李谨革
- 作品数：93 被引量：315H指数：10
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省科技攻关计划军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 抗血管内皮生长因子多位点核酶的合成及其体外切割作用
- 2005年
- 目的:设计合成血管内皮生长因子多位点核酶,探 讨其对靶RNA的切割作用.方法:利用计算机辅助设计针对 VEGF165的3个单位点核酶(Rz1,Rz2,Rz3)和联合型多位 点核酶(Rz123),构建其自剪切转录载体,观察多位点核酶对 靶RNA的切割作用.结果:构建的多位点核酶自剪切转录载 体在体外转录中,顺式核酶发生了自身剪切,并释放出正确的 目的核酶,多位点核酶可切割靶RNA,且效率高于单一核酶, 其切割效率分别为(37±10)%(Rz1),(51±8)%(Rz2), (68±15)%(Rz3)和(88±11)%(Rz123).结论:抗血管内 皮生长因子多位点核酶体外可联合切割靶RNA,具有较高的 生物活性.
- 谷仲平王耀程周勇安李谨革张涛陈农安
- 关键词：内皮血管内皮生长因子体外研究
- 腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的诱向作用被引量：6
- 2006年
- 目的观察并探讨在体外坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养中腺样囊性癌细胞对由坐骨神经长出的雪旺氏细胞生长、迁移的影响。方法采用细胞培养技术将腺样囊性癌细胞、舌癌细胞及成纤维细胞分别与小鼠坐骨神经共培养;制备腺样囊性癌细胞与坐骨神经共培养细胞玻片,并行S100免疫组化染色实验。结果坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养中由坐骨神经长出的雪旺氏细胞向腺样囊性癌细胞群落迁移,表现出趋化性;舌癌细胞与成纤维细胞对雪旺氏细胞无诱向作用;经S100免疫组化染色,坐骨神经生长出长梭形的细胞,染色阳性,为雪旺细胞;多边形的细胞染色阴性,为成纤维细胞。结论坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养中长出的雪旺氏细胞向腺样囊性癌细胞群落趋化性生长,可能是腺样囊性癌嗜神经性重要机理之一,与腺样囊性癌细胞发生雪旺细胞分化有关。
- 余立强孙沫逸张圃杨耀武李建虎王磊李谨革
- 关键词：腺样囊性癌雪旺细胞嗜神经侵袭趋化性
- 不同载体表达核酶对HBV mRNA细胞内表达的阻断作用被引量：3
- 2003年
- 目的:探讨多位点自剪切核酶及突变核酶对细胞内HBVmRNA的切割作用.方法:构建5个不同的多位点核酶及突变核酶的真核表达载体,将他们分别与乙型肝炎病毒全基因序列共转染HepG2细胞,用ELISA,共聚焦定量及图像分析的方法观察多位点核酶在细胞内对HBVmRNA切割作用.结果:构建的真核表达载体在细胞内确可表达出多位点核酶,核酶及突变核酶在细胞内对HBV基因的表达均有抑制作用,不同表达载体的抑制率不同,以tRNA启动子的表达载体抑制效率最高,达81%,突变核酶亦有部分反义RNA的抑制效果.结论:抗乙型肝炎病毒核酶在细胞内可抑制HBV基因的表达,不同表达载体其核酶的表达效率不同.
- 李谨革连建奇贾战生冯志华聂青和王九平黄长形白雪帆
- 关键词：HBVMRNA细胞内表达阻断作用真核表达载体乙型肝炎病毒
- HCV结构基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd.HCV-S的构建、鉴定及表达被引量：1
- 2001年
- 目的：构建能表达HCV结构基因(C+E1+E2)的腺病毒表达载体的重组骨架质粒,为进一步包装能高效表达HCV结构基因的腺病毒载体做准备. 方法：用分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的HCV结构基因上、下游引物,以含有HCV H株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCV结构基因片段,基因片段回收后,以BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd.CMV-Link.1中CMV启动子下游BglⅡ与HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-S.通过Bgl Ⅱ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行了鉴定.以抗HCV C单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法检测了pAd.HCV-S在人肝癌细胞7721中的瞬时表达. 结果：酶切、PCR及测序鉴定证实,pAd.HCV-S插入片段为HCV C+E1+E2区基因片段,免疫荧光法检测表明其可以在7721细胞中瞬时表达. 结论：构建的质粒pAd.HCV-S可以表达HCV结构基因,为包装表达HCV结构基因的腺病毒载体奠定了基础.
- 郝春秋周永兴冯志华李谨革贾战生王平忠
- 关键词：丙型肝炎病毒结构基因腺病毒HCV
- 丙型肝炎病毒核心基因免疫研究被引量：11
- 1998年
- 目的研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心（Ｃ）基因免疫用于预防和治疗ＨＣＶ感染的可行性和有效性．方法将ＨＣＶＣ基因片段插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３质粒ＣＭＶ启动子的下游，在证实其可以在小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０（Ｈ２ｄ）中表达之后，将重组质粒注射ＢＡＬＢ／ｃ（Ｈ２ｄ）小鼠股四头肌，ＥＬＩＳＡ检测血清中抗体产生水平；３ＨＴｄＲ掺入法测定免疫小鼠淋巴细胞ＨＣＶＣ抗原特异性增殖能力，４ｈ５１Ｃｒ释放法检测免疫小鼠细胞毒Ｔ细胞（ＣＴＬｓ）体外杀伤功能．结果免疫小鼠２０只，初次免疫２ｗｋ后，血清中均出现了ＨＣＶＣ抗体，且增加免疫剂量可提高抗体滴度；淋巴细胞增殖指数为６１０，明显高于对照组（Ｐ＜００１），ＣＴＬｓ体外特异性杀伤率为６３１％，也高于对照组（Ｐ＜００１）．结论ＨＣＶＣ基因免疫不仅可以诱导机体产生特异性的体液免疫，而且产生特异性的细胞免疫，它可能是防治ＨＣＶ的有效方法．
- 周永兴冯志华贾战生连建奇李谨革李文波
- 关键词：丙型肝炎病毒基因免疫肝炎
- 不同血清型汉坦病毒基因重排的研究被引量：1
- 2007年
- 目的探明汉坦病毒HTN型与SEO型、HTN型与PHV型之间基因重排的频率和特点。方法分别用相同滴度的汉坦病毒HTN型与SEO型(76-118株与SR-11株),及汉坦病毒HTN型与PHV型(76-118株与PHV株)毒株分别混合感染VeroE6细胞,用空斑形成试验挑选子代病毒克隆,挑得的单个病毒克隆在VeroE6细胞上扩增。分别用分型引物对子代病毒进行RT-PCR实验,以确定子代病毒L、M、S片段核酸的来源,鉴定子代病毒基因型。结果发现76-118株与SR-11株混种的子代病毒株基因30/44株来源于亲代病毒,9/44株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与PHV株混种的子代病毒株基因26/36株来源于亲代病毒,3/36株子代病毒发生了基因片段重排。76-118株与SR-11株混种的子代病毒株的基因重排率(20.45%)明显高于76-118株与PHV株混种的子代病毒株(8.33%)。结论这种重排率的差异可能是由于HTN型与SEO型HV基因核酸序列之间的同源性较高,而更容易发生基因重排。而HTN型与PHV型HV基因核酸序列之间的同源性较低,发生基因重排的机会显著降低。
- 康文臻黄长形白雪帆杨为松李光玉李谨革谢玉梅张岩
- 关键词：汉坦病毒肾综合征出血热基因重排聚合酶链式反应
- 锤头结构核酶在人肝癌细胞内对丙型肝炎病毒基因表达的抑制作用被引量：4
- 1999年
- 贾战生周永兴连建奇冯志华李谨革焦成松李光玉张文彬
- 关键词：肝癌丙型肝炎病毒
- 全文增补中
- 肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗乙肝病毒的研究被引量：13
- 2003年
- 目的:探讨肝靶向十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒抗HBV的作用.方法:以半乳糖苷为载体,构建十六酸拉咪呋啶酯固体脂质纳米粒(PLN-LAGS),将其靶向导入2.2.15细胞,共同温育10d后,观察对细胞的毒性作用;同时将LAP-GSLN尾静脉注入小鼠体内,RP-HPLC测定拉米呋定(lamivudine,LA)在血清、肝、肾、肺及脾中的分布,用ELISA和荧光定量PCR检测多个时期培养上清中HBsAg,HBeAg和HBVDNA.结果:LAP-GSLN在肝脏中具有靶向性,LAP-GSLN组肝脏的含药量为LA组的3.3倍;导向后4d出现对HBV-DNA的抑制,在药物浓度10.0mg/L时LAP-GSLN组HBVDNA<1.11×107拷贝/L,而单纯LA组则为5.06×109拷贝/L;6d出现对HBsAg,HBeAg抑制,在药物浓度0.01mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为52.9%,53.9%;32.2%,31.1%;在药物浓度10.0mg/L时,LAP-GSLN,LA组对HBsAg,HBeAg抑制率分别为67.2%,69.0%;45.1%,41.0%.未发现对2.2.15细胞的毒性作用.结论:小剂量半乳糖介导十六酸拉米呋定脂质纳米粒能快速有效的抑制HBV抗原表达和DNA复制.
- 王九平白雪帆张三奇李谨革张颖张岩薛克昌顾宜王平忠骆抗先
- 关键词：乙型肝炎疗效
- 白细胞介素-12对DNA疫苗治疗小鼠丙型肝炎病毒皮下移植瘤的增强作用
- 目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心(C)基因DNA疫苗在体内对小鼠HCV皮下移植瘤的治疗作用及白细胞介素-12(IL-12)对其的增强效果。方法:构建含HCV C基因片段的重组真核表达质粒pcDNAHCV-C,用脂质体...
- 冯志华周永兴杜德伟焦成松王全楚贾战生李谨革
- 文献传递
- 小鼠HCV皮下移植瘤的建立及使用DNA疫苗的治疗作用
- 2001年
- 冯志华周永兴杜德伟李谨革贾战生焦成松
- 关键词：小鼠小家鼠HCV菌苗移植瘤
