张立霞
- 作品数：11 被引量：25H指数：3
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- 杆状病毒表面展示甲型流感病毒核蛋白的免疫原性及保护效果的初步评价被引量：6
- 2013年
- 流感病毒的核蛋白(Nucleoprotein,NP)高度保守,具有型特异性,能够诱导产生细胞介导的免疫应答,从而起到保护作用,抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究利用杆状病毒表面展示技术,将杆状病毒GP64蛋白的信号肽(Signal peptide,SP)和胞质尾(Cytoplasmic tail,CT)与甲型流感病毒(A/Hubei/1/2010(H5H1))的NP蛋白融合表达,从而将NP蛋白展示在杆状病毒的表面,并对该病毒NP蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。Westernblot实验证明NP蛋白可以在Sf9细胞中有效表达。免疫电镜试验显示NP蛋白已成功展示在杆状病毒表面。通过小鼠感染实验,ELISA结果证明NP疫苗可以诱导产生高水平的IgG血清抗体。ELISPOT结果表明NP蛋白的2个细胞免疫抗原表位(NP57-66IQNSITIERM和NP441-450RTEIIKMMES)可以诱导小鼠脾淋巴细胞产生IFN-γ,利用NP57-66、NP441-450和NP蛋白均可刺激CD4+和CD8+T细胞产生IFN-γ,但主要以CD8+诱导为主,表明重组病毒可以产生有效的细胞免疫反应。利用小鼠鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)进行攻毒实验,结果表明该重组病毒感染小鼠后可以降低小鼠肺病毒载量,减轻肺组织损伤,减少体重下降,并可以保护50%小鼠存活。
- 张立霞周剑芳于在江舒跃龙
- 关键词：NP蛋白H5N1禽流感病毒
- 犬新孢子虫MAG1与IFN—γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2013年
- 为对犬孢子虫MAGI与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价，本实验以含有MAGI—IFN—γ基因片段的克隆质粒为模板，扩增MAGI—IFN—γ目的片段，构建pVAX-MAGI—IFN-γ重组真核表达质粒，将其转染Vero细胞，
- 焦石贾立军张立霞
- 关键词：犬新孢子虫基因重组共表达VERO细胞
- 基于杆状病毒表面展示技术的流感病毒NP疫苗研究
- 流感病毒的核蛋白（nucleoprotein，NP）高度保守，具有型特异性，能够诱导产生细胞介导的免疫应答，从而起到保护作用，抵抗不同亚型流感病毒的攻击。本研究主要利用杆状病毒表面展示技术，使用杆状病毒 GP64蛋白的信...
- 张立霞
- 关键词：禽流感病毒杆状病毒免疫原性
- 文献传递
- H5N1禽流感病毒headless HA基因在杆状病毒中的表达被引量：3
- 2012年
- 目的建立能有效表达禽流感病毒A／Hubei／1／2010（H5N1）无头HA（headlessHA）的杆状病毒系统。方法利用RT—PCR扩增获得headlessHA基因，克隆至杆状病毒转移载体pFastBacl，命名为pFastBaclheadlessHA。将pFastBaclheadlessHA转化到DH10Bae感受态细胞，获得重组穿梭质粒HeadlessHA—Bac。利用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统，转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并进行WesternBlot和红细胞凝集试验检测。结果HeadlessHA在St9细胞中能有效表达，不能使红细胞发生凝集。结论本研究为利用headlessHA表达蛋白研制广谱流感疫苗奠定了基础。
- 张立霞于在江周剑芳秦堃许应天舒跃龙
- 关键词：基因流感病毒A型
- 延边黄牛γ-干扰素基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2017年
- 应用刀豆素蛋白(ConA)和植物分裂素(PHA)双重诱导培养延边黄牛脾淋巴细胞,提取脾淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增延边黄牛γ-干扰素基因,并将其克隆到pMD-18-T simple载体中,进行PCR鉴定和酶切鉴定及测序。结果表明:成功克隆了462bp大小的延边黄牛γ-干扰素基因片段;所克隆基因片段序列与欧洲牛、印度牛的亲缘关系最近,同源性分别为99.8%和99.6%,与欧洲牛的氨基酸同源性为100%。本试验为进一步研究延边黄牛γ-干扰素生物学作用奠定了基础。
- 尹昌善张立霞薛书江宋建臣李海峰许应天
- 关键词：延边黄牛Γ-干扰素基因克隆
- 流感病毒样颗粒疫苗研究进展被引量：13
- 2011年
- 流行性感冒（流感）是由正粘病毒科的负链RNA流感病毒引起的一种上呼吸道急性传染病,它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高,严重影响着人类的健康和全球经济的发展,对老年人和婴幼儿危害尤其大。在人类历史上曾经历过多次流感大流行，死亡惨重，
- 张立霞于在江周剑芳舒跃龙
- 关键词：病毒样颗粒人类历史急性传染病正粘病毒科流行性感冒上呼吸道
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及原核共表达被引量：2
- 2013年
- 根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1)设计2对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pET28α-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合酶链式反应(SOE-PCR)将犬新孢子虫MAG1基因与IFN-γ基因拼接,构建pMD18-T-MAG1-IFN-γ克隆质粒和pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒,将鉴定正确的pGEX-4T-MAG1-IFN-γ重组表达质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting分析表达产物。结果表明,SOE-PCR扩增获得双基因融合片段大小为1 491bp,与GenBank中发表的MAG1(EF580924.1)和IFN-γ(M29867.1)核苷酸序列的同源性为99%;MAG1-IFN-γ融合基因表达蛋白大小为82 000,具有较好的反应原性。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫IFN-Γ
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒的真核共表达及免疫学评价
- 2012年
- 为对犬孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组真核质粒进行免疫学评价,本实验以含有MAG1-IFN-γ基因片段的克隆质粒为模板,扩增MAG1-IFN-γ目的片段,构建pVAX-MAG1-IFN-γ重组真核表达质粒,将其转染Vero细胞,采用间接免疫荧光(IFA)和western blot技术检测MAG1基因在Vero细胞中的表达,并免疫BALB/c小鼠,进行免疫学评价。结果表明,PCR扩增获得基因片段大小为1 536 bp,与GenBank中登录的MAG1和IFN-γ核苷酸序列的同源性为99%;IFA检测MAG1基因在Vero细胞中获得瞬时表达,转染的Vero细胞呈现特异性绿色荧光;western blot分析表达蛋白的分子量为57 ku,具有较好的反应原性。将构建的重组真核表达质粒免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和T淋巴细胞亚群含量测定表明,重组质粒具有较好的免疫原性。本实验为新孢子虫病核酸疫苗的深入研究奠定了基础。
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 关键词：犬新孢子虫
- 延边黄牛白细胞介素18基因的克隆及序列分析
- 2012年
- 本试验旨在扩增延边黄牛白细胞介素18(IL-18)全长cDNA,并对其序列进行进化分析。根据GenBank中已公布的牛IL-18cDNA序列设计1对引物,利用RT-PCR从刀豆蛋白(ConA)和植物分裂素(PHA)双重刺激36h活化的延边黄牛脾淋巴细胞中扩增出牛IL-18全长cDNA,进行PCR、酶切和测序鉴定,并做进化分析及二级结构预测。扩增出延边黄牛IL-18全长cDNA,大小为760bp,其中有两个氨基酸突变。进化分析结果显示,延边黄牛IL-18与牛、山羊、绵羊、马和猪的同源性较高,均大于90%,与同种群牛的同源性最高,而与原鸡的同源性最低,为51.1%。本研究确定了IL-18的种群差异,并预测了二级结构特性,为进一步研究延边黄牛IL-18的基因表达、生物活性及其作为佐剂的应用奠定了基础。
- 张立霞高旭宋建臣孙平杰夏晓辉许应天
- 关键词：RT-PCR进化分析
- 犬新孢子虫MAG1与IFN-γ融合基因重组质粒的构建及真核共表达
- 本试验根据发表的犬新孢子虫MAG1基因序列(EF580924.1)和Bov IFN-γ基因序列(M29867.1),设计两对引物。分别以犬新孢子虫基因组DNA和pet28a-IFN-γ重组质粒为模板,通过重叠延伸拼接聚合...
- 焦石贾立军张立霞钱年超刘明明黄国明张守发
- 文献传递
