罗坚
- 作品数：46 被引量：117H指数：7
- 供职机构：中国科学院过程工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程理学更多>>
- 人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化被引量：2
- 2022年
- 目的 评价人纤维蛋白原干热病毒灭活效果及灭活前后的质量变化。方法 取3批人纤维蛋白原样品,按样品与病毒9∶1的体积比分别加入Sindbis病毒和脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV),冻干后,于(99.5±0.5)℃下干热灭活30 min。96孔微量细胞病变法测定病毒滴度降低量,考察人纤维蛋白原干热灭活效果;并对干热前/后样品进行可见异物、稳定性、纯度、凝固活力、SDS-PAGE、高效液相分子排阻色谱(high performance liquid chromatography-size exclusion chromatography,HPLC-SEC)、圆二色光谱、荧光光谱、差示扫描荧光(differential scanning fluorimetry,DSF)分析,以评价其质量变化。结果 3批人纤维蛋白原样品干热30 min,Sindbis病毒滴度降低量分别为6.13、5.88、6.00 LgTCID_(50)/0.1 mL,EMCV滴度降低量分别为≥4.94、≥4.68、≥5.00 LgTCID_(50)/0.1 mL。3批人纤维蛋白原样品干热前/后,可见异物、稳定性试验均合格;SDS-PAGE分析可见相对分子质量约65 000、56 000和47 000的目的蛋白条带,未见裂解条带;纯度均值分别为(87.7±0.9)%和(87.7±1.5)%,活力均值分别为(18±0.8)和(18±0.5)s,HPLC纯度均值分别为(86.16±1.60)%和(86.36±0.67)%,最大荧光发射光谱均值分别为(341.9±0.2)和(342.1±0.2)nm,热转变中点温度1(mid point tem-perature of thermal transition 1,Tmid 1)均值分别为(47.84±0.09)和(47.36±0.36)℃,Tmid 2均值分别为(52.34±0.15)和(52.19±0.33)℃,差异均无统计学意义(P> 0.05);α螺旋、β折叠、β转角、无规卷曲结构比例均值差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 干热灭活可对人纤维蛋白原进行有效病毒灭活,灭活后质量未发生变化。
- 谢来峰张学成罗坚张伦王海林马小伟
- 关键词：脑心肌炎病毒
- 超大孔离子交换制备色谱分离纯化高活性凝血因子Ⅷ被引量：9
- 2012年
- 建立了一条从人血浆中分离高活性凝血因子Ⅷ(FⅧ)的纯化工艺。基于FⅧ和介质孔径的尺度比及其对蛋白质活性影响的分析,设计了以超大孔离子交换制备色谱为核心步骤的新型分离纯化工艺。分别进行超大孔离子交换色谱与传统离子交换色谱的条件优化,并对优化工艺所得产品进行了活性检测(底物显色法)和纯度检测(高效凝胶过滤和凝胶电泳)。结果表明,超大孔介质结构不但可以有效地保护蛋白质大分子结构,而且能够大幅度地提高制备色谱的传质速率,从而得到具有高凝血活性的FⅧ产品。FⅧ在超大孔制备色谱过程中的回收率(85%)比传统离子交换制备色谱高4～5倍,产品比活高达154 IU/mg。此外,还研究了超大孔介质的再生程序,采用5个柱体积的1 mol/L NaOH低流速清洗色谱柱,保证了色谱工艺的稳定性。本纯化工艺步骤简单,重现性好,易于放大生产。
- 康丽梅张焱罗坚李由周月芳余蓉苏志国
- 关键词：血浆蛋白分离纯化
- 乳腺生物反应器表达的重组人乳清白蛋白的高效分离纯化被引量：1
- 2011年
- 利用乳腺生物反应器高效地表达重组人乳清白蛋白,但是目标产物分离纯化的难度较大。通过分子模拟计算比较待分离原料中主要蛋白组分的物化性质,包括表面电势和表面疏水性,在此基础上设计了高分辨率、快速的分离纯化工艺。通过硫酸铵沉淀的正交试验条件优化,有效地去除了干扰层析精制过程的IgG杂质,提高了后续疏水层析的稳定性,从而成功地分离开目标蛋白及与其同源的牛乳清白蛋白杂质,得到纯度>95%的rHLA纯品,工艺回收率48.6%。乳糖合成活性和圆二色谱检测结果表明,纯化rHLA具有调节β-1,4-半乳糖苷转移酶活性和天然的空间结构。
- 李由张焱苏海佳罗坚白倩马光辉苏志国
- 关键词：乳腺生物反应器疏水层析同源蛋白质
- 一种分离纯化凝血因子VIII的方法
- 本发明涉及血液制品分离纯化领域，具体地，本发明涉及一种分离纯化凝血因子VIII的方法。所述方法采用超大孔离子交换层析分离含有凝血因子VIII的层析原料，所述方法还包括在超大孔离子交换层析分离前进行粗分离处理的步骤。本发明...
- 张焱苏志国罗坚康丽梅马光辉
- 文献传递
- 一种从乳腺生物反应器表达产物中分离重组人抗体的方法
- 本发明涉及抗体分离纯化领域，具体地，涉及一种从乳腺生物反应器表达产物中分离重组人抗体的方法。该方法包括如下步骤：(1)将乳腺生物反应器所产转基因动物乳液进行脱脂预处理，获得脱脂乳；(2)将所得脱脂乳进行去除酪蛋白处理，获...
- 张焱苏志国罗坚马光辉
- 异源同种乳清蛋白的分离纯化方法
- 本发明一种异源同种乳清蛋白的分离纯化方法，其步骤为：选取含有一种异源同种乳清蛋白的转基因哺乳动物乳液为原料，离心去除脂类和酪蛋白后获得乳清，将所得乳清经预处理去除免疫球蛋白等大分子杂质。将乳清或预处理后的乳清进行疏水作用...
- 苏志国张焱罗坚闭静秀马光辉卫强
- 文献传递
- 一种人纤维蛋白原的制备方法
- 本发明提供了一种人纤维蛋白原的制备方法，包括如下步骤：(1)将人血浆低温乙醇沉淀组分I溶解于提取液中，得到组分I溶液；(2)对步骤(1)得到的组分I溶液进行S/D灭活；(3)将赖氨酸亲和层析介质用平衡液平衡，然后对步骤(...
- 罗坚马小伟苏志国张宝献陈颖李增兰
- 文献传递
- 阴离子交换层析处理对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品的影响被引量：7
- 2019年
- 目的分析在低温乙醇蛋白分离法基础上引入阴离子交换层析(anion exchange chromatography,AEX)纯化工艺处理,对静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量的影响。方法检测并对比分析低温乙醇蛋白分离法及联合AEX纯化工艺制备的静注人免疫球蛋白(pH 4)制品分子量大小分布、抗补体活性(anticomplement activity,ACA)、抗-HBs效价、白喉抗体效价、IgA含量、抗体Fc段生物学活性、IgG亚型分布、N-糖基化类型、蛋白质二级结构和三级结构的异同。结果在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺处理,可大幅度降低静注人免疫球蛋白(pH 4)制品中IgA含量;有利于去除制品中三级结构发生改变的蛋白质;未对制品其他质量指标产生显著影响。结论在低温乙醇蛋白分离法基础上,引入AEX纯化工艺可提高静注人免疫球蛋白(pH 4)制品质量。
- 张学成马小伟安文琪梁雪爽罗坚王承勖吴静娟李光飞
- 关键词：静注人免疫球蛋白IGA
- 实验设计法优化高浓度静注人免疫球蛋白制剂的处方被引量：3
- 2020年
- 目的通过实验设计法优化高浓度(10%)静注人免疫球蛋白(human immunoglobulin for intravenous injection,IVIG)的制剂处方。方法采用单因素试验(包括等电点、二级结构、分子大小分布,转变中点温度4个指标)确定IVIG(10%)的pH范围,同时经国外相关数据和产品质量指标选择IVIG的稳定剂甘氨酸和聚山梨酯80的浓度范围,再采用实验设计法优化IVIG的pH及稳定剂浓度。以转变中点温度为指标,通过单因素试验优化IVIG(10%)的离子强度。结果最佳IVIG(10%)制剂处方为聚山梨酯80:80 mg/L,pH:4. 5,甘氨酸:0. 25 mol/L。最适离子强度为0 mmol/L氯化钠。结论成功优化了IVIG(10%)的制剂处方,可确保制剂的稳定性,提高临床用药安全性。
- 刘亚芳李冠军罗坚张伦张剑涛梁雪爽马小伟张学成
- 关键词：静注人免疫球蛋白聚山梨酯80PH甘氨酸离子强度
- 乳清白蛋白的分离纯化
- 本文采用疏水层析结合凝胶过滤的方法对转基因牛奶中的人源a-LA进行分离纯化研究，不仅有效地解决了传统分离方法中纯度和回收率低等问题，而且实现了人源a-LA和牛源a-LA分离，制备得到500mg人源a-LA，回收率大于80...
- 张焱罗坚闭静秀苏志国
- 关键词：分离纯化疏水层析同源蛋白
