李春松
- 作品数：8 被引量：9H指数：2
- 供职机构：四川农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 减毒沙门氏菌介导TGEV S基因与pIL-6基因双顺反子DNA疫苗的构建与免疫原性研究
- 猪传染性胃肠炎(Transmissible gastroenteritis of pigs, TGE)是由冠状病毒科冠状病毒属的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,...
- 李春松
- 关键词：S基因减毒沙门氏菌DNA疫苗
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒S-N融合双基因疫苗的构建及其免疫原性分析被引量：4
- 2012年
- 为了构建TGEV S-N融合双基因疫苗并分析其免疫原性,从S、N基因克隆质粒中以PCR扩增了S基因(2.1kb,含A、B、C、D抗原位点)和N基因(1.2kb),将S基因插入pVAX1载体构建了pVAX-S质粒,再将N基因插入pVAX-S中S基因末端,构建了融合表达S、N双基因的重组质粒pVAX-S-N,将pVAX-S-N转染COS7细胞以免疫荧光试验进行S、N双基因的表达鉴定。用纯化的pVAX-S-N和作为对照的pVAX-S、pVAX1、PBS免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,分别测定免疫后第0、14、28、42天的小鼠血清IgG抗体,测定免疫后第42天小鼠外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的数量。结果,融合质粒pVAX-S-N可在COS7细胞特异性表达S、N两个蛋白,pVAX-S-N免疫小鼠后第14天即可诱导产生抗TGEV的特异性IgG,但pVAX-S-N诱导的抗体水平一直低于pVAX-S诱导的抗体水平,在免疫后第42天差异极显著(P<0.01);pVAX-S-N可激发小鼠产生细胞免疫应答,但pVAX-S-N组的CD3+、CD4+、CD8+数量均低于pVAX-S免疫组。研究结果表明,融合双基因疫苗pVAX-S-N具有免疫原性,但免疫效果却不如单基因疫苗pVAX-S的理想。
- 黄小波杨恒曹三杰文心田李春松廖晓丹张鑫淼
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒DNA疫苗免疫原性
- 减毒沙门氏菌介导猪传染性胃肠炎病毒S基因与pIL-6基因双顺反子DNA疫苗的构建与免疫原性研究
- 本研究目的是了解减毒沙门氏菌介导TGEV S基因与猪白细胞介素6基因双顺反子DNA疫苗的免疫原性特点，为研制安全有效的TGEV的DNA疫苗研究提供依据。本次研究证明，重组菌SL7207(pVAXD-S-IL6)与SL72...
- 李春松文心田黄小波曹三杰
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒减毒沙门氏菌DNA疫苗
- 减毒沙门菌递呈的猪传染性胃肠炎病毒S基因与猪IL-6基因双启动子DNA疫苗的构建被引量：2
- 2012年
- 从猪传染性胃肠炎病毒克隆质粒pMD19T-S中扩增了2.1kb的S基因片段(含完整的A、B、C、D 4个抗原位点序列),以RT-PCR从猪外周血淋巴细胞中扩增了猪白细胞介素6(IL-6)(658bp),插入同一双启动子真核表达载体pVAXD的2个多克隆位点,构建了共表达S与IL-6基因的双启动子表达质粒pVAXD-S-IL-6,转染COS7细胞进行转录和表达鉴定。将质粒pVAXD-S-IL-6电转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6),并对重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6)的体外稳定性和口服小鼠的安全性进行了鉴定。结果表明该双启动子真核表达质粒pVAXD-S-IL-6构建成功,RT-PCR检测到转染的COS-7细胞中2个目的基因的转录,间接免疫荧光试验结果显示表达产物可与猪抗猪传染性胃肠炎病毒血清发生特异性反应。重组菌株SL7207(pVAXD-S-IL-6)在含卡那霉素的抗性培养基中稳定性好,以1×109 CFU灌胃接种小鼠具有良好的安全性。本研究构建了猪传染性胃肠炎病毒的新型口服疫苗株SL7207(pVAXD-S-IL-6),为开展其免疫原性评价奠定了基础。
- 黄小波李春松曹三杰文心田张鑫淼杨恒张亮
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒IL-6基因减毒鼠伤寒沙门菌
- 携带猪传染性胃肠炎病毒S/N融合双基因的减毒沙门氏菌的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 旨在构建携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合双基因的减毒沙门氏菌,并鉴定该疫苗菌株的生物学特性,为开展TGEV口服免疫研究奠定材料基础。采用PCR方法从克隆质粒19T-S和19T-N中分别扩增了TGEV的S基因(含主要抗原位点,2.1kb)和N基因(1.2kb),将S基因和N基因插入pVAX1载体,构建携带S/N融合双基因的真核表达质粒pVAX-S/N。将pVAX-S/N电转化减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得重组菌株SL7207(pVAX-S/N),并对重组菌株SL7207(pVAX-S/N)的体外稳定性、目的基因在体内的转录、口服接种小鼠的安全性及在体内稳定性等特性进行了鉴定。结果表明,真核质粒pVAX-S/N构建成功,该质粒转染COS7中能表达2个目的蛋白,重组菌SL7207(pVAX-S/N)在Kan+抗性下体外培养稳定性好,口服接种小鼠3d可从回肠组织检测到目的基因的转录,以0.5×109、1×109和2×109 CFU口服对小鼠均具有安全性,重组菌在接种小鼠的肝、脾于4周左右逐渐被机体清除。结果表明成功构建TGEVS/N双基因疫苗SL7207(pVAX-S/N),该疫苗具有良好的稳定性与安全性等特点,为开展TGEV口服免疫研究奠定了基础。
- 黄小波李春松杨恒曹三杰文心田廖晓丹张鑫淼
- 关键词：减毒沙门氏菌猪传染性胃肠炎病毒生物学特性
- 减毒沙门氏菌递呈的TGEVS／N融合基因疫苗的口服免疫原性被引量：2
- 2013年
- 目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1×109 CFU/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定42d免疫小鼠的干扰素水平。结果菌株SL7207(pVAX-S/N)构建成功,首免后2～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌SL7207)的血清IgG,第4～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的肠道粘膜IgA,SL7207(pVAX-S/N)诱导的IgG和IgA抗体最高滴度均略高于SL7207(pVAX-S),但差异不明显(P>0.05)。SL7207(pVAX-S/N)免疫42d小鼠诱导的干扰素浓度为659.45pg/mL,低于SL7207(pVAXD-S)组。结论 S/N融合基因疫苗SL7207(pVAX-S/N)具有良好的口服免疫原性,但与SL7207(pVAX-S)无明显差异。
- 黄小波张鑫淼曹三杰文心田李春松梁恩涛崔婷婷
- 关键词：减毒沙门氏菌猪传染性胃肠炎病毒
- 减毒沙门氏菌介导猪传染性胃肠炎病毒S基因与pIL-6基因双顺反子DNA疫苗的构建与免疫原性研究
- 引言/目的猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)能引起猪高度接触性传染性肠道疾病。TGEV基因组为单股正链RNA,位于3,端的7个开放阅读框编码表达4个结构...
- 李春松文心田黄小波曹三杰
