刘晓凡
- 作品数：21 被引量：76H指数：4
- 供职机构：兰州生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：甘肃省科技重大专项计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- VITEK 2 Compact微生物检测系统在生物制剂无菌环境监测中的应用被引量：4
- 2015年
- 目的通过收集生物制剂生产中洁净间环境微生物、微生物限度检测样品,应用全自动微生物检测系统(VITEK 2 Compact)进行监测分析,评价其适用性。方法利用革兰染色法和VITEK 2 Compact系统对4种标准菌株和291个纯菌鉴定样本进行方法学验证;对人员及设备表面微生物、沉降菌及微生物限度样本共313个进行菌型鉴定,确认此系统在生物制剂生产中的应用价值。结果共在收集的313个样本中,共检出微生物268株,其中人员及设备表面微生物18株、沉降菌188株、微生物限度62株。可信度均在93%以上。其中革兰阳性菌:藤黄/里拉微球菌46次,库克菌属35次,葡萄球菌属70次;阴性菌:少动鞘氨醇单胞菌38次,鲁氏不动杆菌7次。结论 VITEK 2 Compact微生物检测系统具有高度特异性、敏感性和重复性,并具有操作简便、检测速度快等优点,可广泛应用于医院及疾控中心,尤其对无菌生产环境中微生物的质控和微生物数据库的建立具有重要意义。
- 房世娣赵小洁刘晓凡宣俊文钱秋娟马军兰魏然
- 关键词：VITEKCOMPACT生物制剂细菌鉴定
- 转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控被引量：1
- 2016年
- 目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
- 王革马超刘晓凡李薇刘鹏魏然
- 不同代次牛肾原代细胞培养轮状病毒的比较研究被引量：14
- 2007年
- 口服轮状病毒活疫苗(LLR株)生产用细胞基质为新生小牛肾原代细胞.原始的初代细胞(P0)产量小,一对牛肾平均生产7瓶细胞.将原始的初代细胞传代可使细胞产量显著增加,传代后(P2代)细胞产量可由7瓶增加为96～112瓶,细胞核型检查传至P5代的细胞染色体数目与初代细胞一致.细胞培养物均一性提高.P0代与P2代细胞病毒培养物滴度分别在6.2±1.5和6.5±0.51gCCID50/ml,使用P2代细胞培养病毒,产量增加10～15倍.提高了疫苗生产的可控性和质量,生产规模显著放大,经济效益明显.
- 鱼轲魏至栋庞兴刘晓凡刘溯谢澎王玉琳
- 关键词：传代培养轮状病毒疫苗
- 病毒活疫苗冻干保护剂筛选研究被引量：17
- 1996年
- 为提高冻干病毒性活疫苗的成品滴度和稳定性及提高疫苗生产的出品率，本研究通过对多种保护剂成分如明胶、山梨醇、蔗糖、乳糖、右旋糖苷、精氨酸等及其配比的大量反复筛选试验，已初步选定了数种可供选择并进一步优化完善的冻干保护剂配方。与现行冻干保护剂相比，其疫苗出品率在相同投入下可提高三倍。
- 王玉琳曾鸣王玲刘晓凡韩德胜李根明
- 关键词：病毒疫苗冻干保护剂冻干病毒病
- 安瓿包装的液体制品密封完整性检查被引量：3
- 2013年
- 目的:研究安瓿包装的液体制品密封性检查方法。方法:对液体安瓿制品和已有标准孔径的破裂制品在选择合适的检漏程序后进行负压、注色水、正压、清洗及排水工艺后,对检漏前、后的液体制品进行目检和质量检定,分析检漏程序前、后制品的质量指标,同时,观察有标准孔径的破裂制品状况。结果:有色水进入安瓿的为破裂制品,经过检漏程序后制品未发生改变,符合质量标准。最小标准孔径￠0.1mm的破裂制品有色水进入。结论:对于安瓿包装的液体制品采取负压、正压检漏法能解决安瓿包装液体的密封完整性检查,对产品质量无影响。进一步验证了现有技术能制作￠0.1mm破裂标准孔径的制品,利用该方法可以被有效的检查其密封性。
- 蒋井明谈岩舫刘晓凡
- 关键词：安瓿检漏
- 易致污染的支原体在固体培养基上的形态特征被引量：3
- 2015年
- 目的：研究不同条件下、不同生长期易致污染的支原体在固体培养基中的形态特征。方法通过改变支原体菌体浓度、培养时间及培养基组成，观察支原体在固体培养基中的形态变化。结果支原体菌体浓度小于103 cfu／mL时，培养至2～3天后可在固体培养基中形成典型的“油煎蛋”状形态，以蔗糖作为碳源培养支原体会导致葡萄糖发酵型支原体（肺炎支原体）不能在固体培养基中形成典型菌落，当使用牛血清代替马血清为支原体提供外源胆固醇时，猪鼻支原体在固体培养基中不能形成典型菌落。结论支原体的不同生长期、菌体浓度、培养基的组成都会使易致污染的支原体在固体培养基上的形态发生变化。
- 傅元欣魏然宣俊文于佳王轶峰姜宝芹刘晓凡
- 关键词：肺炎支原体固体培养基
- 微载体规模化培养细胞的研究被引量：9
- 2005年
- 通过实验探索使用微载体进行动物细胞规模化培养,以期达到建立规模化生产病毒疫苗的目的.实验研究了Vero细胞的生长曲线,以及对细胞生长过程中影响细胞生长的葡萄糖、氨含量两个主要因素的变化规律以及微载体浓度与细胞密度的关系.通过实验发现微载体规模化培养细胞易于操作,比传统转瓶培养的细胞密度高,封闭式的培养方式不但减少了污染几率,而且可以充分保证疫苗的质量.最终找出适宜疫苗培养的微载体使用浓度为2.5g/L,适宜的细胞接种浓度为: 1～5×105cell/ml.
- 韩德胜李振平李薇孙振鹏赵星文周丽娟刘晓凡王玉琳
- 关键词：微载体细胞培养VERO细胞
- 冻干腮腺炎活疫苗细胞培养生产工艺研究被引量：1
- 1998年
- 报告了冻干腮腺炎活疫苗细胞培养生产工艺研究结果，通过对鸡胚疫苗株的适应培养及对细胞培养生产工艺的试验优化，建立了连续细胞培养多次收获疫苗生产工艺并制备出了冻干细胞培养腮腺炎活疫苗制剂。本生产工艺切实可行，生产成本低、投入产出率高，所用原材料规范、质量易于控制，具有明显的技术优势。生产的冻干疫苗制剂质量稳定可靠，符合中国生物制品规程要求。
- 王玉琳王玲刘晓凡韩德胜曾鸣
- 关键词：腮腺炎疫苗
- 风疹病毒E1蛋白与受体结合特定结合域的预测被引量：1
- 2014年
- 目的 同源模建E1蛋白及其受体髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG）的三维结构,应用分子对接的方法预测E1蛋白与其受体MOG的候选结合氨基酸残基。方法 采用MODELLER程序预测E1蛋白及其受体MOG的三维结构,并应用CASTp server进行活性口袋的预测;采用ProtScale进行疏水性分析,应用基于隐马尔可夫模型（HMM）算法的SMART程序搜索蛋白序列的motif;采用PyMOL-APBS软件设计E1蛋白及其受体MOG分子的腔介质结构,分析其表观静电势,应用PLATINUM程序进行分子对接,寻找其结合位点。结果E1蛋白由3个结构Ⅱ组成,其中D1、D3处于结构的底部,形成一个大的口袋,C-末端与D2的一侧形成另一个大的口袋,其余口袋主要集中在D2上半部的融合面中;MOG的结构模型为8个反平行的β折叠组成的一个β折叠桶,预测结构的主链构象的所有氨基酸均处于允许区。在MOG N-末端1～17位的氨基酸残基形成一个moti（flow complexityregion）,46～127位的氨基酸残基形成了一个motif V型免疫球蛋白样结构Ⅱ（Immunoglobulin V-Type,IGv）;lowcomplexity region段氨基酸残基表现为强疏水性。MOG N-末端的5个残基基序及ARG101～GLU107构成的β转角共同形成一个突起的结构,插入到E1蛋白的活性口袋中,与口袋中的ALA86、TYR90、TYR101、PHE102、ASN103、GLY105、SER107、TYR109、ALA122、PHE123、HIS125、SER126相互结合。结论 应用计算机模拟技术预测了E1蛋白与其受体MOG结合的特定结合Ⅱ,为今后进一步研究其相互作用奠定了基础。
- 邢家强刘晓凡窦强林杰魏至栋
- 关键词：风疹病毒同源模建分子对接
- 麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次对病毒滴度稳定性试验的影响
- 2015年
- 目的 了解麻疹减毒活疫苗检定用Vero细胞代次的稳定性范围.方法 用DMEM培养液将Veto细胞137代连续传至173代,检测其细胞活力,并观察Vero细胞的形态,接种麻疹减毒活疫苗参考品进行病毒滴定及热稳定性试验.结果 170代以下Vero细胞形态良好,细胞活力在85％以上,麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验的结果：137～ 169代Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗病毒滴度热稳定性试验无统计学差异（P＞0.05）,170代以上代次的Vero细胞活力及原麻疹减毒活疫苗热稳定性试验有明显统计学差异（P＜O.01）.结论 169代以下Vero细胞为检定用麻疹减毒活疫苗最佳细胞代次.
- 周丽娟魏然刘晓凡冯德杰黄丽坤崔焰孙晓琳姜宝芹
- 关键词：麻疹减毒活疫苗VERO细胞热稳定性试验
