耿伟光
- 作品数：7 被引量：32H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项中国水产科学研究院基本科研业务费专项基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法
- 本发明提供一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法，使用的多重PCR的引物组，其引物的序列分别为SEQ？ID？NO:1-36，本发明采用特殊的多重PCR技术，设计、筛选了9套共36条特异性引物，建立了单管、同步扩增鱼类...
- 史成银王胜强耿伟光黄倢张庆利杨冰李晨刘莉李晋粟子丹
- 文献传递
- 基因芯片检测鱼类病毒的方法建立与优化被引量：6
- 2015年
- 本研究建立并优化了一种基因芯片检测方法，可以同步检测7种重要的海水养殖鱼类病毒（淋巴囊肿病毒、细胞肿大病毒属虹彩病毒、赤点石斑鱼神经坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性胰脏坏死病毒、病毒性出血败血症病毒、传染性鲑贫血病毒）。该基因芯片包含10条病毒特异性的寡核苷酸探针（25~30 mer）分别与病毒的CP、N、VP5、G、NS、MA等基因位点互补。将各病毒基因探针以50% DMSO稀释至20μmol/L，使用PersonalArrayer 16个人点样仪在醛基修饰玻片上点样，然后与Cy3标记的扩增产物在47℃条件下杂交1.5 h，最后在LuxScan 10K扫描仪上采集荧光信号、判断检测结果。初步应用表明，该基因芯片检测方法具有良好的特异性和可靠性，在鱼类病毒高通量检测技术领域有广泛的应用前景。
- 王胜强耿伟光李晋粟子丹史成银
- 关键词：病毒基因芯片鱼类
- 同步检测7种鱼类病毒的扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)方法的建立和应用被引量：1
- 2016年
- 淋巴囊肿病毒(LCDV)、肿大细胞病毒属虹彩病毒(Mega)、赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)是养殖鱼类主要的病毒性病原,危害巨大。为实现这7种病原的高通量、同步检测,本研究在分析这7种病毒基因序列的基础上,设计了9组扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)引物,并对扩增体系中的Taq酶、M^g(2+)、d NTP、Primer Mix浓度及退火温度等参数进行调整和优化,结合基因芯片检测技术,建立了同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法。优化后的Arm-PCR方法第一步PCR体系为:Taq酶(2.5 U/μl)1.0μl,10×PCR Buffer(含20 mmol/L的M^g(2+))5μl,d NTP(各2.5 mmol/L)5μl,10×Primer Mix(各2μmol/L)9μl,模板1μl,dd H2O补足至50μl,退火温度为56℃。研究结果显示,该方法可以在1支反应管内对上述7种病毒的9个致病基因同步进行扩增和检测,检测灵敏度分别为10~1copies/μl(RGNNV、VHSV、ISAV-NS、ISAV-MA)、10~2 copies/μl(LCDV、Mega、IHNV、IPNV)和10~3 copies/μl(大菱鲆红体病虹彩病毒,TRBIV)。该方法特异性强,与半滑舌鳎、石斑鱼、大菱鲆和牙鲆基因组DNA不产生交叉反应。本研究建立的可同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法具有高通量、高灵敏度、高准确性的优势,能有效提高工作效率,在鱼类病毒的筛查和流行病学调查领域有广泛的应用前景。
- 王胜强耿伟光史成银李晋粟子丹
- 关键词：多重PCR
- 半滑舌鳎IRF-7基因的全长cDNA克隆及表达分析
- 2012年
- 本研究克隆了半滑舌鳎干扰素调节因子7(CsIRF-7)cDNA的全长序列,并对该基因进行了结构特征分析,同时还完成了该基因在半滑舌鳎各组织中表达水平的定量分析。结果表明,CsIRF-7基因cDNA全长为1957bp,其中包含48bp的5′-UTR、1302bp的ORF和607bp的3′-UTR。CsIRF-7 cDNA编码一个由433个氨基酸残基组成的多肽。氨基酸序列比对结果表明,CsIRF-7多肽与脊椎动物IRF-7相似,存在高度保守的3个结构域:DNA结合域(DNA binding domain,DBD)、干扰素相关区(IRF associated domain,IAD)和丝氨酸富含区(Serine-rich domain,SRD)。全长氨基酸序列同源性分析发现,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7同源性较高,与4种硬骨鱼类的同一性和相似性分别介于48.5%～73.6%和65.4%～83.8%之间;其中与牙鲆的同一性和相似性最高,分别为73.6%和83.8%;而与哺乳类和鸟类IRF-7的同源性较低,其同一性和相似性分别仅为30.3%～32.2%和46.5%～52.5%。系统进化分析表明,CsIRF-7与硬骨鱼类的IRF-7聚为一类,并与其他脊椎动物的IRF-7和IRF-3共同组成了脊椎动物IRF-3亚家族。实时荧光定量PCR检测结果显示,CsIRF-7基因在半滑舌鳎的肝、肾、脾、血细胞、鳃、肠和心脏等7种检测的组织中均有表达,在肠中表达量最高,而在肝、鳃和血细胞中表达量相对较少。
- 刘万建史成银宋展耿伟光李赟黄倢
- 关键词：半滑舌鳎POLY基因克隆
- 一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法
- 本发明提供一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法，使用的多重PCR的引物组，其引物的序列分别为SEQ？ID？NO:1-36，本发明采用特殊的多重PCR技术，设计、筛选了9套共36条特异性引物，建立了单管、同步扩增鱼类...
- 史成银王胜强耿伟光黄倢张庆利杨冰李晨刘莉李晋粟子丹
- 文献传递
- 锦鲤摩氏摩根氏菌的分离鉴定与药敏性研究被引量：19
- 2013年
- 为鉴定2009年山东某养殖场锦鲤病病原,本研究从病鱼体内分离到3株优势菌,经回归感染实验证实编号为A400502的分离株为该病的致病菌。该菌为革兰氏阴性杆菌,周生鞭毛,大小为0.5μm～0.7μm×1.0μm～1.5μm。其生化特征为鸟氨酸脱羧酶、尿素酶、酚红反应阳性,赖氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶阴性。利用16S rDNA序列分析和比对结果构建的系统发育树表明,该菌与登录号为EF455493的摩氏摩根氏菌(Morganella morganii)的同源性高达99%,因此将该菌鉴定为摩氏摩根氏菌。26种药物的敏感实验结果表明,该分离株对复达欣、庆大霉素、新霉素等11种药物高度敏感。
- 韩娜娜刘万建耿伟光黄倢史成银
- 关键词：锦鲤RDNA药物敏感
