龙剑明
- 作品数：12 被引量：59H指数：5
- 供职机构：广西大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划广西科技创新能力与条件建设项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 鹅副粘病毒病免疫程序探讨被引量：3
- 2009年
- 研究先使用商品新城疫Ⅳ系弱毒苗对ND抗体检测为阴性的实验鹅进行首免和二免,再用鹅副粘病毒油乳剂灭活苗进行加强免疫。定期抽取血清用HI试验检测抗体滴度,并抽取部分有抗体滴度的鹅进行攻毒试验。结果表明:在一免后抗体滴度没有变化,而进行二免后,抗体滴度可达到3log2～4log2,加强免疫后达到10log2左右,且能抵抗强毒的攻击。
- 许瑞胜潘杰龙剑明徐贤坤胡晓静冯淑萍何丹熊毅
- 关键词：鹅副粘病毒病免疫效果免疫程序
- 广西地区无症状猪中猪链球菌2型分子流行病学研究被引量：6
- 2007年
- 目的了解广西地区无症状猪中猪链球菌2型的带菌情况以及主要毒力因子的分布和抗药性。方法从广西地区10个县区屠宰场采集无症状猪的扁桃体标本进行细菌分离、多重PCR鉴定和药物敏感性分析。结果从采集到的1179份扁桃体标本中分离出1105株链球菌，其中猪链球菌667株，猪链球菌2型33株；对33株2型菌进行主要毒力因子检测，强毒型“y＋mrp＋epf＋22株，占66．7％，sly＋mrp＋epf-1株，sly-mrp＋epf-7株，sly-mrp＋epf＋2株，sly-mrp-epf-1株；33株2型菌对青霉素、红霉素、万古霉素、庆大霉素、壮观霉素、恩诺沙星、环丙沙星、先锋霉素Ⅵ、磺胺嘧啶钠、呋喃妥因、新霉素、丁胺卡那和四环素都存在不同程度的耐药性，其中先锋霉素Ⅵ、青霉素、恩诺沙星相对敏感，分别有93．9％（31／33）、87．9％（29／33）和81．8％（27／33）的菌株在中度敏感以上，而耐药性强的是丁胺卡那和四环素，耐药菌株分别有84．8％（28／33）和81．8％（27/33）。结论广西地区无症状猪中猪链球菌2型带菌率较低，疫点与非疫点的带菌率没有明显差异；分离的菌株多以强毒型sly＋mrp＋epf＋存在，对先锋霉素Ⅵ最敏感。
- 熊毅刘棋覃芳芸白昀朱伟李华明郭建刚覃伦潘杰龙剑明陈磊
- 关键词：猪链球菌2型分子流行病学研究
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株与NSP2变异株二重PCR诊断方法的建立及应用被引量：5
- 2009年
- 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型标准株VR2332保守序列与近年PRRSV自然变异株序列分析研究,设计合成了2对特异引物,分别扩增出225、427bp两条特异型基因片段,通过优化RT-PCR条件,建立了可同时检测PRRSV标准株和NSP2变异株的二重PCR诊断方法。应用该方法分别对广西不同地区的16份病、死猪的血液、肺等组织进行检测,结果15份PRRSV阳性,其中1份为标准株,14份为变异株。试验结果表明,PRRSV标准株与变异株二重PCR诊断方法具有高度特异性、敏感性和实用性,可用于临床诊断,为目前流行的猪高热病病原研究及广西PRRS的防制提供了一定科学依据。
- 何丹龙剑明傅薇冯淑萍胡晓静付建刘棋
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株二重PCR
- 广西猪伪狂犬病毒感染状况调查报告被引量：8
- 2008年
- 为了解广西猪伪狂犬病毒的感染状况,应用PCR技术对来自广西46个种猪场的1940份公猪精液进行了猪伪狂犬病毒(PRV)的检测,阳性率为0;同时对广西25个已使用猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗猪场的1455份送检血清,采用了猪伪狂犬病基因缺失鉴别ELISA方法进行了血清学抗体监测,结果检出猪伪狂犬gE抗体阳性11份,阳性率为0.76%。结果表明,广西猪群中存在猪伪狂犬病野毒感染,但感染率较低。
- 付薇胡晓静朱伟潘杰龙剑明王常伟刘棋
- 关键词：PCR
- 猪链球菌2型多重PCR检测方法的建立及应用被引量：10
- 2007年
- 设计3对引物,分别扩增链球菌属特异性gdh、猪链球菌种特异性16S rRNA和猪链球菌2型特异性cps2J等基因,目的片段大小分别为725bp、523bp和387bp。利用合成的3对引物并通过对反应条件与反应体系的优化建立了多重PCR。应用该多重PCR检测了分离到的链球菌1105株,检出猪链球菌667株,猪链球菌2型33株。研究结果表明,该方法特异性高、敏感性强,可广泛应用于猪链球菌病的快速诊断及流行病学调查。
- 覃芳芸熊毅盛宇明白昀覃伦朱伟李华明潘杰龙剑明陈磊刘棋
- 关键词：猪链球菌2型三重PCR
- 小鹅瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立被引量：5
- 2008年
- 付薇潘杰龙剑明朱伟胡晓静冯淑萍何丹熊毅
- 关键词：小鹅瘟病毒PCR检测方法荧光定量鹅细小病毒雏番鸭渗出性
- 牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用被引量：9
- 2009年
- 采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定,获得约42 ku带有6×His蛋白标签的rHIS-CFP10/ESAT6融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的40%。用HIS蛋白纯化柱纯化该蛋白,Western-blot分析显示,该融合蛋白能与抗牛结核分枝杆菌阳性血清发生特异性反应。将重组的该融合蛋白用于刺激单次皮内变态反应阳性牛全血,可以产生高水平的IFN-γ,其特异性优于结核菌素。结果表明,获得的重组融合蛋白rHIS-CFP10/ESAT6为牛结核病的诊断奠定了基础。
- 徐贤坤熊毅龙剑明刘棋曾宪垠
- 关键词：牛结核病融合蛋白CFP-10ESAT-6
- 水牛IFN-γ成熟蛋白基因的原核表达及其产物多克隆抗体的制备被引量：2
- 2008年
- 将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达。应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行分离纯化,并采用ELISA和Western-blot试验鉴定重组蛋白的免疫活性。将可溶性纯化蛋白作为抗原免疫小鼠,包涵体蛋白经SDS-PAGE分析后切取目的蛋白免疫小鼠以制备多克隆抗体。结果表明:重组菌经37℃0.5 mmol/L的IPTG诱导3 h,表达出43 ku的融合蛋白。目的蛋白的表达量达到菌体总蛋白量的30%,分别以可溶性和包涵体两种形式存在,而可溶性表达蛋白纯化后的纯度较高。获得的重组蛋白具有良好的免疫活性。均能从可溶性蛋白及包涵体蛋白免疫小鼠得到针对rGST-BoIFN-γ的特异性多克隆抗体。
- 徐贤坤熊毅龙剑明刘棋曾宪垠
- 关键词：大肠杆菌表达系统水牛多克隆抗体BALB/C小鼠
- 猪链球菌9型的分离与鉴定被引量：7
- 2007年
- 白昀覃伦龙剑明熊毅覃芳芸朱伟郭建刚李华明刘棋
- 关键词：猪链球菌2型分子生物学鉴定猪链球菌病人畜共患病链球菌属
- 双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用被引量：1
- 2012年
- 纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓度为625 ng/mL,检测抗体的工作效价为1∶100;所建立的DAS-ELISA方法检测灵敏度25 ng/mL,批内变异系数为0.52%～6.86%,批间变异系数为5.6%～7.07%。采集60头单次皮内注射结核菌素的水牛肝素钠抗凝全血,利用牛结核杆菌特异性抗原rHIS-CFP10/ESAT-6融合蛋白体外刺激外周血淋巴细胞释放IFN-γ,用所建立的夹心ELISA检测所有样本,与皮内变态反应试验比较,结果显示,自制夹心ELISA方法检测水牛结核病的敏感性为62%,特异性为87%,符合率为75%,表明可应用于水牛结核病的检测。
- 徐贤坤熊毅刘棋曾宪垠龙剑明
- 关键词：结核病ELISA单克隆抗体
