袁华敏
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件被引量：6
- 2006年
- 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌细胞基因表达调控
- 人胃癌细胞NGAL基因启动子区TPA核心反应元件
- 本发明涉及基因表达调控，公开了人胃癌细胞NGAL基因启动子区TPA核心反应元件，并将启动子序列逐渐缺失和部分调控元件被修饰的调控序列插入报告基因上游构建了一系列真核表达质粒，转染哺乳动物细胞瞬时表达，确定了人NGAL基因...
- 李恩民袁华敏许丽艳常静霞王子良
- 文献传递
- 人肺癌细胞NGAL基因启动子区转录调控元件
- 本发明涉及基因表达调控，公开了一种人肺癌细胞的NGAL基因启动子区转录调控元件。本发明首次鉴定了人肺癌细胞NGAL基因启动子区，并将5′端序列逐渐缺失和部分调控元件被修饰的启动子序列插入报告基因上游构建了一系列真核表达质...
- 李恩民常静霞许丽艳袁华敏王子良
- 文献传递
- 食管癌细胞NGAL基因-416～+84区段存在TPA反应元件
- 2005年
- 目的本文旨在对NGAL基因启动子区及其附近是否存在TPA反应元件进行研究。方法(1)采用PCR法从食管癌细胞中克隆NGAL基因5′侧翼区416～+84片段,然后分别插入质粒pGLB和pGLE,构建pGLB416和pGLE416荧光素酶报告基因表达载体;(2)将pGLB416和pGLE416分别同pRLTK共转染食管癌细胞EC109;(3)用TPA刺激转染的EC109,检测细胞相对荧光素酶活力,通过相对荧光素酶活力变化判定NGAL基因5′侧翼416～+84区是否存在TPA反应元件,同时进行生物信息学分析。结果无论是pGLB416还是pGLE416,与pRLTK共转染食管癌细胞EC109后,用TPA刺激,与其相应的空载体相比,转染细胞荧光素酶活力均极显著升高(t检验,P<0.01),约分别升高46.82和46.41倍;而TPA刺激组与没有TPA刺激组相比,pGLB416和pGLE416转染EC109细胞荧光素酶活力分别显著升高了5.17倍和7.37倍(t检验,P<0.01)。生物信息学分析显示,NGAL基因5′侧翼416～+84区段至少存在4个潜在的TPA反应元件。结论食管癌细胞NGAL基因5′侧翼416～+84区段存在着TPA反应元件。
- 许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：NGAL基因食管癌细胞基因表达调控
- 肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的顺式作用元件及转录因子的鉴定被引量：6
- 2009年
- 研究发现,质膜-细胞骨架连接蛋白Ezrin在多种肿瘤细胞中异常表达,而且Ezrin的表达上调与肿瘤细胞的移动侵袭相关,但是调控ezrin基因转录的分子机制却不清楚.为了探明ezrin基因的转录调控机制,以肺癌细胞A549为材料,首先采用双荧光素酶报告基因分析系统检测ezrin基因5′侧翼嵌套缺失序列和位点突变序列的转录活性,鉴定肺癌细胞中ezrin基因的基本启动子区以及关键的顺式作用元件Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58).其次,利用凝胶电泳迁移率变动分析证明,肺癌细胞核蛋白提取物能够与ezrin基因含有关键顺式作用元件的DNA序列结合,形成DNA-核蛋白复合物,而且Sp1结合位点和AP-1结合位点与重组蛋白rhSp1和rhAP-1的结合具有位点特异性.最后,利用瞬时转染实验证实,转录因子Sp1和AP-1(由c-Jun和c-Fos组成的异源二聚体)分别通过Sp1结合位点和AP-1结合位点,增强ezrin基因基本转录活性,而且,过表达转录因子Sp1、c-Jun或c-Fos上调了Ezrin蛋白表达.研究确定,肺癌细胞中调控ezrin基因基本转录活性的关键顺式作用元件是Sp1结合位点(-75/-69)和AP-1结合位点(-64/-58),与之作用的转录因子Sp1和AP-1对于ezrin基因的转录激活作用至关重要.
- 高书颖李恩民孟令英崔磊袁华敏杜则澎许丽艳
- 关键词：EZRIN基因转录调控元件转录因子
- 胃癌组织细胞中NGAL基因表达及其调控机制研究
- 近年来,许多研究表明,中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白编码基因NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)是人类的一个重要的肿瘤相关基因,在结肠癌、乳腺癌、胰腺癌、肺癌...
- 袁华敏
- 关键词：NGAL基因胃癌ERK磷酸化生物学功能
- 文献传递
- 食管癌细胞NGAL5′侧翼区存在TPA应答元件
- 2006年
- 在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中,NGAL(neutrophil gelatinase-associated lipocalin)过表达,提示食管癌细胞NGAL转录调控区可能存在TPA应答元件.为了对食管癌细胞NGAL的这一TPA应答元件进行分段定位鉴定,首先将NGAL5′侧翼区不同长度片段-1 431^+84-、1 137^+84、-945^+84、-657^+84、-416^+84和-152^+84等依次插入质粒pGLP,构建NGAL/pGLP系列报告基因荧光素酶表达载体pGLP-1431、pGLP-1137、pGLP-945、pGLP-657、pGLP-416和pGLP-152;然后将上述质粒分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,最后用5 ng/ml的TPA刺激转染的EC109,检测报告基因荧光素酶活力,综合判定报告基因荧光素酶活力变化趋势,并以此对食管癌细胞NGAL5′侧翼区TPA应答元件进行分段定位.实验结果表明,食管癌细胞NGAL5′侧翼-657^-417区段内存在着较强的TPA应答元件.生物信息学分析显示,NGAL5′侧翼-657^-417区段至少存在3个潜在的TPA应答元件,表明有应答TPA刺激的结构基础.这些研究有助于从分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL基因过表达机制.
- 许丽艳李恩民王子良牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：NGAL基因食管癌细胞基因表达调控
