刘鹏
- 作品数：15 被引量：55H指数：5
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省自然科学基金甘肃省科技重大专项计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基于流行性感冒病毒保守区域的通用流行性感冒疫苗的研究进展被引量：3
- 2017年
- 流行性感冒(流感)疫情频频暴发,严重危害人类健康和公共卫生。虽然接种流感疫苗能够起到有效的预防作用,但由于流感病毒易变异,使得流感疫苗只对疫苗株或与疫苗株高度相近的病毒株具有保护效果。因此,研制一种可抵御不同型或亚型流感病毒的通用疫苗成为流感疫苗研究的热点。现就基于流感病毒保守区域的通用流感疫苗的研究进展作一综述。
- 李朋伟刘鹏
- 关键词：流行性感冒病毒免疫原性
- 无血清培养Vero细胞及其传代稳定性分析被引量：8
- 2017年
- 目的建立无血清无动物源性培养基(virus production-serum-free medium,VP-SFM)培养Vero细胞的工艺,并分析其传代稳定性。方法采用VP-SFM适应培养Vero细胞,建立无血清无动物源性Vero细胞库,对细胞库进行常规检定;绘制VP-SFM培养Vero细胞的生长曲线;比较140、150、160代Vero细胞在VP-SFM中培养的比生长速率(μ)和分裂次数(Cd);比较142、147、153代Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病病毒滴度;比较无血清与含血清培养140、150、160代Vero细胞的μ和Cd值;分别在250 ml spinner flask中加入2 g/L cytodexⅠ、在3 L生物反应器中加入3 g/L cytodexⅠ培养Vero细胞,观察细胞贴壁和生长情况。结果建立的无血清无动物源性Vero细胞库,细胞密度为4×10~6个/ml,冻存前细胞活率为100%,复苏后细胞平均活率为(94.20±3.95)%,无菌检查和支原体检查合格;细胞在VP-SFM中复苏传代后生长良好,经过24 h潜伏期后,进入对数生长期,第8天进入平台期,第12天达最大细胞密度20.5×10~5个/ml,并维持至第14天,活细胞数开始下降,最大μ值为0.025 4 h^(-1)。Vero细胞在无血清培养基中传代稳定性较好,140、150、160代Vero细胞在VP-SFM培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05);142、147、153代Vero细胞在VP-SFM培养的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05);140、150、160代Vero细胞在无血清和含血清培养基培养的μ和Cd值差异无统计学意义(P>0.05)。在生物反应器微载体系统中,采用无血清培养基培养Vero细胞,细胞贴壁及生长状态良好。结论初步建立无血清、无动物源性物质的Vero细胞库,采用方瓶静置培养或微载体搅拌培养,细胞生长状态均良好,传代稳定性也较好。
- 张香玲张生琰孙燕刘鹏赵星文李薇
- 关键词：VERO细胞
- 响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺
- 2017年
- 目的以响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养条件。方法以MDCK-siat7e细胞培养的起始氨浓度、乳酸浓度、渗透压和活细胞密度（viablecelldensity，VCD）为因子，以MDCK0siat7e细胞培养的72h细胞比生长率、细胞活率、乳酸比生成率和氨比生成率为响应值，采用全因子实验设计和响应面分析来研究这些因子对M1X；K-siat7e细胞培养的影响。结果在MDCK-siat7e细胞培养过程中，对72h细胞比生长率有显著影响的因子是起始VCD（t=3．43，P〈0．05）；对72h细胞活率有显著影响的因子是起始乳酸浓度（t=4．32，P〈0．05）和氨浓度（f=2．86，P〈0．05）；对72h乳酸比生成率有显著影响的因子是起始乳酸浓度（t=8．92，P〈0．05）、渗透压（t=4．11，P〈0．05）和VCD（t=2．66，P〈0．05），其中乳酸浓度起主要作用；对72h氨比生成率有显著影响的因子是起始氨浓度（t=2．63，P〈0．05）。结论用响应面法优化MDCK-siat7e细胞培养工艺可对该细胞培养过程中的条件控制起指导作用。
- 陈军李朋伟孙燕张生琰孙振鹏马超刘鹏李薇
- 关键词：细胞培养技术响应面法
- 转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控被引量：1
- 2016年
- 目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
- 王革马超刘晓凡李薇刘鹏魏然
- 重组人戊型肝炎疫苗细菌内毒素检查方法的建立被引量：3
- 2006年
- 确立重组人戊型肝炎疫苗原液的细菌内毒素检查方法。供试品参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)热原检查法进行热原检查,结果符合规定。该供试品同时参照《中华人民共和国药典》(2005年版三部)细菌内毒素检查法要求进行试验。供试品溶液在40μg/m l浓度下,确定内毒素限值为40EU/m l。供试品在该内毒素限值下干扰试验有效,且细菌内毒素检查法符合规定。该疫苗用内毒素检查法代替热原检查法,方法可行。
- 应莲芳杨军马超梁凌宇刘鹏
- 关键词：细菌内毒素检查方法
- 流感病毒在Vero细胞系与MDCK细胞系增殖条件的比较被引量：7
- 2012年
- 目的研究流感病毒H1N1及其他亚型在Vero细胞系和MDCK细胞系高效增殖的最适条件,比较两种细胞系对流感病毒的敏感性差异及影响敏感性差异的条件。方法在培养好的Vero细胞系与MDCK细胞系用不同的病毒感染复数(M.O.I)、胰酶浓度、病毒吸附时间、病毒维持液血清质量浓度等条件进行流感病毒在细胞上的增殖。结果在M.O.I为0.01接种流感病毒,吸附时间为1 h,胰酶质量浓度2μg/mL,血清质量浓度为8%时,流感病毒血凝素在MDCK细胞系可获得较高的滴度。结论 MDCK细胞系是适于流感病毒培养的细胞,它作为生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质需要进一步的研究。
- 刘鹏李佳林马超齐娟刘晓凡
- 关键词：流感病毒
- 原代地鼠肾细胞及狂犬病毒不同培养方式的研究被引量：2
- 2012年
- 目的通过比较原代地鼠肾细胞在转瓶、微载体、细胞工厂的3种培养方式的培养效果,为原代地鼠肾细胞选择一种易扩大规模、培养高质量细胞的培养方式,进而提高狂犬病毒的产量。方法消化取得的细胞悬液分别在转瓶、微载体、细胞工厂中培养,通过显微镜观察细胞形态、计数等结果比对培养的差别。结果细胞工厂可以很好地培养原代地鼠肾细胞和狂犬病毒;而细胞在微载体上贴附性差,生长不好。结论实验结果表明细胞工厂可以取代转瓶,用于大规模培养原代地鼠肾细胞扩大狂犬病毒的产量。
- 马超赵祖波刘鹏刘晓凡孙小慧许博
- 关键词：原代地鼠肾细胞狂犬病毒转瓶微载体细胞工厂
- H1N1流感病毒在微载体培养MDCK细胞上增殖的研究被引量：12
- 2013年
- 目的探索MDCK细胞在微载体上的培养条件,并研究H1N1型流感病毒在MDCK细胞上的增殖条件。方法在微载体上培养好MDCK细胞上用H1N1型流感病毒在不同的病毒感染复数(MOI)、胰酶浓度两个关键的病毒增殖条件进行流感病毒在细胞上的增殖研究。结果微载体质量浓度为6 g/L时,MDCK细胞培养密度可以达到4.5×106cells/mL。在MOI为0.05接种流感病毒,胰酶质量浓度4μg/mL,流感病毒在MDCK细胞上可获得较高的滴度。结论 MDCK细胞用微载体培养可以达到较高的细胞密度,可以作为规模化生产新型流感病毒疫苗的主要细胞基质进行进一步的研究。
- 刘鹏李佳林马超赵祖波
- 关键词：H1N1流感病毒微载体
- 冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)稳定剂配方的筛选被引量：6
- 2016年
- 目的筛选出适合冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的热稳定性好、无明胶的稳定剂配方。方法以水分、外观、效价、热稳定性效价为指标,尤其是效价和热稳定性效价,对A、B、C、D、E、F、G等6种稳定剂配方进行系统的优化组合筛选,6种稳定剂配方分别含有蔗糖、乳糖、人血白蛋白、甘氨酸、精氨酸、明胶、尿素、甘露醇、右旋糖苷,其中A为现行疫苗生产配方。运用单因素五元设计法,筛选出最优稳定剂组合。结果方差分析结果显示D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的M-ABT结果 13.95,37℃放置4周M-ABT结果 13.05;NIH效价1.94,37℃放置4周NIH效价1.56。结论 D组配方对冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)有较好的保护作用。
- 马超陆俭孙燕陈军刘鹏李守丽于滢张轶
- 关键词：稳定剂
- 抗乙型肝炎表面抗原单链抗体(ScFv)的原核表达、纯化及鉴定
- 2008年
- 从抗HBsAg鼠单抗的杂交瘤细胞提取RNA,经反转录得到cDNA,进一步扩增得到鼠重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),按VH-linker-VL的结构将VH、VL基因拼接成单链抗体(scFv)基因;经测序正确后进一步构建了表达重组体p26HBSc并在E.coli中表达,得到一约30kD的外源蛋白;纯化后经ELISA检测与HBsAg有较高的亲和力活性,为下一步的人源化改造奠定了基础。
- 雷清刘鹏郭敏蒋琳
- 关键词：单链抗体连接肽
