牛永东
- 作品数：31 被引量：108H指数：7
- 供职机构：汕头大学医学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 大鼠法尼酯X受体慢病毒构建及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的:构建大鼠法尼酯X受体(rFXR)慢病毒,为研究FXR在原发性肝细胞癌中的分子机制奠定基础。方法:以pCMX-rFXR(NM_021745.1)为模板,将rFXR克隆到pWPXL表达载体中,酶切及DNA测序鉴定后转染HEK293T细胞,包装重组慢病毒rFXR sh-RNA。Western blot鉴定后,感染Huh7细胞进行功能检测。结果:证实pWPXL-rFXR sh-RNA构建及病毒包装成功;感染Huh7后,rFXR表达明显提高:FXR靶基因SHP和BSEP的表达增加。结论:pWPXL-rFXR sh-RNA慢病毒构建及包装成功,为研究FXR的生物学功能奠定基础。
- 牛永东陈理明吴曼鹏程訸张艳美黄展勤石刚刚
- 关键词：法尼酯X受体慢病毒原发性肝细胞癌
- 新生仔鼠黄曲霉毒素的肾毒性研究被引量：2
- 2014年
- 目的:探讨黄曲霉毒素(AF)B1暴露对新生仔鼠肾脏的影响。方法:CCK-8细胞毒性和动物染毒实验观察AFB1对肾细胞的影响。结果:与对照组比,实验组对HEK293细胞株的细胞毒性不明显,肾组织切片镜下表现为肾小管管腔形状不规则,管壁细胞形态明显异常;被膜下细胞空泡明显,且体质量显著低于对照组(P<0.05)。结论:未经肝脏代谢的AFB1对HEK293的细胞毒性不明显;7μg/kg的AFB1足以引起5日龄新生仔鼠肾脏损伤;并可能会引起小鼠机能代谢失衡,导致体质量减轻。
- 牛永东程訸陈理明荣举吴曼鹏徐涵张艳美石刚刚
- 关键词：黄曲霉毒素肾毒性
- 白桦酯醇对食管癌细胞EC109的抑制作用被引量：13
- 2006年
- 背景与目的白桦酯醇是一种重要的三萜类生物活性分子,本文从白桦树皮中提取获得白桦酯醇纯品,然后研究该生物活性分子抑制食管癌细胞的活性。材料与方法取一定量的白桦树皮干粉,通过乙醇回流,减压浓缩和甲醇-氯仿重结晶等步骤获得白桦酯醇纯品。用不同剂量的白桦酯醇作用于EC109食管癌细胞48h,噻唑蓝(Methylthiazoletetrazolium,MTT)法检测细胞抑制率。结果白桦酯醇作用于食管癌细胞EC109后,EC109细胞形态发生明显改变,细胞抑制率随白桦酯醇浓度的增高而增高,呈现剂量依赖关系。结论白桦酯醇对食管癌细胞EC109有明显抑制活性。
- 蔡唯佳马云青祁逸梅牛永东许丽艳李建新李恩民
- 关键词：白桦酯醇食管癌细胞抗肿瘤活性
- 反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架的影响被引量：14
- 2004年
- 为了研究反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞微丝骨架以及肿瘤细胞生物学行为的影响 ,以不同长度NGAL基因片段反义表达载体和硫代修饰反义寡核苷酸单链片段转染SHEEC食管癌细胞 ,通过G4 18筛选 ,建立一系列旨在封闭SHEEC食管癌细胞NGAL基因表达的亚细胞克隆 .在细胞内F 肌动蛋白 (F actin)及DNA荧光双标记基础上 ,通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜扫描术等技术手段检测封闭反义NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞中F actin和DNA含量、F actin形态结构以及肿瘤细胞生物学行为的变化特征 .结果显示 ,反义封闭NGAL基因表达后 ,SHEEC食管癌细胞F actin的含量明显降低 ,与永生化食管上皮细胞SHEE相近 ,但细胞分裂增殖指数未见明显变化 .表明反义封闭NGAL基因表达对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架有明显影响 ,而对SHEEC食管癌细胞的分裂增殖影响不明显 .激光共聚焦显微镜扫描观测显示 ,反义封闭NGAL基因表达可使SHEEC食管癌细胞F actin分布均匀 ,F actin小体减少 ,细胞间连接重新建立 ,结构较紧密 ,主要形态结构特征与SHEE细胞趋于一致 .提示反义封闭NGAL基因表达可对SHEEC食管癌细胞的微丝骨架F actin产生明显影响 ,推测癌细胞的微丝骨架F
- 林珏龙许丽艳李恩民蔡唯佳牛永东方昆阳熊华淇沈忠英曾毅
- 关键词：微丝骨架F-肌动蛋白NGAL基因细胞周期
- 核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义
- 2014年
- 目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系。方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达。结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5%,且宫颈癌组织中明显低表达。结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物。
- 郑燕珊吴曼鹏倪仰鹏陈理明程訸徐涵牛永东
- 关键词：PXR宫颈鳞癌肿瘤发生
- 食管癌相关功能未知基因的电子克隆延伸与ncRNA的发现被引量：3
- 2008年
- 背景与目的:运用电子克隆等生物信息学方法研究筛查出的48个与食管癌相关功能未知的DNA序列片段,为食管癌相关研究提供指导。材料与方法:以48个DNA序列片段为核心,运用BioEdit建立本地数据库;通过电子克隆的方法对48个DNA序列中功能未知的基因片段进行序列延伸;通过BLAST同源分析搜索48个基因的内含子以及上下游基因间隔区中存在的非编码RNA(noncodingRNA,ncRNA)。结果:48个DNA序列中功能未知的基因片段通过电子克隆的方法平均能够延伸190bp以上;在48个基因的内含子以及上下游基因间隔区存在着与已知ncRNA相似性很高的片段。结论:运用电子克隆的方法可以使某些食管癌相关功能未知基因的序列得以明显延伸;一些食管癌相关基因所在的染色体区段存在着某些与ncRNA高度相似的片段,这提示我们,ncRNA可能参与食管癌的发生过程,其具体功能有待深入研究。
- 吴炳礼许丽艳应晓敏牛永东李伍举李恩民
- 关键词：生物信息学非编码RNA电子克隆
- 人食管癌cDNA酵母杂交文库的构建与鉴定及其应用被引量：5
- 2003年
- 以往在研究由促癌物 12 o 十四烷酰佛波醇 13 乙酯 (12 o tetradecanoylphorbol 13 acetate,TPA)诱导的人永生化食管上皮细胞恶性变中基因的差异表达情况时 ,曾获得中性粒细胞明胶酶相关lipocalin (neutrophilgelatinase associatedlipocalin ,NGAL)等新的食管癌癌变相关基因 .为深入研究这些癌变相关基因在食管癌中以蛋白质 蛋白质或蛋白质 DNA相互作用为基础的功能网络调控关系 ,建立了一个食管癌cDNA酵母杂交文库 .采用Trizol试剂从一种新的人食管癌细胞 (SHEEC ,由人永生化食管上皮细胞转化而来 )中提取细胞总RNA ,采用OligotexmRNAKit从细胞总RNA中制备PolyA+ mRNA ,采用SuperScriptTM ChoiceSystemForcDNASynthesisKit合成cDNA ,以PolyA+ mRNA为探针 ,化学发光法监测cDNA合成的质量 ,以 pGADT7为载体构建了SHEEC细胞的cDNA酵母杂交文库 .文库的滴度为 1 19× 10 9cfu/ml,重组片段大小主要集中在 0 5～6 0kb ,重组率为 5 0 % .在此基础上 ,应用酵母单杂交技术手段对该文库中的NF κB元件结合因子进行了筛选 ,在SD/ his/ leu/[+15mmol/L 3 AT ]缺陷培养基平板上共获得了约 36 0个单克隆 .按照平板上酵母单克隆直径的大小 ,选择直径大于 2mm者 91个 ,提取质粒进行酶切鉴定和一对一酵母单杂交验?
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳韩溟吴炳礼张灿沈忠英曾毅
- 关键词：人食管癌CDNA文库
- 从食管癌细胞系SHEEC中克隆调控NGAL基因的NF-κB因子的初步研究
- 近年来,有研究发现NGAL(neutrophil gelatinase—associated lipocalin)可能是人类的一新的癌基因,在食管上皮细胞癌变等过程中显著过表达,但表达调控机制不清。序列分析发现,在NGA...
- 牛永东
- 关键词：酵母单杂交系统核因子NF-ΚBNGAL基因食管癌
- 文献传递
- NGAL基因5’侧翼区启动子区的克隆与鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的对NGAL(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin)基因5′侧翼区的转录调控启动子区进行分段定位鉴定。方法将NGAL基因5’侧翼区-416^+84和-152^+84两个区段分别克隆至专门用于研究启动子的报告基因表达载体pGL3-Enhancer(pGLE)中,构建表达载体pGLE-416和pGLE-152;然后将pGLE-152和pGLE-416分别与pRL-TK载体共转染HeLa细胞、EC109细胞和Vero细胞,通过检测相对荧光素酶活力,确认这些NGAL基因片段中是否含有启动子元件。结果与pGLE相比,pGLE-152在上述三种细胞中的相对荧光强度均明显增强(P<0.05),且在不同的细胞中增强的幅度明显不同。结论NGAL基因的启动子位于-152^+84区段内,启动子的强弱具有细胞特异性,这可能与增强子的协同作用相关联。
- 黄瑞燕许丽艳许晓玲方栩佳陈波牛永东李恩民
- 关键词：启动子NGAL肿瘤细胞基因表达调控荧光素酶
- 食管癌细胞NGAL基因-152～-60区段存在TPA反应元件被引量：6
- 2006年
- 以往研究发现,在TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(neutrophilgelatinase-associatedlipocalin,NGAL)基因过表达,但过表达机制不明.最近研究提示,食管癌细胞NGAL启动子及其邻近区域可能存在着TPA反应元件.为了对NGAL的这一TPA反应元件进行更准确定位,采用PCR法结合嵌套缺失实验从食管癌细胞中克隆了NGAL5′侧翼区-152～+84、-140～+84、-78～+84、-59～+84、-50～+84、-41～+84、-37～+84、-29～+84和-10～+84等片段,并定向插入pGLB、pGLP或pGLE等萤火虫荧光素酶报告基因表达载体中,构建了pGLB-152、pGLP-152、pGLE-152、pGLB-140、pGLB-78、pGLB-59、pGLB-50、pGLB-41、pGLB-37、pGLB-29和pGLB-10等系列报告基因表达载体.将上述报告基因表达载体分别同pRL-TK共转染食管癌细胞EC109,并用TPA刺激,检测TPA刺激转染EC109的相对荧光素酶活力,综合判定NGAL-152～+84区不同长度片段的TPA反应性,对NGAL启动子区的TPA反应元件给予进一步分段定位.结果表明,NGAL启动子区的TPA反应元件位于-152～-60区段,而且应答TPA刺激的反应能力很强.生物信息学分析结果显示,NGAL启动子区所存在的TPA反应元件很可能是一种新结构类型.研究说明,NGAL在DNA序列上有应答TPA刺激的结构基础,将有助于深入到分子水平揭示TPA诱导永生化食管上皮细胞癌变中NGAL过表达机制,也有助于进一步认识TPA信号细胞内传递途径网络在肿瘤发生发展中的作用.
- 许丽艳李恩民牛永东蔡唯佳袁华敏常静霞沈忠英曾毅
- 关键词：食管癌细胞基因表达调控
