孙明
- 作品数：23 被引量：74H指数：6
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省中医药管理局基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 热疗联合柔红霉素对人急性髓细胞白血病KG1a细胞增殖抑制及凋亡的影响被引量：7
- 2008年
- 目的观察热疗联合柔红霉素(DNR)对人急性髓细胞白血病细胞株KG1a体外增殖抑制和凋亡的影响。方法甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测DNR作用KG1a细胞48 h抑制50%的药物浓度(IC50),以此浓度为工作浓度,设对照组(正常培养)、热疗组(单纯加热)、化疗组(单纯DNR处理)和热化疗组(加热联合DNR处理),热疗和热化疗各设40℃、42℃、43℃3个温度组,热疗在恒温水浴箱中加热60 min;MTT法检测作用前后对KG1a细胞的抑制作用;甲基纤维素培养体系分析细胞克隆能力;流式细胞仪检测KG1a细胞凋亡率。结果热疗、化疗和热化疗均能抑制KG1a细胞增殖,热化疗组细胞抑制率明显高于化疗组及相同温度的热疗组,且抑制作用随温度的升高而增强(P<0.05);热疗组、化疗组和热化疗组细胞克隆形成率明显低于对照组(P<0.05),热化疗组克隆集体落形成率明显低于热疗组、化疗组(P<0.05);热疗组、化疗组和热化疗组的细胞凋亡率均较对照组显著升高(P<0.05),热化疗组与化疗组及相同温度热疗组相比细胞凋亡率均显著提高(P<0.05)。结论热疗联合DNR能增强对KG1a细胞的体外抑制作用,提高其凋亡率。
- 王国征郭坤元周健孙明李章球周雪云
- 关键词：柔红霉素热疗增殖抑制凋亡
- TJU103体外诱导造血干细胞移植的免疫耐受
- 2008年
- 目的:前期研究表明,吲哚亚甲基异烟腙(简称TJU103)可以明显降低异基因造血干细胞移植小鼠移植物抗宿主病的发生率和程度,明显延长小鼠移植后的生存期。实验拟观察TJU103诱导造血干细胞移植免疫耐受和对移植物抗白血病的影响,探索一条既能降低移植物抗宿主病又能保留移植物抗白血病的移植途径。方法:实验于2007-07/10在南方医科大学珠江医院血液科实验室完成。①实验材料:人急性髓系白血病细胞株KG1a由中国医学科学院血液学研究所宋增璇教授惠赠。10份自愿捐献的健康人外周血白细胞由广州市中心血站提供,等分为供者与受者。②实验方法:采用梯度密度沉淀法常规分离人外周血单个核细胞。以供者外周血单个核细胞作为反应细胞,受者正常外周血单个核细胞作为刺激细胞,体外建立异基因造血干细胞移植中供、受者间的单向混合淋巴细胞反应体系,应用TJU103阻断CD4+T细胞激活的抗原信号通路,设单独刺激细胞和反应细胞对照以及1640完全培养基空白对照。③实验评估:于培养第1、3、5天应用MTT检测TJU103对供者淋巴细胞的增殖活性的影响,于第5天用乳酸脱氢酶释放法分别检测10∶1,20∶1,40∶1效靶比时供者淋巴细胞对受者单个核细胞和急性髓系白血病细胞KG1a的细胞毒活性影响,同时采用流式细胞仪检测CD4+CD25+T细胞的百分比。结果:第3天和第5天实验组A值低于对照组(P<0.05)。单向混合淋巴细胞5d后实验组各效靶比供者T细胞杀伤受者外周血单个核细胞的活性明显低于对照孔(P<0.05);二者对KG1a细胞的杀伤活性差异不显著(P>0.05)。TJU103对供者CD4+CD25+T细胞无影响。结论:TJU103降低T淋巴细胞增殖反应的同时并不影响其抗白血病效应,有望用于临床异基因造血干细胞移植中移植物抗宿主病和移植物抗白血病的免疫调节。
- 周健涂三芳郭坤元孙明胡亮杉吴远彬卢晓珣王杨
- 关键词：TJU103T淋巴细胞增殖细胞毒活性移植物抗宿主病移植物抗白血病免疫耐受
- 苦参碱通过诱导NKG2D配体高表达增强NK细胞对ABCG2high耐药鼻咽癌细胞杀伤活性被引量：10
- 2009年
- 目的探讨苦参碱提高ABCG2High[三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2]耐药鼻咽癌细胞对Allo-NK细胞杀伤敏感性的机制。方法利用免疫磁珠技术分离ABCG2HighCNE2/DDP细胞及Allo-NK细胞,流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率,LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性。结果ABCG2HighCNE2/DDP细胞分离后ABCG2表达率为(91.40±2.32)%,分选后NK细胞CD3-CD16+CD56+细胞的纯度达90%以上,经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率,由药物处理之前的(2.92±0.33)%、(4.27±0.33)%、(5.80±0.62)%、(11.10±3.15)%、(7.75±1.14)%分别上升到(11.30±0.89)%、(14.29±2.61)%、(12.56±1.06)%、(43.24±4.43)%、(12.77±1.06)%。在效靶比为10:1、20:1,Allo-NK细胞对苦参碱处理前后ABCG2HighCNE2/DDP细胞的杀伤率分别为(15.32±1.34)%、(27.26±6.81)%及(28.53±1.37)%、(42.72±2.80)%。处理前后杀伤率有显著性差异(F=29.05,P=0.000)。结论苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3),使肿瘤细胞对Allo-NK细胞的杀伤敏感性增强。
- 黄宇贤王杨孙明周雪云邓兰郭坤元
- 关键词：苦参碱NKG2D杀伤敏感性
- 白藜芦醇提高CD34^＋CD38^-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性被引量：3
- 2009年
- 目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨。方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力。流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达。流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达。结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义。白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P>0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。
- 贾振薇郭坤元孙明王国征卢晓珣佘妙容涂三芳
- 关键词：白藜芦醇白血病NKG2D配体
- NK细胞杀伤ARH-77细胞的活性及机制的初步探讨被引量：1
- 2011年
- 目的探讨同种异体NK细胞杀伤人骨髓瘤ARH-77细胞的活性及机制。方法 LDH释放法检测NK细胞杀伤ARH-77细胞的活性;RT-PCR方法和流式细胞仪分别检测K562和ARH-77细胞NKG2D配体和HLA-I基因和分子。阻断K562和ARH-77细胞NKG2D配体,观察NK细胞杀伤活性的变化。结果相同效靶比时NK细胞杀伤ARH-77细胞的活性明显低于杀伤K562细胞。两种细胞均表达MICA/B和ULBP1～3基因。K562细胞高表达MICA/B和ULBP1～3分子,不表达HLA-Ⅰ类分子;ARH-77细胞低表达ULBP1～3分子,高表达HLA-Ⅰ类分子。ARH-77细胞HLA基因型为A2、3,B15、35,Cw3、4。阻断NKG2D配体,NK细胞对K562细胞的杀伤活性明显降低,对ARH-77细胞的杀伤活性无明显改变;阻断HLA-Ⅰ类分子后,NK细胞对K562细胞的杀伤活性无变化,对ARH-77细胞的杀伤活性明显提高。结论 ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性低,其机制与其高表达HLA-Ⅰ类分子、低表达NKG2D配体有关。
- 周健宋永平魏旭东郭坤元孙明
- 关键词：自然杀伤细胞自然杀伤细胞受体骨髓瘤
- 两种主动免疫特发性血小板减少性紫癜动物模型免疫功能的动态变化被引量：9
- 2010年
- 背景:目前的特发性血小板减少性紫癜模型多为重度,血小板下降显著但持续时间短,与临床患者血小板波动变化的特性拟合不佳。目的:用兔抗小鼠血小板血清及豚鼠抗小鼠血小板血清构建中度特发性血小板减少性紫癜模型,并探讨其适用性。方法:应用不同稀释倍数的抗血小板血清腹腔注射免疫小鼠,筛选出1:32稀释倍数的抗血清制备中度特发性血小板减少性紫癜模型。免疫结束后分8个时间点取血、骨髓及淋巴器官,观察各种细胞、细胞因子及组织结构的改变。结果与结论:两种抗血清免疫后,小鼠血小板数量均下降到正常数目的40%～60%,并能维持7d;骨髓巨核细胞数于免疫后8d明显增加,16d基本恢复正常;红细胞C3b受体花环与红细胞免疫复合物花环率明显下降(P<0.05);白细胞介素2和干扰素γ水平及CD4+/CD8+细胞比例明显升高(P<0.05);脾小巨核细胞增加,胸腺萎缩。说明豚鼠和兔抗小鼠血小板血清制备的慢性特发性血小板减少性紫癜模型存在红细胞免疫功能紊乱,T淋巴细胞亚群比例失调以及细胞因子分泌变化,是一种与临床拟合良好的中度特发性血小板减少性紫癜模型。
- 胡海燕李章球余力姚瑶王国征孙明黄睿张梅霞陆志刚
- 关键词：血小板减少性紫癜动物模型血小板免疫功能
- 苦参碱提高白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤敏感性及其机制被引量：4
- 2009年
- 目的研究苦参碱(Matrine)作用前后白血病KG1a细胞对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法应用CCK-8法检测苦参碱对KG1a细胞50%抑制量IC50值,以此量的苦参碱作用于KG1a细胞,LDH释放法检测作用前后对NK细胞的杀伤敏感性。RT-PCR检测KG1a细胞NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)五种基因的表达,流式细胞仪检测作用前后KG1a细胞表面NKG2D配体和HLA-Ⅰ类分子表达变化。结果苦参碱作用前后在效靶比为5:1、10:1、20:1时对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P<0.05)。KG1a细胞在mRNA水平五种基因均表达,苦参碱作用前KG1a细胞表面NKG2D各配体几乎不表达,作用后各配体显著升高,与作用前相比差异有统计学意义(P<0.05),HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论苦参碱能提高KG1a细胞对NK细胞的杀伤敏感性,其机制可能与苦参碱提高KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。
- 王国征孙明贾振薇周健胡亮杉郭坤元宋朝阳
- 关键词：苦参碱NK细胞NKG2D配体细胞毒性实验
- 三氧化二砷提高多发性骨髓瘤ARH-77细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制。方法分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO作用前后ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性。流式细胞仪检测ARH-77细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达以及ATO作用前后的细胞周期变化。结果ATO对ARH-77细胞的IC50为5.0μmol/L。NK细胞杀伤ATO作用前后ARH-77细胞的活性有显著差异(P<0.05)。ATO作用后,ARH-77细胞发生G1/S期阻滞,同时其表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,二者之间差异有统计学意义(P<0.05)。ULBP2和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P>0.05)。结论ATO能提高ARH-77细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP3)表达;从而使其对NK细胞的杀伤敏感性增强。
- 孙明胡亮杉周健涂三芳卢晓珣牛新青郭坤元
- 关键词：三氧化二砷多发性骨髓瘤NK细胞NKG2D配体
- 基因扫描分析小鼠T细胞受体CDR3谱型检测T细胞克隆技术的建立
- 2008年
- 目的建立小鼠T细胞受体(TCR)互补决定区3(CDR3)谱型的基因扫描分析术,为分析T细胞克隆提供研究方法。方法应用RT-PCR方法分别扩增近交系小鼠C57BL/6H-2b,Balb/CH-2d和F1代小鼠(Balb/c×C57BL/6F1H-2d/b,CB6F1)脾脏T细胞的21个TCRVα家族和18个TCRVβ家族的CDR3,并用基因扫描分析扩增产物以确定T细胞的克隆性。结果3种小鼠脾脏T细胞均表达所有的TCRVα和VβCDR3基因,基因扫描显示全部TCRCDR3谱型呈高斯(钟型)分布,提示均为多克隆T细胞。各家族CDR3基因表达频率接近,但呈现不同的多态性和长度分布。结论基因扫描分析TCRαβCDR3基因谱型是检测小鼠T细胞克隆性的精确敏感方法。
- 周健黄迎吴远彬胡亮杉涂三芳王杨孙明郭爱林郭坤元
- 关键词：小鼠T细胞受体互补决定区3基因扫描T细胞克隆
- 苦参碱对高表达ABCG2人耐药鼻咽癌细胞NKG2D配体表达的诱导作用被引量：8
- 2009年
- 目的：探讨苦参碱对高表达三磷酸腺苷（ATP）结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）人耐药鼻咽癌细胞CNE2／DDP（简写作ABCG_2H^High CNE2／DDP）NKG2D配体表达的诱导作用及其对NK细胞杀伤敏感性的机制。方法：利用免疫磁珠技术分离ABCG_2^High CNE2／DDP细胞及NK细胞，流式细胞技术检测分离后细胞纯度及经苦参碱处理前后靶细胞NKG2D配体表达率，LDH释放测定法检测经苦参碱处理前后ABCG_2^High CNE2／DDP细胞对NK细胞的杀伤敏感性。结果：ABCG_2^High CNE2／DDP细胞分离后ABCG2表达率为（91．40±2．32）％，分选后NK细胞CD3^-CD16^＋CD56^＋细胞的纯度达90％以上，经苦参碱处理之后靶细胞MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3表达率，由药物处理之前的（2．92±0．33）％、（4．27±0．33）％、（5．80±0．62）％、（11．10±3．15）％、（7．75±1．14）％分别上升到（11．30±0．89）％、（14．29±2．61）％、（12．56±1．06）％、（43．24±4．43）％、（12．77±1．06）％。在效靶比为10：1、20：1时，NK细胞对苦参碱处理前后ABCG^2^High CNE2／DDP细胞的杀伤率分别为（15.32±1．34）％、（27．26±6．81）％及（28．53±1．37）％、（42．72±2．80）％。处理前后杀伤率有显著性差异（F=29．05，P=0．000）。结论：苦参碱通过诱导肿瘤细胞高表达NKG2D配体（MICA/B、ULBP1-3），使肿瘤细胞对NK细胞的杀伤敏感性增强。
- 黄宇贤王杨孙明周雪云邓兰郭坤元
- 关键词：NKG2D鼻咽癌
