李晋
- 作品数：12 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法
- 本发明提供一种可同步检测7种鱼类病毒的多重PCR方法，使用的多重PCR的引物组，其引物的序列分别为SEQ？ID？NO:1-36，本发明采用特殊的多重PCR技术，设计、筛选了9套共36条特异性引物，建立了单管、同步扩增鱼类...
- 史成银王胜强耿伟光黄倢张庆利杨冰李晨刘莉李晋粟子丹
- 文献传递
- 一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法
- 本发明提供一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法，即在鱼类神经坏死病毒核酸链3′末端设计反转录引物P，在5′末端设计PCR引物对F/R。臭氧处理鱼类神经坏死病毒后，病毒核酸链3′端断裂则不能启动反转录，5′端或...
- 史成银黄倢李晋张庆利杨冰刘莉
- 文献传递
- 基因芯片检测鱼类病毒的方法建立与优化被引量：6
- 2015年
- 本研究建立并优化了一种基因芯片检测方法，可以同步检测7种重要的海水养殖鱼类病毒（淋巴囊肿病毒、细胞肿大病毒属虹彩病毒、赤点石斑鱼神经坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、传染性胰脏坏死病毒、病毒性出血败血症病毒、传染性鲑贫血病毒）。该基因芯片包含10条病毒特异性的寡核苷酸探针（25~30 mer）分别与病毒的CP、N、VP5、G、NS、MA等基因位点互补。将各病毒基因探针以50% DMSO稀释至20μmol/L，使用PersonalArrayer 16个人点样仪在醛基修饰玻片上点样，然后与Cy3标记的扩增产物在47℃条件下杂交1.5 h，最后在LuxScan 10K扫描仪上采集荧光信号、判断检测结果。初步应用表明，该基因芯片检测方法具有良好的特异性和可靠性，在鱼类病毒高通量检测技术领域有广泛的应用前景。
- 王胜强耿伟光李晋粟子丹史成银
- 关键词：病毒基因芯片鱼类
- 一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法
- 本发明提供一种评价臭氧破坏鱼类神经坏死病毒核酸链效果的方法，即在鱼类神经坏死病毒核酸链3′末端设计反转录引物P，在5′末端设计PCR引物对F/R。臭氧处理鱼类神经坏死病毒后，病毒核酸链3′端断裂则不能启动反转录，5′端或...
- 史成银黄倢李晋张庆利杨冰刘莉
- 文献传递
- 引起半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)鱼苗大规模死亡的神经坏死病毒病被引量：5
- 2016年
- 2012和2013年,山东某育苗场15–20日龄的半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis Günther)鱼苗出现暴发性大规模死亡,7 d内死亡率高达90%–100%。本研究调查了疾病的发生情况和临床特征,采集病鱼样品进行了组织病理学检查,并运用RT-PCR方法进行了病原的检测和基因序列分析。结果发现,半滑舌鳎鱼苗一般在7月和8月发病,发病时养殖水温为22–24℃。病鱼游泳行为异常,表现为上下翻游、螺旋性游动、全身大幅度波浪状浮动症状,但病鱼体表无出血和溃疡症状。组织病理检查发现,病鱼脑和视网膜组织出现严重的空泡化及坏死。病鱼样品的RT-PCR检测结果全部呈鱼类神经坏死病毒阳性。对得到的RT-PCR产物测序,进行BLAST比对,发现该病毒与鱼类神经坏死病毒的赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)基因型的相似性达98%以上,而与鱼类神经坏死病毒的其他3个基因型:黄带拟鲹神经坏死病毒(Striped jack nervous necrosis virus,SJNNV)、红鳍东方鲀神经坏死病毒(Tiger puffer nervous necrosis virus,TPNNV)和条斑星鲽神经坏死病毒(Barfin flounder nervous necrosis virus,BFNNV)的相似性仅为71%–78%。由此可以判定,本研究发现的引起半滑舌鳎鱼苗大规模死亡的神经坏死病毒为RGNNV基因型,半滑舌鳎也是鱼类神经坏死病毒的天然宿主。该发现在半滑舌鳎疾病防治和鱼类神经坏死病毒的流行机制研究方面都具有重要意义。
- 粟子丹李晋史成银
- 关键词：半滑舌鳎RT-PCR
- 同步检测7种鱼类病毒的扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)方法的建立和应用被引量：1
- 2016年
- 淋巴囊肿病毒(LCDV)、肿大细胞病毒属虹彩病毒(Mega)、赤点石斑鱼神经坏死病毒(RGNNV)、传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、传染性胰脏坏死病毒(IPNV)、病毒性出血败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)是养殖鱼类主要的病毒性病原,危害巨大。为实现这7种病原的高通量、同步检测,本研究在分析这7种病毒基因序列的基础上,设计了9组扩增子拯救多重PCR(Arm-PCR)引物,并对扩增体系中的Taq酶、M^g(2+)、d NTP、Primer Mix浓度及退火温度等参数进行调整和优化,结合基因芯片检测技术,建立了同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法。优化后的Arm-PCR方法第一步PCR体系为:Taq酶(2.5 U/μl)1.0μl,10×PCR Buffer(含20 mmol/L的M^g(2+))5μl,d NTP(各2.5 mmol/L)5μl,10×Primer Mix(各2μmol/L)9μl,模板1μl,dd H2O补足至50μl,退火温度为56℃。研究结果显示,该方法可以在1支反应管内对上述7种病毒的9个致病基因同步进行扩增和检测,检测灵敏度分别为10~1copies/μl(RGNNV、VHSV、ISAV-NS、ISAV-MA)、10~2 copies/μl(LCDV、Mega、IHNV、IPNV)和10~3 copies/μl(大菱鲆红体病虹彩病毒,TRBIV)。该方法特异性强,与半滑舌鳎、石斑鱼、大菱鲆和牙鲆基因组DNA不产生交叉反应。本研究建立的可同步检测7种鱼类病毒的Arm-PCR方法具有高通量、高灵敏度、高准确性的优势,能有效提高工作效率,在鱼类病毒的筛查和流行病学调查领域有广泛的应用前景。
- 王胜强耿伟光史成银李晋粟子丹
- 关键词：多重PCR
- 臭氧对赤点石斑鱼神经坏死病毒RNA破坏效果的评价方法的建立与应用
- 2015年
- 本研究依据赤点石斑鱼神经坏死病毒(Red-spotted grouper nervous necrosis virus,RGNNV)RNA2的序列,在其3′端设计反转录引物,在5′端设计PCR扩增引物,构建了一种可以评价RNA链相对完整性的RT-PCR方法,命名为LR RT-PCR(Left reverse transcript Right amplify RT-PCR),并对该方法的引物浓度、Mg2+浓度、d NTPs浓度、退火温度4个重要参数进行了优化。结果显示,优化后的LR RT-PCR反应体系为:引物浓度0.2μmol/L、Mg2+浓度4 mmol/L、d NTPs浓度0.5 nmol、退火温度60℃。本研究建立的LR RT-PCR方法灵敏度高,可以检出1 pg的RGNNV RNA2标准品;该方法特异性强,与RSIV等鱼类常见病毒、鳗弧菌等常见水产病原菌以及石斑鱼RNA均不产生交叉反应。应用建立的LR RT-PCR方法对臭氧破坏RGNNV RNA2的效果进行评价,发现当臭氧浓度由0.3 mg/L依次增加为0.5、1.0、2.0 mg/L时,LR RT-PCR的扩增产物逐渐减少,直至消失。结果表明,建立的LR RT-PCR方法可以快速、准确地评价臭氧对RGNNV RNA2的破坏效果,适用于养殖场评估臭氧对RGNNV的消毒效果,并对RGNNV进行检测和监控。
- 李晋史成银王胜强粟子丹
- 关键词：RT-PCR臭氧消毒
- 半滑舌鳎病毒性神经坏死病病原的研究
- 2012年8月,某养殖场半滑舌鳎鱼苗发生大规模死亡,死亡率高达100%。患病鱼苗呈现身体畸形弯曲、体色变深以及螺旋性游动的症状,组织病理检查发现病鱼脑部组织空泡化。采用浸泡感染的方式对25日龄和50日龄的半滑舌鳎鱼苗分别...
- 李晋史成银耿伟光王胜强粟子丹黄倢张庆利
- 关键词：半滑舌鳎神经坏死病毒
- 文献传递
- 半滑舌鳎神经坏死病毒病的研究
- 半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）作为一种新兴的海水养殖品种，在我国北方沿海地区快速发展，并实现了工厂化和产业化养殖。由于发展过快，鱼类疾病防控研究不足，我国养殖半滑舌鳎疾病流行日益严重，造成了大量...
- 李晋
- 关键词：半滑舌鳎神经坏死病毒病理学基因组消毒
- 文献传递
- 凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织样品常温保存液的筛选和优化被引量：1
- 2015年
- 以不同浓度乙醇为溶剂,配制不同p H的硫酸铵和乙酸铵饱和溶液,测试其对凡纳滨对虾组织的渗透效应和在常温条件下对RNA的保护作用。因为乙酸铵在乙醇中的溶解度远高于硫酸铵,且其铵离子的摩尔浓度在0-80%的乙醇溶剂中比较稳定。研究结果显示,乙酸铵比硫酸铵能更快渗透到整体的对虾组织中,并达到更高的浓度。50%、70%及以上的乙醇为溶剂的饱和硫酸铵、50%乙醇为溶剂的饱和乙酸铵(p H=6.0)溶液保存RNA的完整性较好,RNA拷贝数较大,半衰期较长。综合分析,推荐50%乙醇的饱和乙酸铵溶液(p H=6.0)作为对虾组织样品的常温保存液,该结果为野外样品采集及常温运输提供了一种有效方法。
- 陈大菾黄倢王海亮李晋
- 关键词：铵盐乙醇常温RNA
