万志华
- 作品数：3 被引量：7H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 靶向人PDE5A3基因的shRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察腺病毒载体介导特异性短发夹RNA(shRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为应用RNA干扰(RNAi)技术治疗阴茎勃起功能障碍(ED)提供实验依据。方法:成功构建携带3条针对人PDE5A3基因位点特异性shRNA的重组腺病毒(rAd5-shRNA-PDE5A3),并设立阴性对照病毒组和空白对照组,分别转染人阴茎海绵体平滑肌细胞。以放射免疫法分别检测转染重组腺病毒24、48、72h后细胞内cGMP浓度变化,观察rAd5-shRNA-PDE5A3对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:实验组rAd5-shRNA-PDE5A3转染人阴茎海绵体平滑肌细胞后胞内cGMP水平显著高于阴性对照组和空白对照组,在转染后72h最为显著。结论:3条特异性针对人PDE5A3mRNA靶位点的shRNA可有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,增强对PDE5基因的阻抑效果。
- 潘运高刘继红詹鹰王涛万志华李忠远刘云
- 关键词：阴茎海绵体重组腺病毒环磷酸鸟苷
- 腺病毒载体介导PDE5-shRNAs对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙的影响
- 2009年
- 目的:观察腺病毒载体介导的PDE5-shRNAs对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙的影响,探讨利用RNAi技术治疗勃起功能障碍(ED)的可行性。方法:利用构建的携带2条靶向PDE5 mRNA靶位点的shRNAs重组腺病毒转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,同时设立阴性对照组和空白对照组,于转染后24、48、72 h用钙离子荧光探针Fluo-3/AM进行染色,然后在激光扫描共聚焦显微镜下动态检测细胞内钙离子荧光强度,以平均荧光指数(FI)反映细胞内游离钙的相对水平。结果:实验组在转染PDE5-shRNAs重组腺病毒24、48、72 h后钙离子荧光指数分别为829.3±7.8、801.5±9.5、856.3±8.7,均明显低于阴性对照组的1106.3±10.8、1121.3±10.2、1058.5±12.1和空白对照组的1076.6±9.7、1133.4±11.2、1104.3±10.5,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:腺病毒介导的靶向PDE5基因的shRNAs能够明显降低大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞内游离钙水平。
- 潘运高刘继红詹鹰王涛万志华李忠远刘云
- 关键词：细胞内钙短发夹RNA
- PDE_5基因特异性siRNA改善糖尿病性勃起功能障碍大鼠勃起功能的研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨大鼠PDE_5基因siRNA对糖尿病性勃起功能障碍(DMED)大鼠PDE_5基因表达的抑制作用及其对DMED大鼠勃起功能的影响。方法构建可同时表达2条针对大鼠PDE_5基因的shRNA重组腺病毒; 50只雄性SD大鼠随机取10只作为正常对照。其余建立DM ED大鼠模型,随机分为实验组、阴性对照组和空白对照组,分别将重组腺病毒rAd-rPDE_5-shRNA、腺病毒rAd-mock及生理盐水注射于阴茎海绵体。注射后第7天,电刺激盆神经测定各组大鼠阴茎海绵体内压(ICP)及平均周围动脉压(MAP),然后取海绵体组织通过RT-PCR和Westem blot分别检测PDE_5基因mRNA及蛋白的表达。结果ICP/MAP实验组和正常对照组显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.05),实验组和正常对照组间无显著性差异(P>0.05);RT-PCR和Western blot分析,实验组大鼠PDE_5基因mRNA和蛋白表达均显著低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论PDE_5基因shRNA重组腺病毒转染可以改善DMED大鼠的勃起功能,为DMED治疗方法的探索提供了新的思路。
- 万志华刘继红詹鹰王少刚王涛刘云潘运高李忠远
- 关键词：糖尿病勃起功能障碍小分子干扰
