刘宁生 作品数:5 被引量:43 H指数:4 供职机构: 东南大学医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 更多>>
染色体显微切割与DOP-PCR结合对赤麂Sry基因克隆、测序及初步定位 被引量:10 2001年 应用显微切割技术获得赤麂1号、Y1、Y2染色体,通过DOP-PCR增加模板DNA拷贝数,然后用人的性别决定基因(Sex-determining Region of the Chromosome Y, SRY)中HMG框内设计1对引物,对DOP-PCR产物进行扩增。在雄性赤麂Y2染色体DOP-PCR产物中扩增出与人SRY基因同源的Sry基因片段,克隆、测序,首次在分子水平上证明赤麂Y2染色体是真正的Y染色体,同时对赤麂Sry基因进行了初步定位。 张悦 鲁晓萱 刘宁生 余多慰 单祥年关键词:染色体 显微切割 DOP-PCR SRY基因 赤麂 性染色体 黑麂Y染色体的鉴别和Sry基因的克隆及定位 被引量:19 2001年 以流式细胞仪分离小麂(Muntiacus reevesi)Y染色体和黑麂(Muntiacus crinifrons)Y1,Y2,X+4和1号染色体,利用DOP-PCR技术富集了分离的各单条染色体。然后,将小麂的Y染色体的DOP-PCR产物经Cy3标记后直接作为涂染探针, 应用染色体涂染技术与雌雄黑麂的核型标本进行杂交,确认了黑麂真正的Y染色体为Y2染色体。再以黑麂的Y1,Y2,X+4和1号染色体的DOP-PCR产物为模板,用人的特异性的 SRY(sex determining region of the Y chromosome ) 基因引物对其进行扩增,结果表明黑麂只有Y2染色体出现了SRY扩增片段。然后扩增产物克隆和测序,比较它与人的同源性,初步把黑麂的Sry基因定位在Y2染色体上。最后提取雄性黑麂的基因组DNA,并用同一对引物对其进行扩增,亦得到Sry基因的片段,对此扩增片段进行克隆,测序,结果表明其与Y2染色体得到的Sry基因片段完全一样,与人SRY基因的同源性均为83%。 王毅 单祥年 张悦 刘宁生 鲁晓萱 佴文惠 王金焕 陈玉泽 杨凤堂 胡均 张文兴 徐春茂关键词:黑麂 染色体涂染 DOP-PCR SRY基因 偶蹄目 赤麂Sry基因的定位及Y染色体的鉴别 被引量:1 2001年 应用流式细胞仪分离赤麂的1,Y_1,Y_2染色体,通过简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应(DOP-PCR)增加模板数量.用人的性别决定基因HMG框内设计1对引物进行PCR扩增.在雄性赤麂Y_2染色体DOP-PCR产物中扩增出与人SRY基因同源的Sry基因片段,经克隆测序后,初步证明赤麂Y_2染色体是真正的Y染色体,同时对赤麂Sry基因进行了初步定位. 张悦 单祥年 刘宁生 鲁晓萱 聂文惠 杨凤堂 王金焕 陈玉泽关键词:赤麂 SRY基因 DOP-PCR 性染色体 性别鉴定 应用DOP-PCR与染色体涂染技术鉴别赤麂的Y染色体 被引量:12 2001年 流式细胞仪分离小麂的Y染色体 ,并应用DOP PCR扩增后标记作为探针 ,分别与雄性及雌性赤麂中期核型进行染色体涂染 .结果表明 ,只有雄性赤麂Y2 染色体与探针有明显的杂交信号 ,说明只有Y2 染色体与赤麂的性别决定相关 ,排除了赤麂Y1染色体在性别决定中的作用 . 单祥年 张悦 王毅 刘宁生 鲁晓萱 聂文惠 杨凤堂 王金焕 陈玉泽关键词:赤麂 性染色体 DOP-PCR 染色体涂染 一个母系遗传非综合征耳聋大家系mtDNA序列分析 被引量:10 2001年 通过分析本家系mtDNA序列 ,探讨淮阴一非综合征耳聋大家系患病的分子遗传学机制。采用聚合酶链反应 (PCR)扩增mtDNA与非综合征耳聋相关位点nt15 5 5、nt744 5的区域和人类种群研究的D -loop区、PCR -异源双链分析、PCR -RFLP、PCR产物克隆序列测定等技术对该家系进行了系统的研究。发现该家系中全部母系亲属有mtDNAA15 5 5G突变 ,而家系中非母系个体、对照组 (10 0例正常个体 )的mtDNA 15 5 5位点均为A。该家系mtDNA 744 5位点无突变 ;该家系属于II型线粒体 ;发现家系D -loop区存在未见报道的碱基插入。提示mtDNAA15 5 5G位点突变可能是导致该家系患者致聋的主要因素之一。遗传背景可能对家系疾病的表型存在一定程度的影响。 牟奕 单祥年 严明 刘宁生 鲁晓萱 邢光前 卜行宽 杨焕明关键词:线粒体DNA 点突变 家系