华秋东
- 作品数：7 被引量：12H指数：2
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技攻关计划项目黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 利用PCR技术从质粒pSHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a(+)构建重组质粒pET32a-p27,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,并将纯化定量后的表达产物免疫小鼠,制备单克隆抗体。结果显示,gag基因的p27相应片段为763bp,其表达产物相对分子量为46ku。经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达90%以上。利用淋巴细胞杂交瘤技术获得5株稳定分泌抗p27的单克隆抗体细胞株,分别命名为1A5、1C7、3C2、2D12、3D12。5株杂交瘤细胞诱生小鼠产生的腹水抗体效价分别为1∶12800、1∶25600、1∶819200、1∶51200和1∶409600。免疫球蛋白类型均为IgG1型,轻链均为λ链。Western blot和IFA试验结果表明所获得的单克隆抗体均对病原检测具有很高的特异性,为进一步开发SIV早期诊断试剂盒奠定了基础。
- 华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华
- 关键词：猴免疫缺陷病毒P27蛋白单克隆抗体
- 猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因，并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导，对其产物...
- 华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华
- 关键词：猴免疫缺陷病毒P27蛋白单克隆抗体PCR技术免疫球蛋白病原检测
- 猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
- 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增猴免疫缺陷病毒(SIV)衣壳蛋白p27基因,并将其插入表达载体pET32a构成重组质粒pET32a-p27。重组子经测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,对其产物...
- 华秋东吴志军姜成刚沈楠陈维多相文华周建华
- 关键词：猴免疫缺陷病毒P27蛋白单克隆抗体
- 文献传递
- 人/猴免疫缺陷病毒p27蛋白单克隆抗体的制备
- 人免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)与猴免疫缺陷病毒(Simianimmunodeficiencyvirus，SIV)同属于反转录病毒科慢病毒属，两者的亲缘关系很近。SHIV，即...
- 华秋东
- 关键词：免疫缺陷病毒单克隆抗体亲缘关系基因重组
- 文献传递
- 硒与奶牛红细胞膜功能的关系研究被引量：5
- 2009年
- 对奶牛血硒含量、抗氧化酶活力、红细胞膜物理特性、不同硒营养奶牛谷胱甘肽过氧化物酶活力的变化进行测定。结果表明,奶牛血硒含量具有地区差异性;试验A组奶牛全血中几种重要的抗氧化酶—谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活力明显下降;细胞膜蛋白质含量明显低于对照组,其他物理特性也有所改变,表现为在低硒条件下红细胞膜流动性降低、微黏度增加、渗透脆性增加、离子泵活力下降。经冰冻蚀刻电镜蛋白质形态学观察,试验A组奶牛红细胞膜蛋白质微粒分布稀少、个别区域有丛簇状分布;在试验B组中对各组奶牛添以不同硒营养的饲料,在此浓度梯度中显示有硒最适添加量,用此添加量的含硒饲料中谷胱甘肽过氧化物酶活力最高,添加量少于或多于此值时有机体的抗氧化性都将受到影响。
- 张馨心刘文丽华秋东王海陈维多
- 关键词：硒红细胞膜谷胱甘肽过氧化物酶
- 小麦抗条锈病基因分子标记及定位研究进展被引量：5
- 2009年
- 条锈病是小麦的主要病害之一,在我国曾多次流行造成小麦严重减产。近年来分子标记技术的迅速发展为小麦抗条锈病基因的研究提供了极大的方便。在抗病育种中应用分子标记辅助选择有利于实现抗条锈病多基因积累,可以加速持久抗病品种的培育进程。本文简要介绍了几种常用的分子标记的概念和方法,并详细介绍了近几年分子标记在小麦抗条锈基因定位的应用现状,展望了DNA分子标记技术在小麦抗条锈病研究中的前景。
- 王海华秋东陈维多
- 关键词：分子标记基因定位
- 人/猴免疫缺陷病毒SHIV衣壳蛋白p27的表达纯化及活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 利用PCR技术从质粒SHIV89.6P中扩增p27gag基因,并克隆入pMD18-T载体,测序鉴定;将p27gag基因插入表达载体pET32aT7启动子下游,构成重组质粒pET32a-p27并使其在大肠杆菌BL21中高效表达,最后利用固定化金属离子(Ni2+)配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白,Western Blot检测活性。结果显示,融合蛋白p27经SDS-PAGE电泳观察可见45ku的明显条带,与预期分子质量大小一致且多以可溶形式表达,目的蛋白占菌体总蛋白的36.8%;经镍柱纯化,获得目的蛋白p27纯度可达98%;经Western Blot试验检测,证明此融合蛋白p27能与SHIV阳性血清发生特异性反应,具有较好的抗原活性。该研究为进一步开发早期诊断试剂盒和基因工程疫苗奠定了初步基础。
- 华秋东姜成刚王海相文华周建华陈维多
- 关键词：SHIVP27
