张浩然
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：福建医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 多发性骨髓瘤及其骨病的基础和临床研究
- 陈君敏曾志勇林珺芳郑晓强郑玲阙文忠张浩然
- 《多发性骨髓瘤及其骨病的基础和临床研究》项目主要来源于国家自然科学基金委2009年01月-2011年12月资助的面上项目（项目编号为30871111，资助经费为32.0万元）。该项目的主要研究成果如下：在多发性骨髓瘤发生...
- 关键词：
- 关键词：多发性骨髓瘤
- 体外RNA干扰下调DEPTOR表达对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响被引量：4
- 2013年
- 目的:研究探讨应用RNA干扰技术构建人DEPTOR基因的shRNA慢病毒载体,鉴定在多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞上的沉默效果,并评价DEPTOR对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡能力的影响。方法:设计4个DEPTOR siRNA序列,化学合成后退火形成双链,克隆到酶切的hU6-MCS-CMV-EGFP(GV115)-shRNA慢病毒载体。重组质粒经PCR测序鉴定后,脂质体介导下转染293T细胞,Western blot检测DEPTOR的表达,筛选出干扰效果最佳的GV115-shRNA。将筛选的GV115-shRNA与慢病毒包装质粒共转染293T细胞生成病毒,收集病毒上清并浓缩,测定浓度。将病毒颗粒感染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞,应用Real-time PCR方法从mRNA水平及Western blot方法从蛋白水平检测DEPTOR的沉默效果。运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测骨髓瘤细胞增殖能力的变化;流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot分析cleaved caspase-3和cleaved PARP的变化。结果:构建的慢病毒载体shRNA的PCR鉴定和测序正确,成功筛选出最有效抑制DEPTOR表达的shRNA2序列,包装病毒后滴度达到1×109TU/ml。慢病毒感染RPMI-8226细胞后可表达EGFP,Real-time PCR和Western blot检测DEPTOR的表达明显下降。下调DEPTOR基因可显著减慢骨髓瘤细胞的生长速度(P<0.05),肿瘤细胞的凋亡率上升(P<0.01)。DEPTOR shRNA上调cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达,下调Bcl-2及PI3K/Akt信号通路的表达(P<0.01)。结论:成功构建了DEPTOR shRNA重组慢病毒载体,其转染多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞后显著抑制了DEPTOR的表达。DEPTOR shRNA可以有效地诱导骨髓瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的增殖。PI3K/Akt信号通路可能参与了其凋亡过程。
- 张浩然曾志勇陈君敏
