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免疫剂量和母源抗体对禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫效力的影响被引量：6: 2004年; 利用表达 H 5亚型禽流感病毒 (AIV)血凝素基因的重组鸡痘病毒 (r FPV- HA)以不同剂量免疫 1日龄 SPF鸡、有或无母源抗体 (FPV、AIV H5)的商品鸡 ,并于免疫后 2 1d利用同亚型 AIV通过肌肉注射进行致死性攻击 ,通过检测免疫后 HI抗体应答、比较攻毒后发病率和死亡率评价免疫剂量和母源抗体对 r FPV- HA免疫效力的影响。结果发现 ,免疫后 2 1d,15 %～ 2 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可检出 HI抗体 ,而含母源抗体商品鸡检测不到 HI抗体。利用H5亚型 AIV致死性攻击后 ,10 3～ 10 6 PFU的 r FPV- HA可保护 95 %～ 10 0 %的 SPF鸡和无母源抗体商品鸡抵御强毒攻击 ,使之免于发病和死亡 ;而不同剂量 r FPV- HA接种的含母源抗体商品鸡有 80 %～ 90 %发病和死亡。结果表明 ,在较宽的免疫剂量范围内 ,r FPV- HA对 SPF鸡和无母源抗体商品鸡可提供良好的保护 ,显示出一定的应用前景 ;母源抗体影响 r FPV- HA诱导的免疫应答 ,且提高免疫剂量亦不能克服其干扰作用 ,这提示在实际应用中需优化免疫程序 ,避免母源抗体干扰。; 贾立军张艳梅彭大新刘红旗程坚张如宽李秀梵; 关键词：H5亚型禽流感病毒重组鸡痘病毒免疫剂量母源抗体免疫效力

共表达MDV糖蛋白B和鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒的构建被引量：7: 2002年; Recombinant fowlpox viruses(rFPVs)coexpressing MDV gB and chicken type Ⅱ interferon (IFN-Ⅱ) gene were constructed by using different promoters of Ps and PE/L.rFPVs were selected and purified by blue plaque expressing β-galactosidase.The expression of MDV gB gene was confirmed by indirect immunofluorescence assay.The levels of MDV gB expressed in rFPV-gB-IFN under the control of the synthetic promoter Ps was same as that in rFPV-gB.The expression of IFN-Ⅱ was examined in chicken embryo fibroblast(CEF) by protection against vesicular stomatitis virus-induced cytopathic effect.The levels of IFN expressed in CEF was 640～1280 units/mL.When rFPVs were propagated in CEF,the plaque sizes of rFPV-gB were larger than those of rFPV-gB-IFN,the plaque formation units of rFPV-gB were also more than those of rFPV-gB-IFN.; 彭大新刘秀梵程坚周春红陈素娟; 关键词：共表达鸡痘病毒

在疫苗免疫选择压力下H_9N_2亚型禽流行性感冒病毒HA基因的遗传变异被引量：33: 2002年; 为了解H9N2 亚型禽流行性感冒 (流感 )病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异情况 ,对某鸡场的感染鸡群进行连续 4年的跟踪监测 ,对使用疫苗前和持续使用疫苗后不同时段分离到的H9N2 亚型禽流感病毒的HA基因进行全序列分析。结果表明 ,在使用第一次分离的病毒株制备的疫苗后 8个月分离到的病毒株 ,其HA基因仅发生一个氨基酸的差异 ;但在继续使用该疫苗的第二个和第三个年头分离的病毒株 ,它们的HA基因则一直在发生较大的变化。这一发现对进一步研究禽流感病毒在不断使用疫苗的选择压力下发生变异的规律。; 刘红旗黄勇程坚彭大新贾立军张如宽刘秀梵; 关键词：HA基因

表达MDVgB和/或鸡γ干扰素基因的重组鸡痘病毒免疫效力试验被引量：6: 2003年; 将表达鸡干扰素基因、表达MDVgB基因、共表达MDVgB和鸡干扰素基因的重组鸡痘病毒进行组合免疫 ,观察在SPF鸡、狼山鸡中的免疫保护作用。在狼山鸡中随rFPV gB剂量的减少 ,保护效力逐渐下降 ,而在SPF鸡中 10 4 与 10 6PFU的rFPV gB提供相同的保护效力 ,但存在减缓增重的副反应 ;在所有的疫苗组合中 ,由10 6PFU的rFPV gB、10 5PFU的rFPV IFN Ⅱ和 40 0 0PFUHVT组成三价疫苗的保护效力最高且不影响增重 ,表明鸡干扰素既可降低重组鸡痘病毒的减缓增重的副反应 ,又具有免疫佐剂作用 ,与重组鸡痘病毒及HVT配合成疫苗是预防MD有效的冻干制剂。; 彭大新刘秀梵吴艳涛高崧程坚周春红; 关键词：马立克氏病重组鸡痘病毒保护效力

两株H_9N_2亚型禽流行性感冒病毒HA基因序列分析被引量：7: 2002年; The complete cDNA sequences of HA genes of two AIV isolates were presented in this paper The result of comparative sequence analysis seemed to suggest that these two isolates may be identical to three other AIV strains(H 9N 2) isolated from HongKong recently and these five strains may have the same origin in that the identity of the HA protein sequences of these AIV isolates is higher than 95%; 程坚刘红旗彭大新张如宽刘秀梵; 关键词：H9N2亚型 HA基因禽流感病毒血凝素基因

H9N2亚型禽流感病毒血凝素基因的遗传变异被引量：17: 2002年; 连续3年对某鸡场禽流感感染鸡群进行跟踪监测,对使用疫苗前与使用疫苗后不同时段分离的H9N2亚型禽流感病毒的血凝素(HA)基因进行全序列分析,研究其H9N2亚型禽流感病毒在同亚型灭活疫苗的选择压力下的遗传变异。结果表明:在使用第1次分离的病毒株制备的疫苗后8个月分离该病毒株,其HA基因仅有1个氨基酸发生变异;继续使用该疫苗第2年分离的该病毒株,其HA基因有20个氨基酸发生变异。; 刘红旗彭大新程坚贾立军张如宽刘秀梵; 关键词：H9N2亚型血凝素基因禽流感病毒

我国部分地区H9亚型禽流感病毒血凝素基因序列比较与遗传发生关系分析被引量：45: 2002年; 为从分子水平掌握我国H9亚型AIV的遗传变异情况和流行规律 ,本研究汇集近年来从我国 1 2个省、市、自治区的发病鸡群中分离到的 2 3株H9亚型禽流感病毒 ,通过RT -PCR方法和核苷酸序列测定获得了 2 3个毒株的HA基因cDNA核苷酸序列。核苷酸和推导的氨基酸序列同源性比较结果表明 ,这些毒株HA基因的核苷酸序列同源性为 94.1 %～1 0 0 % ,氨基酸序列同源性为 95 .4%～ 1 0 0 % ;将这 2 3个毒株和来自亚洲及世界其它地区的另外 3 1株的HA基因cDNA序列同源性进行比较发现 ,分离自香港的HK1 70 4 99株与日本的 2个毒株关系较近 ;氨基酸序列分析发现 ,CKGS1 99、CKTJ1 96、CKTJ2 96、CKSH3 0 0和CKBJ1 97五个毒株各发生了一个潜在的糖基化位点的丢失。 5 4株H9亚型AIVHA基因 5 5bp～ 1 1 5 2bp的氨基酸序列分析发现 ,裂解位点尽管有 1 0种基序 ,但本研究中的 2 3株和近年来从我国大陆和香港地区的分离的毒株则均为RSSR↓GLF ;构成受体结合位点的 1 91位氨基酸有一个规律 ,即所有中国大陆毒株与部分香港毒株都为N ,其它毒株均为H ,1 41aa～ 1 43aa处的糖基化位点有与 1 91aa类似的规律 ,即 :凡是 1 91aa为N的毒株 ,该处均为NVS(CKBJ1 94除外 ) ,凡是1 91aa为H的毒株 ,则该处均为NVT ;遗传发生关系分析 ,中国大陆?; 刘红旗程坚彭大新贾立军张如宽刘秀梵; 关键词：H9亚型禽流感病毒血凝素基因同源性

表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力被引量：38: 2002年; 以RT PCR法扩增获得H9亚型禽流感病毒 (AIV)分离株 (A Chicken China F 1 998)的血凝素 (HA)基因 ,将其定向插入鸡痘病毒转移载体 1 1 75的痘苗病毒启动子P7 5的下游 ,得到重组转移载体 1 1 75HA。以脂质体转染法将 1 1 75HA转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株(wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rFPV HA。以间接免疫荧光法证实感染rFPV HA的CEF表达了HA。rFPV HA在免疫 7日龄SPF鸡 7天后即能诱生可检出的血凝抑制 (HI)抗体 ,1 4天后诱生的HI抗体到达高峰 ,且诱生的HI抗体保持较高水平达 5 5天。在 7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验表明 ,rFPV HV能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒 ,效果与AIV全病毒灭活苗相当。; 程坚刘秀梵彭大新刘红旗; 关键词：H9亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒免疫效力

共表达H_9亚型禽流行性感冒病毒血凝素基因和鸡Ⅱ型干扰素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力被引量：39: 2003年; 为了构建更为安全有效的抗低致病性H9亚型禽流行性感冒 (流感 )的基因工程疫苗 ,将包含有H9亚型禽流感病毒分离株的血凝素 (HA)基因、鸡Ⅱ型干扰素 (IFN Ⅱ )全长cDNA序列及调控其转录的鸡痘病毒早晚期启动子 (PE/L)的基因片段 ,定向插入鸡痘病毒转移载体 1175的痘苗病毒启动子P7.5的下游 ,得到HA和IFN Ⅱ基因分别处于P7.5及PE/L转录调控下的重组转移载体 1175HAIFN。以脂质体转染法将 1175HAIFN转染至已感染鸡痘病毒 2 82E4疫苗株 (wt FPV)的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。 1175HAIFN与wt FPV基因组DNA之间的同源重组产生了重组鸡痘病毒rFPV HA IFN Ⅱ。通过在含X gal的营养琼脂上连续挑选蓝色病毒蚀斑获得并纯化rF PV HA IFN Ⅱ。以间接免疫荧光法和细胞病变抑制试验证实 ,纯化的rFPV HA IFN Ⅱ感染的CEF能以非融合的方式同时表达HA和具有抗VSV活性的鸡IFN Ⅱ。动物试验表明 ,rFPV HA IFN Ⅱ能显著抑制静脉攻毒后 1日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡从泄殖腔排毒 ,且能减轻单表达HA的重组鸡痘病毒 (rFPV HA)抑制 1日龄SPF雏鸡增重的副作用。; 程坚刘秀梵彭大新刘红旗吴艳涛张如宽; 关键词：重组鸡痘病毒血凝素

两株H_9亚型禽流感病毒HA基因序列分析被引量：25: 2001年; 采用 Pharmacia的 Timesave c DNA synthesis Kit,结合 RT-PCR方法 ,测定从鸡中的分离的 2株 H9亚型禽流感病毒 (AIV)的 HA全基因 c DNA序列。结果表明 :这 2株 AIV和从香港地区鸡、鹌鹑中分离的 3株 H9N2 亚型的 AIV的亲源关系很近 ,HA的氨基酸同源性全部高于 95% ,可能是来源于同一毒株 ;而与 2株从火鸡中分离的 H9N2; 程坚刘红旗彭大新张如宽刘秀梵; 关键词：禽流感病毒禽流感 HA基因基因工程疫苗

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