张军霞
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：青岛农业大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学农业科学更多>>
- 一种黄色篮状菌孢子粉的制备方法、黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法
- 本发明涉及一种黄色篮状菌可湿性粉剂，它包括黄色篮状菌(Talaromyces flavus)分生孢子粉、载体和助剂，所述黄色篮状菌可湿性粉剂中的活菌含量为5×l0<Sup>8</Sup>cfu/g～5×l0<Sup>9<...
- 咸洪泉张军霞李雅华
- 文献传递
- 棘孢木霉几丁质酶tachi2基因的原核表达及酶学性质研究被引量：2
- 2013年
- 目的:实现棘孢木霉(Trichoderma asperellum)几丁质酶基因tachi2的原核高效表达,研究几丁质酶Tachi2的酶学性质。方法:利用PCR技术扩增得到几丁质酶基因tachi2,将其克隆到原核表达载体pEHISTEV中,测序后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后进行Tachi2蛋白的纯化和复性。用纯化的目的蛋白Tachi2进行几丁质酶酶学性质的研究。结果:tachi2基因在重组大肠杆菌中正确表达,其主要以包涵体形式存在;重组蛋白Tachi2分子量约为44kDa,经过纯化和复性后得到的Tachi2有较高的几丁质酶活性。该酶的最适温度为40℃,最适pH值为7.0,几丁质酶在40℃以下比较稳定、pH 6～9时酶有较高活性,受Cu2+和Zn2+的强烈抑制。结论:成功实现了棘孢木霉几丁质酶基因tachi2的原核高效表达,表达纯化了重组蛋白,明确了几丁质酶Tachi2的酶学性质,为该几丁质酶的进一步开发利用和深入研究奠定了基础。
- 张军霞丛大鹏李雅华咸洪泉
- 关键词：几丁质酶原核表达酶学性质
- 一种黄色篮状菌孢子粉的制备方法、黄色篮状菌可湿性粉剂及其制备方法
- 本发明涉及一种黄色篮状菌可湿性粉剂，它包括黄色篮状菌(Talaromyces flavus)分生孢子粉、载体和助剂，所述黄色篮状菌可湿性粉剂中的活菌含量为5×l0<Sup>8</Sup>cfu/g～5×l0<Sup>9<...
- 咸洪泉张军霞李雅华
- 文献传递
- 砂梨CONSTANS基因的克隆及原核表达分析被引量：1
- 2014年
- 为了探索梨树植物的开花调控机制,本研究以砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)叶片为材料,采用同源序列克隆法,进行了开花调控相关基因CONSTANS的克隆,命名为PyCO,GenBank登录号为KF246572。序列分析表明,该基因包含一个1023 bp的开放阅读框,编码340个氨基酸,推测蛋白质分子量为37.81 kD,等电点为5.95。PyCO蛋白具有典型的植物CO家族的结构特征,含有2个高度保守的B-box及CCT结构域。进化树分析表明,该氨基酸序列与苹果的同源性接近93%,与碧桃、可可树、草莓等其他高等植物的CO类蛋白同源性也在70%以上。原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白,分子量约为58.5 kD,为进一步探索梨树开花调控机理奠定了基础。
- 张军霞李鼎立王然刘成连原永兵马春晖
- 关键词：克隆原核表达
- 重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶Tachi1的酶学性质研究及表达条件优化被引量：11
- 2012年
- 【目的】对转棘孢木霉几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母工程菌GS-tachi1-K进行诱导表达,研究重组几丁质酶Tachi1的酶学性质,优化表达条件。【方法】对GS-tachi1-K进行甲醇诱导培养,纯化目的蛋白Tachi1进行几丁质酶酶学性质的研究;通过单因素和正交试验对GS-tachi1-K菌株产几丁质酶Tachi1表达条件进行优化。【结果】GS-tachi1-K表达的几丁质酶Tachi1表观分子量约为44 kDa,酶反应最适的温度和pH分别为50℃和5.5,具有较宽的温度、pH适用范围;50℃以下保持较高的酶活力,在碱性条件下稳定性较差;受Ag+、Hg2+、Cu2+、Fe2+和高浓度的SDS及β-巯基乙醇强烈抑制。该菌株的最佳表达条件为:pH为6.5,甲醇诱导浓度为0.5%,起始细胞浓度为OD600=2,甲醇诱导时间为180 h;几丁质酶Tachi1活力可达17.93 U/mL,蛋白表达量为6.19 g/L。【结论】成功实现了棘孢木霉新几丁质酶基因tachi1的毕赤酵母高效分泌表达,工程菌GS-tachi1-K具有高表达量和表达产物酶活性高两个特点,明确了几丁质酶Tachi1的酶学性质和最佳诱导表达条件,为该几丁质酶及其基因的深入研究和开发利用奠定了基础。
- 汤伟李雅华刘露张军霞咸洪泉
- 关键词：毕赤酵母几丁质酶酶学性质
