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hS100A2对人结肠癌的生物学作用及机制的研究: 研究背景与目的：　　结肠癌是发生于结肠部位的常见的消化道恶性肿瘤,以40岁～50岁年龄组发病率最高,男女之比为2～3:1。欧美地区发病率居内脏种瘤前二位,在我国的发病率与死亡率仅低于胃癌,食管癌、肺癌等常见恶性肿瘤,...; 徐兰兰; 关键词：生物学作用 HCT116细胞 CATENIN SW480细胞皮下移植瘤检测细胞

重组人S100A6促进人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和迁移侵袭并抑制其凋亡被引量：8: 2011年; 该研究旨在探讨重组人S100A6蛋白对乳腺癌细胞株MCF-7的增殖、凋亡、迁移及侵袭能力的影响。利用原核表达制备重组人S100A6蛋白(GST-hS100A6),SDS-PAGE显示其大小为36 kDa,Western blot显示其可以被S100A6抗体特异识别,BCA法测定1 L菌液共收获约16.7 mg蛋白;将其作用于人乳腺癌细胞MCF-7,MTT显示细胞培养48 h时,浓度为100μg/mL和300μg/mL的GST-hS100A6组的D_(492)值较GST组增加29.1%和84.6%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞增殖;平板克隆形成实验显示GST-hS100A6组的克隆形成率较GST组高38.7%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7的克隆形成;Hoechst染色显示GST-hS100A6组在24 h时细胞凋亡率较GST组减少67.8%(P<0.05),48 h时细胞凋亡率较GST组减少58.4%(P<0.05),提示S100A6抑制MCF-7细胞凋亡;划痕实验显示在24 h时GST-hS100A6组的划痕愈合率为GST组的2.2倍(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞迁移;Transwell显示GST-hS100A6组在24 h时穿膜细胞数较GST组增加88.1%(P<0.05),提示S100A6促进MCF-7细胞侵袭。以上结果显示S100A6对人乳腺癌具有一定的促进作用,有可能成为乳腺癌分子诊断的标志物和治疗的新靶标。; 游莉徐兰兰郭元元孙双双邹正渝黎玉叶罗进勇何通川周兰; 关键词：S100A6 乳腺癌增殖凋亡迁移

GST-hS100A9融合蛋白的原核表达、纯化及鉴定被引量：3: 2011年; 目的制备GST-hS100A9融合蛋白。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增获取hS100A9基因,亚克隆至原核表达载体pGST-moluc,构建pGST-hS100A9;后者转化BL21菌后,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌表达融合蛋白GST-hS100A9,经谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠(GS4BB)分离纯化、SDS-PAGE及Western blot鉴定,BCA法蛋白定量,CCK-8测定GST-hS100A9对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用。结果经酶切、测序分析证实pGST-hS100A9质粒构建正确;重组菌株经IPTG诱导后,表达相对分子质量约36 000的蛋白;纯化后纯度达94%;该蛋白可被S100A9的抗体特异识别;该蛋白产量约为20 mg/L菌液;且其抑制MCF-7的增殖。结论成功构建GST-hS100A9融合蛋白的原核表达质粒pGST-hS100A9;该质粒可在BL21中诱导表达GST-hS100A9,产率高,且对MCF-7增殖有抑制作用。; 游莉徐兰兰郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：蛋白纯化蛋白鉴定

融合蛋白GST-hS100A2对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用被引量：1: 2011年; 目的探讨GST-人S100A2融合蛋白(GST-hS100A2)对人结肠癌细胞HCT116和SW480的抑制作用。方法将重组质粒pGST-moluc-hS100A2和pGST-moluc转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,Western blot鉴定后采用谷胱甘肽-琼脂糖4B球珠分离纯化。以制备的GST-hS100A2融合蛋白分别处理HCT116和SW480细胞,以GST处理的细胞和空白细胞作为对照,分别用MTT法检测细胞增殖活力,Hochest33258染色检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期,划痕愈合法检测细胞迁移能力,Transwell小室试验检测细胞侵袭能力。结果融合蛋白GST-hS100A2能以剂量依赖和时间依赖的方式抑制HCT116和SW480细胞的增殖,并可明显促进两种细胞凋亡,阻滞HCT116细胞周期,抑制HCT116细胞迁移和两种细胞的侵袭能力。结论 GST-hS100A2对人结肠癌HCT116和SW480细胞具有一定的抑制作用,有可能成为结肠癌分子治疗的新靶标。; 徐兰兰游莉郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：融合蛋白

外源性S100A8在体外抑制HeLa细胞的增殖和侵袭被引量：1: 2011年; 目的探讨外源性S100A8对宫颈癌细胞系HeLa的增殖、凋亡、克隆形成及迁移和侵袭的影响。方法 MTT法检测细胞增殖活性;Hoechst染色检测细胞凋亡;流式细胞技术检测细胞周期;平板集落形成实验检测细胞集落形成;划痕和Transwell侵袭实验分别检测细胞的迁移和侵袭。结果细胞培养3 d时,浓度为100、300和1 000 mg/L的GST-hS100A8组的A值较GST组减少13.64%、19.29%和25.06%(P<0.05);在浓度为100 mg/L时,GST-hS100A8组呈时间依赖性减少(P<0.05);GST-hS100A8组在第3天时细胞凋亡率较GST组增加5.18倍(P<0.05),同时,出现峰值为(19.9±0.76)%的凋亡峰,而对照组没有凋亡峰;GST-hS100A8组的集落形成率较GST组减少30.2%(P<0.005);划痕愈合率较GST组降低30.1%(P<0.05);穿膜细胞数减少48.9%(P<0.05)。结论外源性S100A8可能具有抑制宫颈癌的作用。; 郭元元游莉徐兰兰邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：S100A8 HELA

人S100 A9重组腺病毒载体的构建和鉴定被引量：1: 2011年; 目的制备人S100A9(hS100A9)重组腺病毒载体,为进一步研究人S100A9蛋白的分子生物学作用奠定基础。方法从pHAHA-hS100A9中PCR扩增hS100A9片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,获得重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9。酶切、聚合酶链反应(PCR)及测序鉴定正确后经PmeⅠ酶切电转入AdEasier感受态细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A9,该质粒经PacⅠ酶切后由脂质体转染至HEK293细胞中包装扩增重组腺病毒并进行滴度测定,最后通过PCR及蛋白印迹法(Western blot)鉴定重组腺病毒。结果正确扩增出hS100A9基因;重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A9均及重组腺病毒质粒pAdhS100A9构建成功,并在HEK293细胞中成功包装且扩增后滴度为1 010 I U/mL;重组腺病毒AdhS100A9在HEK293细胞中成功转录和表达。结论用pAdEasy系统成功构建hS100A9重组腺病毒载体,为探讨其生物学作用奠定了基础。; 徐兰兰游莉郭元元邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：腺病毒科

hS100A6对人骨肉瘤细胞株143B的体内体外作用被引量：1: 2011年; 为研究hS100A6对人骨肉瘤细胞系143B的体内体外作用,利用整合有S100A6基因和SiS100A6基因的腺病毒(AdS100A6和AdSiS100A6)作用于143B细胞,MTT法和台盼蓝染色法检测其对细胞的增殖作用,Hoechst染色法检测其对凋亡的作用,Transwell实验检测其对迁移的作用,同时以143B裸鼠皮下移植瘤为动物模型,检测S100A6对143B的体内作用,结果显示AdS100A6干预后出现细胞增殖活性的减弱、凋亡率增高、迁移率降低,在体内试验中瘤体体积明显较对照组减小,而AdsiS100A6干预后出现时间依赖性地细胞增殖活性的增强、凋亡率降低、迁移率增高,体内试验中瘤体体积较对照组明显增大.提示hS100A6能抑制人骨肉瘤细胞株143B细胞的增殖和迁移,并促进细胞凋亡,同时能抑制人骨肉瘤细胞株143B的裸鼠皮下移植瘤的生长.; 李星星张昀源陈英华卫佳邹正渝吴丽美马闻游莉郭元元徐兰兰何通川周兰; 关键词：S100A6 骨肉瘤生物学效应

人S100A8重组腺病毒质粒的构建及鉴定被引量：1: 2011年; 目的构建人S100A8(hS100A8)重组腺病毒质粒,为hS100A8的深入研究奠定基础。方法从pGST-hS100A8中扩增hS100A8片段,亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-TOX,构建重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A8。经酶切、PCR及测序鉴定,再经PmeⅠ酶切线性化后电转化感受态AdEasier细胞,获得重组腺病毒质粒pAdhS100A8,经PacⅠ酶切后转染至HEK293细胞进行包装,制备重组腺病毒,扩增后进行病毒滴度测定及RT-PCR和Western blot鉴定。结果重组穿梭质粒pAdTrack-TOX-hS100A8及腺病毒质粒pAdhS100A8经鉴定均构建正确;重组腺病毒AdhS100A8在HEK293中成功包装,扩增后病毒滴度为1011 IU/ml;hS100A8在HEK293细胞中成功表达。结论成功构建了hS100A8重组腺病毒质粒,为深入研究hS100A8奠定了基础。; 郭元元游莉徐兰兰邹正渝黎玉叶孙双双罗进勇周兰; 关键词：重组腺病毒

外源性重组S100A6蛋白对5株转化细胞系的增殖、迁移能力及β-catenin水平的影响被引量：2: 2010年; 目的:探讨S100A6对5种转化细胞系株(HEK293、9HTE、CHO、MEF和C3H10T1/2)的增殖、迁移能力和β-catenin水平的影响。方法:通过转化质粒pMoluc-GST-hS100A6到大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达重组S100A6蛋白,为后续实验提供材料;MTT法检测细胞增殖,细胞划痕和Transwell法检测细胞迁移,免疫细胞化学法及Western-blotting检测β-catenin表达水平。结果:①通过IPTG诱导表达,从大肠杆菌中收获了高纯度重组S100A6(GST-S100A6);②外源性重组S100A6对作为阳性对照的肿瘤细胞系——人骨肉瘤细胞143B的增殖及迁移均有抑制作用(P<0.05),而对5株转化细胞系的增殖及迁移均无显著影响(P>0.05);③免疫细胞化学法和Western-blotting一致揭示重组S100A6可上调5株转化细胞系的β-catenin水平(P<0.05)。结论:S100A6对5株转化细胞系的增殖、迁移无明显影响,但可上调此5株转化细胞系Wnt/β-catenin水平。; 马闻李星星王胜游莉郭元元徐兰兰周兰; 关键词：S100A6 细胞增殖细胞迁移 Β-CATENIN

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