焦石
- 作品数：18 被引量：21H指数：3
- 供职机构：延边大学农学院更多>>
- 发文基金：吉林省自然科学基金吉林省科技发展计划基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学经济管理更多>>
- 牛卵形巴贝斯虫PCR检测方法的建立及初步应用被引量：4
- 2012年
- 为建立牛卵形巴贝斯虫(B.ovata)快速检测方法,本研究根据GenBank中登录的B.ovata CCTη基因序列设计引物,建立了PCR检测方法。对该方法的最佳反应条件进行优化,并进行特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的PCR方法扩增B.ovata CCTη基因片段大小为1 008 bp,与参考株序列同源性为100%。该方法对牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、牛瑟氏泰勒虫基因组DNA扩增结果均为阴性。最低可以检测样品中34个拷贝的DNA。通过对49份临床样本的检测,该方法比姬姆萨染色镜检阳性率高8.2%。本实验为B.ovata的诊断提供了一种特异、敏感的检测技术。
- 黄国明贾立军薛书江李闯焦石张守发
- 关键词：PCR
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2012年
- 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的生物学特性。本试验应用PCR技术扩增牛源犬新孢子虫MAG1基因,将PCR产物连接到pMD18-T Simple载体,构建pMD18-T-MAG1克隆质粒,PCR鉴定、酶切鉴定及测序分析后...
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 文献传递
- 犬新孢子虫MAG1与IFN—γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2013年
- 为对犬孢子虫MAGI与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价，本实验以含有MAGI—IFN—γ基因片段的克隆质粒为模板，扩增MAGI—IFN—γ目的片段，构建pVAX-MAGI—IFN-γ重组真核表达质粒，将其转染Vero细胞，
- 焦石贾立军张立霞
- 关键词：犬新孢子虫基因重组共表达VERO细胞
- 牛新孢子虫NcSAG1基因工程亚单位疫苗的免疫试验被引量：4
- 2010年
- 为了解新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗对实验动物的免疫效果,本试验提取延边黄牛新孢子虫野毒株基因组DNA,用PCR技术扩增新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,将Western-blot鉴定具有免疫活性的重组蛋白与弗氏佐剂混合制备NcSAG1基因工程亚单位疫苗,免疫BALB/c小鼠,应用间接ELISA方法测定体液免疫水平,应用流式细胞技术测定细胞免疫水平,以此评价疫苗对实验动物的免疫应答反应。结果显示,制备的NcSAG1基因工程亚单位疫苗免疫BALB/c小鼠后,在三免后第3天时,检测抗体的OD450nm值达0.688;CD4+/CD8+值达3.650,均显著高于重组蛋白免疫组和PBS对照组,说明制备的基因工程亚单位疫苗能够提高实验动物的体液免疫和细胞免疫水平。本试验为牛新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程亚单位疫苗的深入研究奠定了基础。
- 贾立军张守发栾杨焦石
- 关键词：新孢子虫基因工程亚单位疫苗免疫试验
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达被引量：2
- 2013年
- 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫IFN-Γ
- 延边黄牛新孢子虫NcSAG1基因工程疫苗的免疫试验
- 为了解新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因工程疫苗对实验动物的免疫效果,本试验提取延边黄牛新孢子虫野毒株基因组DNA,用PCR技术扩增新孢子虫NcSAG1表面蛋白基因,并在大肠杆菌中进行原核表达,将Western-blott...
- 贾立军栾杨焦石曹世诺张守发
- 文献传递
- 延边黄牛ATF3基因组织表达及其多态性与肉质性状的相关性分析被引量：2
- 2020年
- 本研究旨在分析转录激活因子3(activating transcription factor 3,ATF3)基因在延边黄牛各组织中的表达差异及其多态性与肉质性状的相关性。以70头30月龄的健康延边黄牛为研究对象,用实时荧光定量PCR比较ATF 3基因在延边黄牛心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、后腿肌、眼肌、西冷、上脑和皮下脂肪10个部位的表达水平差异;进一步对ATF 3基因的第4外显子进行PCR扩增,通过Sanger直接测序筛选出SNPs位点,用PCR-RFLP对筛选出的SNPs进行酶切验证,并与肉质性状进行关联分析。结果发现,ATF 3基因在延边黄牛10个组织中均有表达,其中在皮下脂肪组织中表达量极显著高于其他组织(P<0.01);西冷中ATF 3基因相对表达量与肌内脂肪(IMF)含量呈极显著正相关(P<0.01),相关系数为0.996;眼肌中ATF 3基因表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05),相关系数为0.999;上脑和后腿肌中ATF 3基因表达量与IMF含量无显著相关(P>0.05),相关系数分别为0.757和0.658。ATF 3基因1428 bp处存在G→C突变,存在3种基因型:GG、GC、CC,其中GC和CC基因型的脂肪含量、背膘厚均显著高于GG基因型(P<0.05);大理石花纹等级极显著优于GG基因型(P<0.01)。说明该突变位点可作为延边黄牛肉质性状潜在的分子标记,ATF 3基因可能是影响延边黄牛脂肪沉积的候选基因。
- 邵静尹宝珍焦石张珈溯张洛萌耿春银夏广军
- 关键词：延边黄牛组织表达谱多态性肉质性状
- 犬新孢子虫不同靶基因PCR检测方法的比较被引量：3
- 2012年
- 为筛选出检测犬新孢子虫更为特异、敏感的PCR方法,分别以MAG1、SAG1和Nc5为靶基因进行PCR检测,并从敏感性、特异性和临床样本检出率等方面进行了比较。结果显示,以Nc5为靶基因的PCR方法敏感性最高,最小检测DNA量为17.8fg/μL;以MAG1为靶基因的PCR方法敏感性最低,最小检测DNA量为17.8pg/μL;而以SAG1为靶基因的PCR方法的最低检测量为178fg/μL;3种靶基因引物均扩增不出刚地弓形虫、牛瑟氏泰勒虫、猪附红细胞体等基因片段,具有较好的特异性;对28份已攻犬新孢子虫标准株的BALB/c小鼠组织样本的检测结果表明,以Nc5基因设计的引物检出率最高,为75.0%(21/28),明显高于SAG1基因的67.9%(19/28)和MAG1基因的53.6%(15/28)。本试验为新孢子虫病的诊断及流行病学调查提供了更为敏感、特异的检测技术。
- 郭焕平贾立军焦石张守发
- 关键词：犬新孢子虫SAG1基因PCR方法
- 牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达
- 2012年
- 为了解牛源犬新孢子虫MAG1基因的免疫学特性,根据MAG1基因序列,设计并合成了1对用于扩增MAG1基因的引物。将PCR扩增产物连接到原核表达载体pGEX-4T-2上,转化大肠杆菌BL21(DE3)中。SDS-PAGE结果显示,MAG1在大肠杆菌中获得了较高水平的表达,表达蛋白的分子质量为65ku。Western-blot结果显示,表达的MAG1蛋白可被牛源犬新孢子虫阳性血清特异性识别,表明该MAG1蛋白具有较好的反应原性。本研究为新孢子虫病疫苗及诊断试剂盒的研究奠定了基础。
- 焦石贾立军薛书江刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫原核表达
