蔡铭升
- 作品数：8 被引量：5H指数：2
- 供职机构：佛山科学技术学院生命科学学院动物医学系更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划高等学校科技创新工程重大项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 鸭瘟病毒VP26基因克隆和分子特性分析被引量：1
- 2009年
- 利用作者实验室已构建的DPV CHv株基因文库重组质粒的DNA测序信息,结合NCBI的ORF Finder和BLAST工具分析得到了编码该病毒VP26蛋白基因(UL35)的ORF,然后采用PCR扩增出了VP26基因并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR和酶切鉴定以及进一步的核酸斑点杂交试验证实该基因即为DPV的VP26基因。分子特性分析表明:该基因大小为354 bp,编码117 aa,包含1个保守结构域,为Herpes_UL35,与小衣壳蛋白家族相关并在Herpes_UL35基因编码蛋白之间高度保守,而且DPVVP26蛋白与GenBank上多种α疱疹病毒同源蛋白的核酸和氨基酸序列具有较高的同源性。系统进化树分析表明,DPV在分类地位上归属于Alphaherpesvir-us亚科,而且有可能属于新的属。另外,亚细胞定位分析表明,VP26主要定位于细胞核中。密码子偏爱性分析结果显示,编码VP26相同氨基酸的不同密码子使用频率有较大的差异,DPV VP26与大肠杆菌、酵母和人的密码子使用偏爱性差异分别有18、19和25个。上述研究结果为进一步研究DPV VP26蛋白的功能和作用机理提供分子生物学依据。
- 蔡铭升程安春汪铭书朱德康罗启慧招丽婵陈孝跃
- 关键词：鸭瘟病毒克隆分子特性
- 鸭瘟病毒UL35基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主中的亚细胞定位被引量：2
- 2010年
- 根据本实验室获得的鸭瘟病毒(DPV)UL35基因序列(GenBank登录号:EF643558),利用Oligo6.0和Prim-er5.0软件设计一对引物,PCR扩增出DPV CHv强毒株UL35基因,随后将其克隆至pMD18-T构建克隆质粒pMD18-T-UL35,经PCR和酶切鉴定后亚克隆至大肠杆菌原核表达载体pET-32a(+),获得表达质粒pET-32a(+)-UL35后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3),经1.0mmol/L的IPTG在34℃诱导5h获得最佳表达。SDS-PAGE分析表明UL35基因表达的重组蛋白(VP26)分子量约为33kD,薄层扫描分析结果显示VP26占菌体总蛋白的32.3%,主要以包涵体的形式存在。经Ni+-NTA琼脂糖凝胶亲和层析纯化后免疫家兔制备抗VP26重组蛋白血清,血清琼脂扩散试验抗体滴度检测结果达1:32。用High-Q阴离子交换层析纯化抗血清获得兔抗VP26重组蛋白IgG,经Western blot检测显示抗血清可与VP26发生特异性反应。通过免疫荧光技术进行DPVVP26亚细胞定位检测,结果表明DPV感染DEF后2～8h细胞核内荧光的量相对较少,12～36h逐渐增加,48～72h达到最多,并且在细胞核内的斑点区域聚集呈颗粒状分布;而在细胞质内12h才开始出现少量荧光,荧光量在DPV感染后24～48h期间随感染时间延长而增加,在感染后72h最多。以上结果为阐明和进一步开展DPVUL35基因的功能研究提供了重要数据和材料。
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- 关键词：鸭瘟病毒克隆亚细胞定位
- 疱疹病毒UL35基因及其编码蛋白的研究进展
- 疱疹病毒为一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,其基因组由特定长区(UL)和特定短区(US)两个共价结合的片段组成,两端为末端重复序列(TR),UL和US连接处有内部重复序列(IR),UL35是位于疱疹病毒特定...
- 蔡铭升程安春汪铭书
- 关键词：疱疹病毒编码蛋白基因编码
- 文献传递
- 农贸市场肉鸭屠宰过程中肠炎沙门氏菌污染的调查
- 2013年
- 近年来,肠炎沙门氏菌污染的禽产品问题已引起公共卫生界的高度重视。本文作者通过对来自东莞市某镇的10个农贸市场的200份经三鸟档主宰杀的肉鸭肉进行了肠炎沙门氏菌检测,旨在加强肉鸭在屠宰过程中的肠炎沙门氏菌污染的监测。结果显示,鸭肉中肠炎沙门氏菌污染阳性率为1%,表明某镇农贸市场宰杀的肉鸭胴体肠炎沙门氏菌检测率处于较底水平,但存在食品安全隐患。
- 邓树轩叶朗光蔡铭升
- 关键词：肠炎沙门氏菌屠宰
- 鸭瘟病毒UL35基因的原核表达、蛋白纯化、转录时相、表达时相及亚细胞定位
- 论文对本研究小组鉴定的DPV UL35基因/(GenBank登录号EF643558/)开展了以下系列研究:DPV UL35基因序列的分子特性分析,DPV UL35基因的克隆、原核表达和抗体制备,在病毒感染宿主鸭胚成纤维细...
- 蔡铭升
- 关键词：鸭瘟病毒分子特性分析克隆表达转录时相亚细胞定位
- 文献传递
- 动物疱疹病毒基因工程疫苗的研究进展
- 疱疹病毒为一类具有相同形态学且有较大囊膜的双链DNA病毒,其感染在全世界非常普遍。疱疹病毒不仅能产生原发性感染,还存在潜伏感染和复发性感染。此外,某些疱疹病毒是哺乳动物和禽类等肿瘤的病原因子,因此防制此病不容小视。疫苗的...
- 蔡铭升程安春汪铭书
- 关键词：疱疹病毒基因工程疫苗基因缺失疫苗基因重组
- 文献传递
- 动物疱疹病毒基因工程疫苗的研究进展
- 2009年
- 疱疹病毒是一类具有相同形态和较大囊膜的双链DNA病毒,它不仅能引起原发性感染,还能引起潜伏性感染和复发性感染。此外,某些疱疹病毒是哺乳动物和禽类等动物肿瘤的病原因子,因此防制此病毒病不容忽视。疫苗的免疫接种是预防、控制该病毒病的主要手段。文章在简单介绍动物疱疹病毒常规疫苗的基础上对动物疱疹病毒基因工程疫苗进行了综述,并对动物疱疹病毒基因工程疫苗今后的发展方向进行了总结,以期为动物疱疹病毒基因工程疫苗的深入研究提供借鉴。
- 蔡铭升程安春汪铭书
- 关键词：基因工程疫苗基因缺失疫苗
- 疱疹病毒UL35基因及其编码蛋白的研究进展被引量：2
- 2009年
- 蔡铭升程安春汪铭书
- 关键词：疱疹病毒编码蛋白病毒分类病毒粒子DNA病毒病毒蛋白
