金晶
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
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- 利用RSV的“抓帽”鉴定TYLCV的转录起始位点
- 多分体负义RNA病毒（segmented negative-sense RNA viruses,sNSV）普遍采取"抓帽机制"来合成含帽子结构的信使RNA（mRNA）,即它们从寄主mRNA抓取一段10～20个碱基的帽子序...
- 林文忠丘萍金晶刘顺民吴然林晨杜振国吴祖建
- 关键词：水稻条纹病毒番茄黄化曲叶病毒转录起始位点
- 利用RSV的“抓帽”鉴定TYLCV的转录起始位点
- 多分体负义RNA病毒(segmented negative-sense RNA viruses,sNSV)普遍采取'抓帽机制'来合成含帽子结构的信使RNA(mRNA),即它们从寄主mRNA抓取一段10～20个碱基的帽子序...
- 林文忠丘萍金晶刘顺民吴然林晨杜振国吴祖建
- 关键词：水稻条纹病毒番茄黄化曲叶病毒转录起始位点
- 文献传递
- 基于粗提物的水稻条纹病毒体外“抓帽”体系
- 2020年
- 【背景】布尼亚病毒目(Bunyavirales)和正黏病毒科(Orthomyxoviridae)病毒从帽子结构下游10—20个碱基处切割寄主mRNA,以5′端切割产物(帽子序列)作为引物起始自身基因组的转录,生成含一段异源帽子序列的病毒mRNA,这一过程称为“抓帽”。水稻条纹病毒(rice stripe tenuivirus,RSV)是一种布尼亚病毒,其“抓帽”机制还不甚清楚。【目的】研究RSV粗提物能否从溶液中的外源mRNA“抓帽”,以建立一种便捷的体外体系,用于解析RSV“抓帽”和转录机制。【方法】以PEG沉淀和超速离心法粗提RSV,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和质谱技术分析粗提物成分。然后取少量粗提液,加入富含珠蛋白(globin)mRNA的兔网织红细胞裂解液(rabbit reticulocyte lysate,RCL)和合适浓度的金属离子配制体外“抓帽”体系。待体外反应结束,提取体系中总RNA,以巢式RT-PCR扩增含珠蛋白-αmRNA帽子序列的RSV mRNA,并对其进行克隆,通过序列分析比较RSV体外“抓帽”与体内“抓帽”的异同。【结果】从100 g感染RSV的水稻叶片获得RSV粗提液2 mL。除RSV病毒粒子外,粗提液中还含核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶等多种叶绿体蛋白。取2μL粗提液,加入4 mmol·L-1 MgCl2、2 mmol·L-1 NTP、0.8 U·μL-1 RNA酶抑制剂和8μL RCL,配成20μL反应体系,30℃孵育1.5 h后,巢式RT-PCR扩增到了目的条带,表明RSV粗提物能切割溶液中的珠蛋白-αmRNA,并利用其帽子序列合成自身mRNA。在反应体系中加入帽子结构类似物m7G(5′)ppp(5′)G后进行相同反应,目的条带变淡,且变淡程度与所加入m7G(5′)ppp(5′)G的浓度成正比,表明识别帽子结构是RSV从溶液中切割利用珠蛋白-αmRNA的前提。对巢式RT-PCR产物克隆和测序后分析发现,与在体内的情况类似,RSV从帽子结构下游的A或C处切割珠蛋白-αmRNA,得到的帽子序列与病毒模板链3′端的U或G配对后引发转录。在利用珠蛋白-αmRNA帽子序列�
- 林文忠吴然金晶丘萍张洁吴祖建杜振国
- 关键词：水稻条纹病毒体外转录
- 福建省农户植物保护资金的供给与需求分析
- 植物保护是农业生产的重要组成部分，是保护国家农业生产安全、保障农产品质量安全、减少环境污染、维护人民群众健康、促进农业可持续发展的重要科学支持，有效的植物保护措施为农业增产、农民增收做出了重大贡献。农户作为农业生产的直接...
- 金晶
- 关键词：农业生产
- 文献传递
