活性均降低(P<0.01),F-actin细胞骨架重排程度减轻。结论 Loa22成熟肽通过PLC信号通路触发细胞[Ca2+]i升高,导致F-actin细胞骨架重排,从而引发细胞凋亡,提示该基因参与钩体侵袭细胞引发细胞凋亡病理过程,可能是致病性钩体的一个重要毒力相关基因。; 吴秉婷鲍朗孙湛李道坤张英; 关键词：赖型钩端螺旋体细胞凋亡钙调素

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孙湛