- 逆转录-半套式-聚合酶链反应在乙脑早期诊断中的应用被引量：9
- 1998年
- 目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特异性、临床检测的可靠性进行了探索，并与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法进行了比较。结果：本方法所用引物的敏感性高，特异性强。在此基础上，检测了４７例临床上确诊为乙脑患者的标本（特异性ＩｇＭ阳性），４３例ＲＴ－ｓｅｍ－ｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，与ＩｇＭ检测的符合率为９１％。在２０例特异性ＩｇＭ阴性、临床上怀疑为乙脑的患者中，１２例ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，阳性率为６０％。结论：上述结果提示，ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ用于乙脑患者的临床诊断是可行的，若与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法相结合可进一步提高阳性率。另外，对１６例核酸检测阳性的患者进行了追踪检查，结果有１４例患者恢复期标本的ＲＮＡ检测仍为阳性，提示该病毒并未随着症状的消失而立即消失。
- 黄庆生马文煜姜绍谆张富泉李别虎肖毅刘利兵
- 关键词：乙型脑炎RT-PCRELISA
- 汉坦病毒肺综合征:一种新的传染病被引量：1
- 1994年
- 近年在美国西南部爆发流行一种病死率极高的急性呼吸系统疾病。现已征实,该病由一种新的汉坦病毒引起,称其为汉坦病毒肺综合征。本文就该病的临床、流行病学及病毒学研究情况作一简要综述。
- 张富泉
- 关键词：HPS肺疾病传染病
- 含日本脑炎病毒pre-M/E蛋白基因真核表达质粒的构建及免疫效果观察被引量：3
- 1997年
- 本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时表达。大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击后特异性抗体的产生。
- 张富泉任君萍马文煜姜绍谆黄庆生
- 关键词：日本脑炎病毒疫苗质粒
- 5′端帽状结构对乙脑病毒RNA稳定性和感染性的作用被引量：4
- 1999年
- 黄庆生姜绍谆马文煜张富泉樊英茹肖毅刘利兵
- 关键词：乙脑病毒RNA稳定性感染性
- 乙脑病毒全长cDNA的扩增克隆及体外转录制备感染性RNA的研究被引量：17
- 2000年
- 本研究根据已知的乙脑病毒 (JEV)SA14株基因序列设计一套引物 ,利用长模板RT PCR技术 ,一次扩增出了JEV的全长cDNA ,并采用大片段克隆技术将其克隆于载体的RNA聚合酶启动子下游。阳性克隆转录的RNA转染HBK细胞后细胞产生病变 ,经乳鼠脑内接种及特异性免疫荧光染色证明为JEV ,这一结果表明JEV感染性克隆的构建获得了成功。其次 ,合成一条含有RNA聚合酶启动子序列的 5′引物 ,利用长模板RT PCR方法扩增出带有启动子的JEV全长cDNA ,以此cDNA为模板作体外转录。转录产物转染BHK细胞后观察到了典型的JEV病变。收获的病毒经乳鼠脑内接种及免疫荧光染色证明为JEV ,从而建立了制备JEV感染性RNA的快捷方法。本研究构建的JEV感染性克隆与建立的长模板RT PCR快速制备JEV感染性RNA的方法 ,将为JEV分子生物学研究的后续工作提供有力的工具和奠定坚实的基础。
- 黄庆生马文煜姜绍谆樊英茹张富泉肖毅丁天兵
- 关键词：日本脑炎病毒全长CDNA
- 编码HIV-1 Pr42^(gag)的杆状病毒转移载体的构建及鉴定
- 1997年
- 本文作者采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从ＨＩＶ－１ｃＤＮＡ克隆ＢＨ１０中扩增出Ｐｒ４２ｇａｇ的基因片段，经适当的限制性内切酶消化后插入到杆状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ９中，使其处于多角蛋白启动子的控制之下，构成重组转移载体ｐＢａｃＧＡＧ４２。酶切鉴定结果与预期的一致。再用载体上多克隆位点两翼的引物对连接处进行序列分析，结果表明外源基因处于多角蛋白启动子的控制下，且成功地引入了起始码和终止码。
- 张富泉张红毅马文煜姜绍谆姜绍谆任君萍
- 关键词：基因重组杆状病毒
- IL-2-preS融合基因真核表达载体的构建与鉴定被引量：1
- 1997年
- ＩＬ－２－ｐｒｅＳ融合基因真核表达载体的构建与鉴定汤丽霞马文煜杨晓峰张富泉任君萍（第四军医大学微生物学教研室，西安７１００３２）以往研究表明，诱导保护性免疫的目的基因直接体内转染，能诱导产生抗体及ＣＤ８＋的ＣＴＬ，产生有效免疫保护作用。ｐｒｅＳ具有强...
- 汤丽霞马文煜杨晓峰张富泉任君萍
- 关键词：白细胞介素2融合基因真核表达PRES
- 疫苗疗法的回顾与展望被引量：2
- 1994年
- 疫苗疗法的回顾与展望第四军医大学微生物学研究生（７１００３２）张富泉导师马文煜，姜绍谆一、Ａｕｚｉａｓ－Ｔｒｅｎｎｅ和梅毒接种术－概念的提出１９世纪初叶，种痘术在欧洲成功地控制了天花的流行，从而促使人们以极大的热情去研究新的传染病疫苗。１８５０年，法...
- 张富泉马文煜姜绍谆
- 关键词：疫苗疗法医学史
- 乙型肝炎病毒pre S基因真核表达质粒诱导小鼠特异性抗体反应的研究
- 1999年
- 本文构建了含有ＨＢｓＡｇ ｐｒｅ Ｓ区基因的真核表达载体ｐＣＭＶ４ｐｒｅ Ｓ， 经大量提取质粒并纯化后， 肌肉注射Ｂａｌｂ／ｃ 小鼠， 共免疫３ 次， 间隔两周， 结果有３／７ 的小鼠血清抗ｐｒｅ Ｓ２ 抗体呈阳性。
- 汤丽霞马文煜张富泉杨晓峰李元任君平黄庆生肖毅
- 关键词：DNA免疫PRES真核表达质粒
- 乳鼠接种编码乙型脑炎病毒PrM/E蛋白的重组质粒DNA可诱发保护性免疫
- 2003年
- 目的 :评价乙型脑炎DNA疫苗对乳鼠的免疫保护效果 .方法 :以DNA疫苗 (pV/JE)、质粒载体对照 (pVAX1)和PBS接种BALB/c乳鼠后 ,测定其病毒特异性的CTL活性、结合抗体、中和抗体 ,并以 10 0LD50 JEV攻击 ,观察保护效果 .结果 :DNA疫苗组的CTL活性为 37.5 % ,而载体和PBS对照组的CTL活性分别为 18%和 8.5 % .二次免疫后DNA疫苗组的免疫荧光抗体滴度为 1∶2 8.3(几何平均效价 ) ,抗体阳转率为 80 % (8/10 ) ;混合血清的中和抗体效价为 1∶4 0 .JEV攻击后 ,DNA疫苗组小鼠获得 75 % (6 /8)的保护率 ,而对照组小鼠全部死亡 .结论 :所构建的DNA疫苗可诱发乳鼠产生抗JEV的CTL活性、中和抗体及保护活性 。
- 吴玉水马文煜宋建华黄庆生张富泉张红毅
- 关键词：乙型脑炎免疫法
