李坤
- 作品数：4 被引量：15H指数：3
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程环境科学与工程更多>>
- 酿酒酵母POS5基因过表达对L-异亮氨酸合成的促进作用
- 2014年
- L-异亮氨酸是人体必需氨基酸之一,具有很大的商业价值。在谷氨酸棒杆菌中,合成一分子L-异亮氨酸需要消耗四分子NADPH。因此,提高胞内NADPH浓度是提高L-异亮氨酸产量的重要手段之一。在乳糖发酵短杆菌JHI3-156中过量表达酿酒酵母的NADH激酶编码基因POS5△MTS,发酵48 h表达菌株JHI3-156/pDXW-10-POS5△MTS的胞内NADP^+浓度增加了27μmol/L(17%),NADPH浓度增加了36μmol/L(96%);发酵72 h后L-异亮氨酸产量是(3.02±0.52)g/L,比对照菌(1.96±0.04)g/L提高了54%。本研究表明,过表达POS5△MTS基因能提高NADPH的供应,促进了L-异亮氨酸的生物合成。
- 李坤还晓静史锋王小元
- 关键词：L-异亮氨酸
- 谷氨酸棒杆菌NAD激酶的过表达对L-异亮氨酸合成的促进作用被引量：7
- 2012年
- NAD激酶催化辅酶Ⅰ[NAD(H)]发生磷酸化,转变成辅酶Ⅱ[NADP(H)],而还原态辅酶Ⅱ(NADPH)是L-异亮氨酸合成的必要辅因子。为了提高NADPH的供应,首先克隆了谷氨酸棒杆菌NAD激酶基因ppnK,并利用大肠杆菌-棒状杆菌诱导型穿梭表达载体pDXW-8和组成型穿梭表达载体pDXW-9在L-异亮氨酸合成菌——乳糖发酵短杆菌JHI3-156中进行表达。摇瓶发酵后,ppnK诱导表达菌JHI3-156/pDXW-8-ppnK的NAD激酶酶活(4.33±0.74 U/g)比pDXW-8空载菌提高了83.5%,辅酶Ⅱ与辅酶Ⅰ的比例提高了63.8%,L-异亮氨酸产量(3.86±0.12 g/L)提高了82.9%;ppnK组成表达菌JHI3-156/pDXW-9-ppnK的NAD激酶酶活(7.67±0.65 U/g)比pDXW-9空载菌提高了2.20倍,辅酶Ⅱ与辅酶Ⅰ的比例提高了1.34倍,NADPH含量提高了21.7%,L-异亮氨酸产量(2.99±0.18 g/L)提高了41.7%。这说明NAD激酶有助于辅酶Ⅱ的供应和L-异亮氨酸的生物合成,这对于其他氨基酸的生产也有一定的参考依据。
- 还晓静李坤史锋王小元
- 关键词：L-异亮氨酸NAD激酶组成型表达乳糖发酵短杆菌
- 产中性纤维素酶细菌的筛选及培养基优化被引量：3
- 2015年
- 从土壤中筛选到一株产中性纤维素酶的细菌,初步鉴定为芽孢杆菌属。以其为出发菌株,利用单因素及析因试验、爬坡实验、中心组合实验,建立其发酵产酶过程的响应面(RSM)模型,通过对RSM模型分析,得到最优培养基碳氮源组成:麦芽糖质量浓度1.97g/dL、酵母粉-蛋白胨混合氮源(1∶4)2.03g/dL。验证发现,优化后酶活从130.40U/mL提高到194.23U/mL。
- 乐文民李江华刘龙李坤堵国成
- 关键词：芽孢杆菌中性纤维素酶响应面法
- 聚乙烯醇降解菌的筛选与降解条件优化被引量：5
- 2015年
- 为了实现纺织工业废水中PVA1799的生物降解,从纺织印染厂区筛选到一个能快速降解培养基中PVA1799的混合菌系,命名为SH-TD。从中分离出3株纯培养菌株,分别命名鉴定为SH1(Aeromonas sp.),TD5(Pseudomonas sp.),TD33(Acinetobacter sp.)。通过对含PVA1799出发培养基进行单因素及Placckett-Burman实验筛选出三个对PVA1799降解有显著影响的因素分别为Yeast-Extract、(NH4)2HPO4、Ca Cl2·2H2O。然后进行最陡爬坡实验逼近最佳响应面区域,最后通过Box-Behnken设计,利用Design-Expert软件进行回归分析,得到各因素的最佳质量浓度组成为(g/L):Yeast-Extract 0.04、(NH4)2HPO448.42、Ba Cl20.06。在最优条件下,24 h PVA降解率从原先的30%提高到80%。
- 李坤李江华刘龙堵国成陈坚
- 关键词：聚乙烯醇生物降解响应面法
