黄俊琼 作品数:52 被引量:157 H指数:8 供职机构: 遵义医学院附属医院 更多>> 发文基金: 贵州省优秀科技教育人才省长资金项目 国家自然科学基金 贵州省科学技术基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达CCL2的影响 被引量:4 2015年 目的通过体外实验研究IL-31对肺泡Ⅱ型上皮细胞A549表达趋化因子C-C趋化因子配体2(CCL2)的影响,探讨IL-31在支气管哮喘气道炎症中的作用。方法体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞A549,用不同浓度(10、50、100 ng/m L)IL-31作用A549细胞、相同浓度(10 ng/m L)IL-31作用A549细胞不同时间(12、24、36 h),收集细胞,提取细胞总RNA,荧光定量PCR法分析趋化因子CCL2 m RNA的表达情况。结果不同浓度IL-31作用于A549细胞后,趋化因子CCL2的表达较正常未处理组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);10 ng/m L IL-31作用A549细胞后,不同时间段CCL2的表达均增高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-31作用于肺泡Ⅱ型上皮细胞A549后,趋化因子CCL2的表达明显增高,表明IL-31可能诱导肺组织细胞分泌趋化因子参与哮喘气道炎症过程。 高婧 杜青波 谭艳芳 岳欢 黄俊琼关键词:趋化因子CCL2 白细胞介素类 气管炎 负载核糖体蛋白L8的树突状细胞对黑色素瘤的抑制作用 被引量:1 2014年 背景与目的:研究发现核糖体蛋白L8(ribosomal protein L8,RPL8)在黑色素瘤中表达能激活黑色素瘤患者外周血单个核细胞增殖并产生白细胞介素2,提示RPL8可能参与抗肿瘤免疫应答,有望成为抗肿瘤治疗的靶点。本研究通过RPL8蛋白负载树突状细胞(dentritic cell,DC),探讨负载RPL8蛋白的DC对黑色素瘤的免疫效应。方法:原核表达RPL8蛋白,纯化后致敏小鼠骨髓来源DC,流式细胞仪检测DC表面标志,MTT法检测细胞毒性T淋巴细胞对小鼠黑色素瘤细胞的杀伤作用;负载RPL8蛋白DC免疫治疗小鼠后,观察肿瘤体积变化及小鼠生存时间。结果:纯化蛋白经蛋白质印迹法(Western blot)分析见约28×103大小的特异性条带;DC经RPL8及细菌脂多糖(Lipoplysaccharide,LPS)诱导成熟后细胞表面CD11c、CD80、MHC-Ⅰ类、MHC-Ⅱ类分子表达增高,能激活T淋巴细胞,对B16细胞有抑制作用,RPL8-DC组的抑制率在效靶比为30∶1时高达70%,较PBS组和DC组明显增高;负载RPL8蛋白DC免疫治疗小鼠后,肿瘤体积缩小,小鼠的生存期明显延长。结论:负载RPL8的DC对黑色素瘤有生长抑制作用。 李燕 尹令丝 岳欢 黄俊琼 胡永林关键词:树突状细胞 黑色素瘤 免疫治疗 RIBOSOMAL PROTEIN ING4基因对人胃癌细胞SGC-7901生物行为的影响 被引量:11 2008年 目的:研究人ING4对人胃癌细胞SGC-7901的影响,探讨其作用机制。方法:将重组腺病毒质粒pAd-ING4用PacI线性化,经脂质体转染QBI-293A细胞,获得重组病毒Ad-ING4。Ad-ING4感染人SGC-7901细胞,RT-PCR及Western blot分析ING4和p21表达,MTT法检测Ad-ING4对细胞生长的影响,激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡。结果:Ad-ING4感染后,SGC-7901细胞中有ING4 mRNA和蛋白质表达,细胞生长受到明显抑制,与野生型SGC-7901细胞相比,p21表达水平增高,细胞凋亡率明显增高,P<0.05。结论:ING4可通过上调p21表达发挥抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞凋亡的作用。 黄俊琼 孙万邦 张海峰 杨吉成关键词:ING4 AD-ING4 P21 人IL-10真核表达载体构建及其酵母表达和活性鉴定 Interleukin-10(白细胞介素10,IL-10)是美国DNAX研究所的Fiorentino等发现的一种细胞因子。hIL-10可由人体多种细胞产生,具有免疫刺激和免疫抑制双向调节作用,是人体免疫系统的中枢免疫分子... 陈富超 孙万邦 封建凯 杜联峰 黄俊琼 罗军敏 宋明英文献传递 重组hIL-10质粒构建及其在毕赤酵母SMD1168中的表达和纯化 被引量:16 2010年 构建重组hIL-10真核表达载体,探索在毕赤酵母中的表达,为进一步研究hIL-10生物学功能及临床应用奠定基础。PCR扩增目的基因hIL-10cDNA,经EcoRI/XbaI双酶切后,将其亚克隆至同样双酶切的载体pPICZaA中,构建表达质粒pPICZaA-hIL-10;电转化法,将其转入毕赤酵母SMD1168,甲醇诱导Mut+型转化子基因表达;对目的蛋白进行检测及纯化。扩增出了目的基因hIL-10cDNA,重组质粒pPICZaA-hIL-10经酶切鉴定和序列测定正确;表达产物经SDS-PAGE分析在42.0kD处可见较浓染条带,Westernblotting分析可见特异条带;ELISA检测72h上清液中目的蛋白浓度可达1.973mg/L;纯化后目的蛋白纯度达67.0%。实现了重组hIL-10在毕赤酵母SMD1168中的成功表达和初步纯化。 封建凯 孙万邦 陈富超 黄俊琼 罗军敏 杜联峰 姚新生 王胜香关键词:HIL-10 质粒构建 毕赤酵母 基因表达 IL-31单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立 被引量:3 2014年 目的:制备抗人IL-31单克隆抗体,建立ELISA检测体系。方法:采用合成免疫原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备抗IL-31单克隆抗体,用HRP标记单克隆抗体,ELISA和Western blot法检测抗体的亚类、滴度和特异性;采用ELISA技术制备IL-31检测试剂盒,并对自制试剂盒进行评价。结果:获得了两株稳定产生抗IL-31单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体亚类均为IgG3,抗体特异性好,杂交瘤细胞诱生的腹水抗体效价达106。试剂盒检测灵敏度为5.726 pg/ml,检测IL-1、IL-6、TNF-α、RF的P/N值均小于2.1,为阴性,靶抗原IL-31的检测结果为阳性(P/N值=13.76);自制试剂盒检测特应性皮炎血清IL-31水平为(532.83±90.39)pg/ml,对照组血清IL-31水平为(103.31±19.17)pg/ml,皮炎组明显高于对照组,有显著性差异(P<0.001)。结论:成功制备了抗IL-31单克隆抗体,建立的ELISA试剂盒可用于临床检测IL-31。 董革辉 魏培 黄俊琼 杜青波 岳欢 杜文胜 谭艳芳 孙万邦关键词:IL-31 单克隆抗体 28例子宫内膜癌患者sIL-2R和T淋巴细胞亚群检测报告 2000年 黄俊琼关键词:子宫内膜肿瘤 免疫功能 SIL-2R T淋巴细胞亚群 IL-31对小鼠肺泡上皮细胞趋化因子表达的影响 被引量:2 2015年 目的体外分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,探讨IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子的影响。方法酶消化法分离及免疫吸附法纯化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,透射电子显微镜观察细胞形态及结构,免疫荧光技术检测细胞SP-A的表达。用100 ng/ml IL-31作用小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞24 h后提取细胞RNA,PCR芯片检测小鼠肺泡上皮细胞趋化因子及其受体的表达。结果透射电镜观察发现细胞内存在板层小体,呈同心圆状或平行排列;激光共聚焦显微镜观察可见细胞内有黄绿色荧光;小鼠肺泡上皮细胞经100 ng/ml IL-31作用24 h后,基因芯片检测细胞中表达上调的趋化因子和细胞因子基因11个、受体基因8个。结论成功分离培养小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞,IL-31可诱导肺泡上皮细胞表达趋化因子,表明IL-31可通过诱导趋化因子参与气道炎症反应。 岳欢 高婧 江涛 高雅倩 黄俊琼关键词:肺泡上皮细胞 趋化因子 基因芯片 以CpG为佐剂的人IL-24多克隆抗体的制备 2007年 目的:采用在原核表达系统表达的人IL-24蛋白及人IL-24真核重组质粒免疫新西兰兔,制备兔抗人IL-24多克隆抗体。方法:利用IPTG诱导hIL-24在大肠杆菌中表达,纯化hIL-24重组蛋白,纯化后的蛋白经SDS-PAGE分析,同时提取hIL-24真核重组质粒,用以免疫新西兰兔,并以CpG为佐剂制备多克隆抗体。Western-blot鉴定抗体的特异性,ELISA法测定抗体效价。结果:人IL-24经IPTG诱导后可在大肠杆菌中大量表达,表达量占细菌总蛋白的30%,纯化后的蛋白纯度高;原核表达的重组蛋白和真核重组质粒免疫新西兰兔,通过抗体效价测定,获得了抗血清效价达1∶640的多克隆抗体。结论:原核表达的hIL-24蛋白和hIL-24真核重组质粒均能刺激家兔产生抗体,其多克隆抗体的效价较高。 黄俊琼 盛伟华 谢宇锋 缪竞诚 杨吉成关键词:人IL-24 原核表达 多克隆抗体 CPG HFRS疫苗接种与HFRS病毒感染对成人白细胞和血小板影响的比较 1998年 目的HFRS-Ⅰ型灭活疫苗接种与病毒感染对成人白细胞和血小板的影响进行比较。方法收集疫苗接种成人和感染者全血,用显微镜常规计数法检查。结果HFRS疫苗接种组白细胞和血小板几乎在正常范围,而在病毒感染组患者中有90%的白细胞高于正常值,有94%的血小板低于正常值,88%查到异型淋巴细胞。结论HFRS疫苗接种对成人白细胞和血小板无影响,而病毒感染对人的白细胞和血小板有显著影响。 张忆雄 刘兴林 黄俊琼 孙万邦关键词:疫苗 白细胞 血小板 肾综合征出血热