刘怀普 作品数:21 被引量:36 H指数:3 供职机构: 深圳市儿童医院 更多>> 发文基金: 国际科技合作与交流专项项目 广东省自然科学基金 深圳市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
西罗莫司促进TGF-β分泌对小鼠调节性T细胞体外增殖的影响 被引量:1 2013年 目的通过观察西罗莫司或环孢霉素A与CD4+CD25+调节性T细胞((regulatory T cell,Treg)体外共培养对CD4+CD25+Treg增殖情况及对Foxp3和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)的表达的影响,探讨西罗莫司促进TGF-β分泌诱导Treg体外分化和增殖的机制。方法无菌条件下取C57BL/6小鼠脾脏,分离单个核细胞,免疫磁珠分选获得CD4+CD25+Treg,设空白对照组、西罗莫司组、环孢霉素A组,共培养96h。上流式细胞仪检测CD4+CD25+Treg。反转录聚合酶链、酶联免疫吸附试验法检测西罗莫司或环孢霉素A处理后的CD4+CD25+Treg的FoxP3+、TGF-βmRNA表达水平和分泌情况;Western blot分析TGF-β信号通路重要的活化分子Smad蛋白的表达情况,观察其对CD4+CD25+FoxP3+Treg增殖的影响;使用TGF-β中和抗体进一步验证TGF-β在西罗莫司促进CD4+CD25+FoxP3+Treg分化增殖过程中的重要作用。结果与对照组相比,西罗莫司处理的CD4+T细胞分泌的TGF-β水平增加近2.5倍,差异有统计学意义(P<0.01);而环孢霉素A处理的CD4+T细胞分泌的TGF-β水平则有所下降,但与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,环孢霉素A组CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞比例明显降低,差异有统计学意义(41.25%vs.69.22%,P<0.01);西罗莫司组CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞稍有下降,但差异无统计学意义(65.21%%vs.69.22%,P>0.05)。西罗莫司组FoxP3+T细胞的比例明显高于对照组,差异有统计学意义(53.7%vs.40.2%,P<0.05);而环孢霉素A组FoxP3+T细胞比例明显低于对照组,差异有统计学意义(23.6%vs.40.2%,P<0.01)。结论西罗莫司在体外培养促进CD4+CD25+Treg的增殖与生长,而环孢霉素A体外抑制CD4+CD25+Treg的增值与生长。西罗莫司通过诱导TGF-β表达分泌来促进CD4+CD25+FoxP3+Treg的增殖。 麦明杰 陈星权 叶秀娟 朱平 郑少忆 刘怀普 黄晶晶 肖泽周 王全兴 沈攸云 陈寄梅 庄建关键词:西罗莫司 环孢霉素A 调节性T细胞 FOXP3 小鼠 去白细胞冷自体血停搏液减轻婴儿体外循环心脏手术心肌损伤作用的研究 被引量:3 2018年 目的监测婴儿体外循环心脏病手术采用不同停搏液灌注前后不同时间点血清心脏脂肪酸结合蛋白(HHFABP)、肌钙蛋白I(c Tn I)及磷酸肌酸激酶同工酶(CKMB)的变化,探讨去白细胞冷自体血停搏液对减轻婴儿体外循环心脏手术心肌损伤的作用。方法采用临床对照研究,将年龄≤10月;体质量≤8 kg的100例患儿分为去白细胞冷自体血停搏液组(实验组)和冷自体血停搏液组(对照组)。分别于体外循环前及主动脉开放后30 min,1 h,6 h,12 h,24 h检测血清中HHFABP、c Tn I及CKMB的水平,超声检查获得对应时间点的左室射血分数(LVEF)。结果术前实验组和对照组HH-FABP、c Tn I、CKMB及LVEF差异无统计学意义,实验组术后各时间点HH-FABP、c Tn I及CKMB峰值均低于对照组,LVEF值高于对照组,HH-FABP峰值出现在术后1 h,c Tn I及CKMB峰值出现在术后24 h及12 h。结论去除冷自体血停搏液中白细胞可减轻婴儿体外循环心脏直视手术中心肌的损伤。 王元祥 周晓东 孟保英 刘怀普 张程 丁以群关键词:去白细胞 体外循环 肌钙蛋白I 磷酸肌酸激酶同工酶 应用NorwoodⅠ期手术治疗左心发育不良综合征围手术期管理策略的反思 被引量:1 2018年 目的比较左心发育不良综合征经典围手术期管理策略及改进策略,以期获得更理想的治疗方法。方法2010年6月至2017年11月,10例左心发育不良综合征的患婴行经典NorwoodⅠ期手术。按不同手术时间分组。2010年6月至2014年8月5例采用经典围手术期管理策略,为A组,均为男患婴,体质量2.57~3.50kg,出生后29~75天手术,中位时间36天;采用改良BT分流4例,RV-PA分流1例,手术方法包括经典的肺动脉上置入主动脉插管,PTFE补片行升主动脉及主动脉弓重建。2014年8月至2017年11月5例采用修正的围手术期管理策略,为B组,男4例,女1例,体质量2.00-3.10kg,手术时年龄6~22天,中位年龄12天;均采用sidegraft技术行主动脉插管,牛心包补片行升主动脉及主动脉弓重建;术后应用新生JIN育箱、通过调节环境温度调整Qp/Qs,慎用血管活性药物。结果A组术后早期死亡2例;B组1例术后早期死于心包压塞。结论对于左心发育不良综合征患婴,调整围手术期管理策略,寻找适合我国心脏外科医师的治疗方法,可以有效地提高手术成功率。 张程 彭乐 孟保英 王元祥 刘怀普 王鹏程 张青 丁以群关键词:心脏缺损 先天性 左心发育不良综合征 NORWOOD 围手术期 GFAP和MAP_2 mRNA在缺血预处理与单纯缺血大鼠脊髓中的表达差异 被引量:2 2013年 目的探讨GFAP、MAP2mRNA在缺血预处理与单纯缺血的大鼠脊髓中的表达差异。方法将54只200 g雌雄各半的SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)和缺血预处理组(IPC组)3组。采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注模型;Sham组6只,手术开始步骤同其他两组,但不做肾下腹主动脉阻断即缝合伤口;I/R组24只,直视下采用动脉夹夹闭腹主动脉段左肾动脉分支起始处下方5 mm处(即肾动脉下型),仅阻断腹主动脉60 min后开放灌注;而IPC组24只,先阻断腹主动脉5 min,开放5 min,随即阻断腹主动脉60 min后开放灌注。再灌注后1、2、5、10 d时对其各个时间点进行后肢神经行为学评分,同时利用实时定量PCR技术检测预处理对大鼠缺血再灌注后脊髓GFAP、MAP2mRNA表达的影响,用2-△△Ct的方法计算各组脊髓中GFAP、MAP2mRNA的表达倍数。结果 54只大鼠术后全部存活。行为学评分发现与Sham术组比较,各实验组行为学评分均下降,随着再灌注观察时间的延长,各组分值均升高,第5天时评分与Sham组差异无统计学意义。实时定量PCR检测GFAP、MAP2mRNA的表达时发现,I/R组再灌注第2天时MAP2表达显著高于Sham组;IPC组在再灌注1、2 d时MAP2表达高于Sham组,且与同时间点I/R组比较差异有统计学意义;IPC组的MAP2mRNA表达峰值出现的时间较I/R组早,峰值较I/R组高。I/R组仅在再灌注第10天时GFAP mRNA表达高于Sham组,达到峰值;IPC组在再灌注2、5 d时GFAP表达高于Sham组,且第5天时达到峰值;I/R组和IPC组各自不同时间点出现的GFAP mRNA的峰值不存在明显差异。结论 GFAP、MAP2mRNA在不同处理大鼠脊髓中的差异表达,可能与急性缺血再灌注后神经组织可逆性的损伤修复的规律有关。 杨国柱 郭惠明 张晓慎 朱平 范瑞新 范小平 庄建 陈寄梅 刘怀普 黄晶晶关键词:缺血预处理 胶质纤维酸性蛋白 实时定量PCR 低温NMDA受体拮抗剂MK-801逆行灌注对猪脊髓损伤的保护作用 目的:脊髓缺血再灌注损伤造成的截瘫是大血管手术后的灾难性并发症,其发生机制及防治方法仍存在诸多争议,本文将探讨经副半奇静脉逆行灌注低温NMDA受体拮抗剂MK-801对脊髓损伤的中长期保护作用,以期建立一种简便、安全、可靠... 刘怀普关键词:脊髓损伤 缺血再灌注损伤 大血管手术 文献传递 免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4^+CD25^+调节性T细胞的应用研究 被引量:1 2011年 目的研究免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(regu-latory T cells,Treg)的效果。方法将C57BL/6(H-2b)小鼠脾脏剪碎、过滤、去除红细胞后离心洗涤,获得小鼠脾细胞悬液。用Ficoll法分离获得单个核细胞后,通过免疫磁珠阴性加阳性选择两步法分离获得CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-Treg。用流式细胞仪检测所获得CD4+CD25+Treg的纯度,并比较纯化分离前后脾脏CD4+CD25+Treg的比例,用台盼蓝染色后计算CD4+CD25+Treg的细胞存活率,并对分离后的细胞表型进行鉴定。结果免疫磁珠阴性加阳性选择两步法纯化分离后CD4+CD25+Treg的纯度为(88.7±2.9)%,分离前CD4+CD25+Treg的平均比例为11.6%,纯化分离后CD4+CD25+Treg的平均比例为93.7%。细胞存活率为(93.7±4.1)%。与CD4+CD25-Treg相比,CD4+CD25+Treg的CD44表达略有增加(P>0.05),CD45RB的表达明显下降(P<0.05),CTLA-4和Foxp3的表达明显增加(均为P<0.05)。结论使用免疫磁珠两步法分离纯化,能避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+Treg表型的细胞。 黄克力 朱平 卢聪 朱小兰 麦明杰 沈二霞 吴若彬 刘怀普 黄晶晶 王巍 谢波关键词:CD4+CD25+调节性T细胞 流式细胞术 小鼠 基于保留肺动脉瓣的法洛四联症矫治手术时机 被引量:2 2020年 目的从保留肺动脉瓣的角度探讨法洛四联症根治术的手术时机.方法回顾性分析深圳市儿童医院2015年6月至2019年5月间行法洛四联症根治术的患儿围术期资料,通过应用受试者操作特征曲线(ROC曲线)寻找保留肺动脉瓣的年龄临界值;按照此年龄的临界值将患儿分为两组,比较两组患儿术后机械辅助通气时间、住院天数、ICU滞留天数、急诊手术率、住院死亡比例、出院31天再入院率、肺动脉瓣保留率和快通道率等指标.结果按照纳入标准共纳入法洛四联症患儿105例,其中男67例,女38例,体质量4.2~21.5 kg,中位数7.9 kg,年龄1.3~99.1个月,中位月龄8.8个月.应用ROC曲线确定保留肺动脉瓣的年龄临界值为5.5~5.6个月(敏感度0.90,特异度0.58,95%CI:0.588~0.792).以年龄6个月为界值,将法洛四联症患儿分组后比较.≥6个月组患儿与<6月组患儿术后机械辅助通气时间、ICU滞留天数、急诊手术率、住院死亡比例、出院31天再入院率和快通道率差异均无统计学意义(P>0.05);<6个月组患儿肺动脉瓣保留率高于≥6月组患儿(65.52%对30.26%,P<0.01),住院天数少于≥6个月组患儿(11天对15天,P<0.01).术后随访中位数14.5个月(0.3~54.9个月),至末次随访时无再次手术干预,两组患儿随访时间、肺动脉瓣反流程度及残余梗阻差异均无统计学意义(P>0.05).结论婴儿早期实行法洛四联症根治手术效果满意,能提高手术中保留肺动脉瓣概率;建议法洛四联症择期治疗的年龄提前至6个月以内. 提运幸 王元祥 刘怀普 王鹏程 黄骏荣 丁以群关键词:法洛四联症 婴儿 外科治疗先天性冠状动脉瘘53例体会 被引量:5 2012年 目的:总结53例先天性冠状动脉瘘患者外科治疗的经验。方法:2006年1月至2011年4月共收治先天性冠状动脉瘘患者53例,其中男39例,女14例,年龄1d~65岁,右冠状动脉动脉瘘28例,左冠状动脉瘘25例,漏入右房、右室、肺动脉、左房、左室分别为16、13、16、1、7例。单纯性冠状动脉瘘26例,余27例合并有其他心脏外科疾病,手术均在体外循环下进行。结果:死亡2例,1例术后超声心动图检查发现少量残余漏,2例心电图检查仍存在ST-T改变,余48例痊愈。随访2个月~5年,仅1例患者有轻微劳累后气促症状。结论:外科治疗先天性冠状动脉瘘是相对安全和有效的,当合并有其他严重基础疾病和复杂心脏畸形时,手术适应证的选择需谨慎。 黄克力 朱平 吴若彬 郑少忆 肖学钧 卢聪 郭惠明 范瑞新 刘怀普 黄晶晶 王世强关键词:血管畸形 冠状动脉 外科治疗 先天性冠状动脉瘘 应用膨体聚四氟乙烯(ePTFE)人工带瓣血管重建右心室流出道的Ross手术治疗儿童主动脉瓣疾病 被引量:1 2021年 目的总结采用ePTFE人工带瓣血管构建右心室流出道的自体肺动脉瓣行主动脉瓣置换术(Ross手术)治疗儿童主动脉瓣狭窄和/或关闭不全的临床经验。方法回顾分析我中心2015年至2020年采用Ross手术治疗的8例主动脉瓣狭窄和/或关闭不全患儿的临床资料,年龄0.5~13.2岁,术前诊断主动脉瓣狭窄4例、主动脉瓣狭窄伴关闭不全3例、感染性心内膜炎累及主动脉瓣1例。手术主要分三步进行:获取自体肺动脉瓣;切除病变的主动脉瓣,采用主动脉根部移植法将自体肺动脉瓣移至主动脉瓣;利用手工缝制的ePTFE人工带瓣血管重建右心室流出道。结果6例右心室流出道采用手工缝制ePTFE人工带瓣血管重建,2例采用人工单瓣,无手术死亡,全部患者治愈出院。随访1~36个月,中位随访时间12个月,无远期死亡,无瓣膜相关并发症。随访超声心动图检查提示1例主动脉瓣中量反流,1例少-中量反流,其余为少量反流;肺动脉瓣中2例采用人工单瓣的少量反流,其余采用手工缝制的ePTFE人工带瓣血管肺动脉瓣少量反流或微量反流;所有患者末次随访主动脉瓣跨瓣峰值压差(6.63±3.46)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。左心室流出道及主动脉瓣环在术后会稍缩小(1例Ross-Konno手术患者直径增大),但随着年龄的增长瓣环直径均呈增长趋势,目前暂无需要再次干预者。结论Ross手术用于治疗主动脉瓣膜疾病安全,血流动力学效果好,自体肺动脉具有生长潜能,尤其适用于儿童及年轻患者。用于重建右心室流出道的手工缝制ePTFE人工带瓣血管短期内抗反流功能良好,或可做为同种/异种带瓣管道替代材料,但仍需更长时间的随访及更多的病例积累。 王鹏程 张程 梁穗新 孟保英 刘怀普 黄骏荣 吴文智 吴柯叶 丁以群关键词:主动脉瓣疾病 ROSS手术 循环支持的体外膜氧合技术在儿科重症疾病中的应用 被引量:1 2022年 目的 总结循环支持的体外膜氧合(ECMO)技术在儿科重症疾病中临床应用的经验。方法 收集本院ECMO团队于2017年1月至2020年12月采用循环支持的ECMO治疗的14例儿科重症病例,回顾性分析与总结其临床资料。结果 共14例行循环支持ECMO治疗的患儿,其中男性6例(42.9%);置管时平均年龄为(6.9±4.2)岁;平均体重(26.7±13.8)kg;均为静脉-动脉(V-A)ECMO模式;ECMO中位时间为4(2,9)d;套包更换率14.2%,最长套包使用时间26 d;成功撤机率50%,出院存活率50%;病种:暴发性心肌炎8例,其中2例死亡;休克3例,其中2例死亡;体外心肺复苏2例,均死亡;先天性心脏病术后1例,死亡。出现并发症包括静脉血栓2例,肢端缺血1例,颅内出血1例。结论 ECMO辅助治疗可以为循环衰竭的重症患儿提供有效的循环支持,暴发性心肌炎患儿整体成活率及预后较好,但对于合并其他系统疾病的病情较复杂的患儿,成活率及预后较差。 吴柯叶 孟保英 周星 张设设 吴文智 刘怀普关键词:体外膜氧合 暴发性心肌炎