袁丁
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- SREBP-1c激活大鼠PNPLA3基因转录
- 许婧刘宏霞徐芬袁丁梁华
- PNPLA3对棕榈酸引起的肝细胞凋亡的影响被引量：3
- 2016年
- 目的研究含patatin样磷脂酶域3（PNPLA3）对棕榈酸（PA）引起的肝细胞凋亡的影响及相关机制。方法以人肝癌细胞株HepG2为研究对象，分为过表达空载体（NC）组，过表达野生型PNPLA3（PNPLA3 WT）组以及过表达突变型PNPLA3（PNPLA3 I148M）组，PA处理24h，油红染色检测细胞内脂质沉积，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，蛋白印迹法检测内质网应激及相关凋亡蛋白水平；酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞上清溶血卵磷脂（LPC）水平。结果PA处理24h后，3组细胞脂肪沉积差异无统计学意义（P〉0．05）。与NC组相比，PNPLA3 WT和PNPLA3 I148M 组细胞凋亡率分别增加了2倍和3倍。内质网应激相关的蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）通路激活，免疫球蛋白结合蛋白（BIP）、p-PERK、p-eIF2α蛋白表达增加，内质网应激凋亡通路CCAAT增强子结合蛋白（CHOP）、线粒体凋亡通路相关蛋白p53上调凋亡因子（PUMA）、Bax、caspase-3表达增加，且PNPLA3 I148M组增加更明显。PNPLA3wT和PNPLA3 I148M组在PA干预前后细胞上清LPC水平分约别为NC组的5倍和1．5倍。结论PNPLA3可能通过调节LPC的代谢继而激活内质网应激相关凋亡途径参与PA诱导的肝细胞凋亡。
- 袁淑华梁华蔡梦茵徐芬袁丁郑晓彬李麦心悦翁建平
- 关键词：非酒精性脂肪肝溶血磷脂酰胆碱棕榈酸细胞凋亡
- 人PNPLA3基因启动子转录调控的初步分析
- 刘宏霞许婧徐芬袁丁梁华
- 胰岛素及格列齐特治疗改善2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的机制探讨
- 目的 探讨胰岛素治疗及格列齐特治疗对2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制.方法 构建高脂及小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型.通过肝脏油红O染色观察其肝细胞脂质沉积情况.通过Western blotting检测肝...
- 袁丁梁华刘宏霞许婧徐芬严晋华翁建平
- 固醇调节元件结合蛋白1c激活大鼠Patatin样磷酯酶结构域蛋白3基因转录
- 2013年
- 目的探讨固醇调节元件结合蛋白1c（SREBP-1e）对Patatin样磷酯酶结构域蛋白3（PNPLA3）基因的转录调控作用。方法构建7周龄雄性体重匹配的禁食（24h）以及禁食后再喂食（48h）SD大鼠（自由饮食组3只，饥饿组3只，再喂食组4只）和高脂及小剂量链脲佐菌素诱导的2型糖尿病sD大鼠（正常对照组5只，2型糖尿病组6只）。用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western blotting法检测各组大鼠肝脏组织中SREBP一1c和PAPM3的表达水平。将大鼠PⅣP翻3启动子5’端上游-1000bp序列分成3段，分别构建荧光素酶报告载体（R—PⅣPM3．1、R—PM似3—2、R—PNPL43—3），转染人正常肝细胞株L02，比较3个载体基础荧光素酶活性以及SREBP-1e过表达诱导的荧光素酶活性。分析上述实验中荧光素酶活性最高的PNPLA3启动子片段可能的SREBP-1c结合位点（SRE），分别构建野生型和SRE突变型报告载体，比较两个载体荧光素酶活性。多组定量资料比较用方差分析，两组定量资料比较用t检验。结果与自由饮食组相比，饥饿组大鼠肝脏SREBP—lc、PNPLA3和脂肪酸合成酶FAS基因表达均下降，再喂食组三者表达显著升高，差异均有统计学意义（F=114．14，334．11，754．20，均P〈0．05）。与正常对照组相比，2型糖尿病组SREBP-1e、PNPLA3基因（t=-18．39，-30．07，均P〈0．05）及蛋白表达（t=4．58，6．81，均P〈0．05）均显著增高。R—PNPLA3-1报告载体基础荧光素酶活性较对照升高51．13倍（t=-28．93，P〈0．05），R一删PM3—2和R—PNPLA3—3无基础荧光素酶活性；在L02细胞中，转染SREBP-1c表达质粒的R—PⅣPL43—1组荧光比值较转染空质粒的组升高2．63倍（t=-7．64，P〈0．05），而R—PⅣPM3．2组及R—PNPLA3—3组转染SREBP-1e表达质粒荧光比值较转染空质粒组均无变化；PNPLA3启动子-100～-911）p存在SRE，SRE突变的报告载体（MUT—R—PNPL
- 许婧梁华刘宏霞徐芬袁丁严晋华翁建平
- 关键词：固醇调节元件结合蛋白1C转录调控
- 人PNPLA3基因启动子转录调控的初步分析
- 目的构建不同片段长度的人PNPLA3基因上游启动子区的荧光素酶报告基因载体,并在HEPG2,LO2和HEK293细胞中比较不同长度启动子片段的相对荧光素酶活性以确定PNPLA3基因上游启动子区的主要转录调控区,进一步运用...
- 刘宏霞许婧徐芬袁丁梁华
- 文献传递
- SREBP-1c激活大鼠PNPLA3基因转录
- 目的探讨大鼠Patatin样磷酯酶结构域蛋白3(PNPLA3)是否受固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)直接调控。方法从大鼠全血基因组中克隆出3段首尾相接的PNPLA3启动子片段(R-PNPLA3-1、R-PNP...
- 许婧刘宏霞徐芬袁丁梁华
- 文献传递
- 胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病大鼠肝脏脂质沉积的机制探讨被引量：8
- 2014年
- 目的:探讨胰岛素及格列齐特治疗2型糖尿病对大鼠肝脏脂质沉积的影响及机制。方法:制备高脂及链脲佐菌素诱导的2型糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病组、胰岛素组和格列齐特组,并设正常对照组。通过肝脏油红O染色观察其肝细胞脂质沉积情况;ELISA检测血清脂联素水平;实时荧光定量PCR检测肝脏脂联素受体1(AdipoR1)mRNA表达;Western blotting检测肝脏腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(Thr172p-AMPK)、固醇调节因子结合蛋白1c(SREBP-1c)、磷酸化的固醇调节因子结合蛋白1c(Ser372p-SREBP1-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、磷酸化的乙酰辅酶A羧化酶(Ser79p-ACC)和免疫球蛋白结合蛋白(BiP)的表达。结果:糖尿病组肝细胞脂质沉积较正常对照组明显增多,胰岛素和格列齐特治疗后肝细胞脂质沉积明显改善。胰岛素治疗后,血清脂联素的水平及肝脏AdipoR1 mRNA水平较糖尿病组和正常对照组显著升高(P<0.01),而格列齐特治疗后两者水平恢复至正常对照组水平。Western blotting结果显示,糖尿病大鼠与正常对照组比较,肝脏Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c和Ser79p-ACC/ACC表达明显降低(P<0.01),BiP表达明显升高(P<0.01)。胰岛素治疗后,Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372p-SREBP-1c/SREBP-1c显著升高(P<0.01),Ser79p-ACC/ACC和BiP蛋白表达恢复至正常对照组水平。而格列齐特治疗后Thr172p-AMPK/AMPK和Ser372pSREBP-1c/SREBP-1c恢复至正常对照组水平,BiP蛋白表达显著下降(P<0.01),Ser79p-ACC/ACC与糖尿病组比较无明显改善。结论:胰岛素和格列齐特治疗均能通过激活脂联素-AMPK减轻2型糖尿病大鼠肝脏的脂质沉积。但两者作用的分子机制有所不同。胰岛素激活AMPK,通过抑制SREBP-1c表达、直接磷酸化SREBP-1c抑制SREBP-1c入核等短期和长期的作用以及抑制内质网应激影响SREBP-1c,减少脂质合成;而格列齐特仅通过磷酸化的短期作用和抑制内�
- 袁丁梁华刘宏霞许婧徐芬严晋华翁建平
- 关键词：胰岛素格列齐特脂质沉积
- 人PNPLA3基因启动子转录调控的初步分析
- 2013年
- 目的构建人PNPLA3基因不同长度的上游启动子荧光素酶报告基因裁体,在LO2细胞中比较不同长度启动子片段的活性,为研究PNPLA3基因的转录调控机制提供初步依据。方法对PNPLA3基因5'侧翼区约1 400个碱基进行生物信息学分析,预测其转录调控区域;利用PCR及酶切方法,以人外周血中全基因组DNA为模版扩增不同长度的PNPLA3基因上游启动子区序列,分别构建荧光素酶基因报告载体。瞬时转染LO2细胞,利用双荧光素酶报告基因分析系统检测各启动子的转录活性。利用在线分析软件预测PNPLA3基因主要转录调控区的潜在转录因子结合位点。结果成功构建5段不同长度的PNPLA3基因上游启动子区的报告载体;在LO2细胞内启动子活性随片段长度变化,表现为当PNPLA3启动子片段从-1015截短到-647,从-647截短至-553,从-553截短至-333时活性变化不大,而从-333截短至-8时活性显著下降(P<0.05);Match分析显示-333～-8片段具有多个转录因子结合位点。结论初步判断-333～-8区是PNPLA3基因的主要转录调控区。
- 刘宏霞梁华许婧徐芬袁丁严晋华翁建平
- 关键词：启动子转录调控荧光素酶
