刘云
- 作品数：16 被引量：20H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>
- Kir5.1在C57BL/6J小鼠耳蜗的年龄相关性表达及其与AHL的关系
- 目的 研究kir5.1钾离子转运蛋白在C57BL/6J小鼠内耳组织中的表达以及其随鼠龄增加表达含量的变化,探讨其在年龄相关性听力损失(Age-related Hearing Loss,AHL)发生中的作用.方法 采用免疫...
- 潘春晨褚汉启刘云陈金周良强陈请国孙彦博
- C57BL／6J小鼠耳蜗质膜钙ATP酶异构体2的年龄相关性表达被引量：1
- 2015年
- 目的研究质膜钙ATP酶异构体2（plasmamembraneCa2＋-ATPaseisoform2，PMCA2）在C57BL／6J小鼠耳蜗组织中的分布及年龄相关性表达，探讨其与年龄相关性听力损失的关系。方法运用免疫荧光组织化学的方法检测PMCA2蛋白在不同鼠龄（4、14、22、45周）C57BL／6J小鼠耳蜗中的分布和表达变化；采用实时定量多聚酶链反应（Real-timePCR）检测PMCA2mRNA在不同鼠龄（4、14、22、45周）小鼠耳蜗中的表达。采用SPSS17．0软件进行统计学分析。结果免疫荧光的结果显示不同鼠龄C57BL／6J小鼠的耳蜗内外毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞均可见PMCA2蛋白表达，螺旋韧带亦可见有少量PMCA2蛋白表达。随着鼠龄的增长，耳蜗毛细胞出现缺失，螺旋神经节细胞数目逐渐减少，PMCA2蛋白的表达也随着鼠龄的增加而逐渐减少。Real—timePCR结果揭示：随着鼠龄的增长，PMCA2mRNA表达水平逐渐下降，14周龄的表达水平与4周龄相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；22周龄表达水平与14周龄相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；45周龄表达水平与14周龄相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PMCA2蛋白主要分布于C57BL／6J小鼠耳蜗内外毛细胞、血管纹和螺旋神经节细胞，随着鼠龄的增长，PMCA2蛋白和mRNA的表达量逐渐减少。PMCA2的表达下降或功能缺失可能与C57BL／6J小鼠内耳形态的年龄相关性改变以及听力损失有一定关系。
- 高燕陶雁玲褚汉启陈金陈请国周良强刘云余洋崔永华
- 关键词：耳蜗老年性聋小鼠近交C57BL
- L型钙离子通道蛋白α1D亚基与老年性耳聋关系的研究被引量：2
- 2014年
- 目的研究L型钙离子通道蛋白α1D亚基（Cav1．3）在老年性耳聋小鼠耳蜗组织中的表达和意义。方法应用听性脑干反应（ABR）分别检测4、14、24、48周龄的C57BL／6小鼠的听力，苏木素-伊红（HE）染色观察内耳形态的变化。免疫荧光方法观察Cav 1．3在内耳组织中的分布，同时采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测其基因CACNA1D在内耳组织的mRNA表达。结果Cav 1．3主要分布在小鼠耳蜗内外毛细胞、螺旋神经节、螺旋韧带、血管纹、螺旋（板）缘细胞。与4周龄小鼠比较，[短声（27．08±9．19）dBSPL、4KHz（23．79±13．31）dBSPL、8KHz（18．83±12．18）dBSPL3，14、24、48周龄ABR反应阈值提高（F=95．86，P〈0．05）；48周龄小鼠ABR反应阈值[短声（87．81±8．36）dBSPL、4KHz（85．63±9．88）dBSPL、8KHz（79．50±9．83）dBSPL3，较4、14、24周龄大鼠均提高（F=115．97，P％0．01）。随着鼠龄的增长，内耳毛细胞和螺旋神经节细胞逐渐出现缺失；血管纹和螺旋韧带也呈现萎缩；Cav 1．3表达含量逐渐减少，4周218．94±11．29，14周184．67±11．92，24周148．18±8．35与48周98．04±4．52比较，差异有统计学意义（F=119．17，P〈0．01）。结论老年性耳聋小鼠Cav 1．3钙离子通道蛋白表达含量随年龄增长而减少，其功能的异常和缺失可能在老年性耳聋的发病中起一定作用。
- 陈金褚汉启周良强余洋陈请国冰丹刘云王少立张平黄孝文崔永华
- 关键词：听觉丧失钙通道毛细胞听觉
- PDCD5和caspase 3在不同年龄段C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达被引量：3
- 2011年
- 目的检测程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5，PDCD5）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase 3）在不同年龄段C57BL／6J小鼠耳蜗中的表达，初步探讨其在年龄相关性听力下降发生、发展中的作用。方法选择3、6、9及12月龄段C57BL／6J小鼠各15只，即按月龄分为四组。检测各组小鼠双侧短声（click）及短纯音（6、8kHz）听性脑干反应（ABR）阈值。采用免疫组化和蛋白质印迹杂交（Western blotting）检测各月龄段小鼠耳蜗PDCD5和Caspase3蛋白的表达，实时荧光定量PCR（real—time PCR）检测各月龄段小鼠耳蜗PDCD5和caspase3基因mRNA的表达。结果随着年龄的增长，C57BL／6J小鼠各频率ABR阈值逐渐提高，耳蜗PDCD5和Caspase3蛋白的表达亦逐渐增强。3月龄和6月龄小鼠耳蜗毛细胞和血管纹细胞仅出现少量PDCD5和Caspase3蛋白表达，9月龄时表达有明显增加，至12月龄时表达最强，各月龄组间比较，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。Real—time PCR检测显示PDCD5和caspase3基因mRNA随着年龄的增长表达逐渐增强，与其蛋白变化趋势相一致。结论C57BL／6J小鼠耳蜗PDCD5和caspase3随着年龄的增长表达增强，与耳蜗的老化密切相关，可能是老年性聋发病机制中的一个重要因素。
- 王燕褚汉启周良强陈金李志勇刘云张平黄孝文崔永华
- 关键词：肿瘤蛋白质类凋亡调节蛋白质类半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3耳蜗
- 质膜钙ATP酶异构体1～3在新生大鼠耳蜗基底膜的表达
- 2016年
- 目的通过Western blot方法检测质膜钙ATP酶异构体1～3（plasma membrane Ca2＋-ATPase isoforms 1～3,PMCA1～3）在新生大鼠耳蜗基底膜（basilar membrane,BM）的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天（P2）和8天（P8）健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA1～3表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白（BSA）作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达（分别为0.126±0.024、0.131±0.012）,PMCA2表达水平较高（分别为4.16±0.528、4.25±0.319）,PMCA3几乎没有表达（均为0）,三者间差异有统计学意义（P〈0.05）。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平（4.571±0.336）高于P2大鼠（3.622±0.285）,差异有统计学意义（P〈0.05）。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA1～3在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2＋调节需求。
- 陈请国褚汉启周良强陈金刘云罗蜜陶雁玲
- 关键词：基底膜耳蜗
- 激光共聚焦显微镜和免疫组化染色对比观察KCNQ1在小鼠耳蜗血管纹的表达
- 2014年
- 目的:采用激光共聚焦显微镜(LSCM)技术和免疫组化染色检测KCNQ1在小鼠耳蜗血管纹中的表达分布特征。方法:以KCNQ1-/-突变纯合子基因型小鼠和CBA/CaJ小鼠为实验对象,采用免疫组化染色、LSCM结合免疫学标记方法对比观察血管纹KCNQ1蛋白表达情况。结果:免疫组化染色显示CBA/CaJ小鼠血管纹边缘细胞顶膜KCNQ1蛋白高表达,呈棕褐色;LSCM观察显示免疫单标KCNQ1绿色荧光蛋白分布于CBA/CaJ小鼠血管纹边缘细胞细胞核,KCNQ1-/-小鼠边缘细胞均未见阳性反应。结论:LSCM技术能准确显示KCNQ1在小鼠耳蜗血管纹中表达及细胞定位。
- 吴振恭褚汉启熊俊陈金川刘云陈金周良强熊浩
- 关键词：KCNQ1基因敲除小鼠边缘细胞激光共聚焦显微镜
- 质膜钙ATP酶异构体1～4的剪接体在新生大鼠前庭器官的表达被引量：2
- 2016年
- 目的研究质膜钙ATP酶异构体(plasma membrane Ca^(2+)-ATPase isoforms,PMCAs)1~4(PMCA1~4)的A端和C端剪接变异体在新生大鼠前庭器官的表达。方法取出生2天的健康SD大鼠10只,断头后分离出前庭器官(椭圆囊斑和球囊斑),提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测PMCA1~4的A端和C端剪接变异体的表达。结果在新生大鼠的椭圆囊斑和球囊斑PMCA1~4表达的剪接体分别为PMCA1x/b,PMCA2w/(a、b),PMCA3z/(a、b、c)和PMCA4(x、z)/b。结论在新生大鼠前庭器官,PMCA1、PMCA2、PMCA3和PMCA4之间表达的A端和C端剪接变异体类型均不同,这可能是由于椭圆囊斑和球囊斑对这些PMCA亚型有着不同的Ca2+调节需求。
- 罗蜜褚汉启陶雁玲周良强陈金刘云潘春晨陈请国
- 关键词：剪接体
- 靶向人PDE5A3基因的shRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响被引量：1
- 2009年
- 目的:观察腺病毒载体介导特异性短发夹RNA(shRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为应用RNA干扰(RNAi)技术治疗阴茎勃起功能障碍(ED)提供实验依据。方法:成功构建携带3条针对人PDE5A3基因位点特异性shRNA的重组腺病毒(rAd5-shRNA-PDE5A3),并设立阴性对照病毒组和空白对照组,分别转染人阴茎海绵体平滑肌细胞。以放射免疫法分别检测转染重组腺病毒24、48、72h后细胞内cGMP浓度变化,观察rAd5-shRNA-PDE5A3对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:实验组rAd5-shRNA-PDE5A3转染人阴茎海绵体平滑肌细胞后胞内cGMP水平显著高于阴性对照组和空白对照组,在转染后72h最为显著。结论:3条特异性针对人PDE5A3mRNA靶位点的shRNA可有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,增强对PDE5基因的阻抑效果。
- 潘运高刘继红詹鹰王涛万志华李忠远刘云
- 关键词：阴茎海绵体重组腺病毒环磷酸鸟苷
- 腺病毒载体介导PDE5-shRNAs对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙的影响
- 2009年
- 目的:观察腺病毒载体介导的PDE5-shRNAs对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞游离钙的影响,探讨利用RNAi技术治疗勃起功能障碍(ED)的可行性。方法:利用构建的携带2条靶向PDE5 mRNA靶位点的shRNAs重组腺病毒转染大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞,同时设立阴性对照组和空白对照组,于转染后24、48、72 h用钙离子荧光探针Fluo-3/AM进行染色,然后在激光扫描共聚焦显微镜下动态检测细胞内钙离子荧光强度,以平均荧光指数(FI)反映细胞内游离钙的相对水平。结果:实验组在转染PDE5-shRNAs重组腺病毒24、48、72 h后钙离子荧光指数分别为829.3±7.8、801.5±9.5、856.3±8.7,均明显低于阴性对照组的1106.3±10.8、1121.3±10.2、1058.5±12.1和空白对照组的1076.6±9.7、1133.4±11.2、1104.3±10.5,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:腺病毒介导的靶向PDE5基因的shRNAs能够明显降低大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞内游离钙水平。
- 潘运高刘继红詹鹰王涛万志华李忠远刘云
- 关键词：细胞内钙短发夹RNA
- Ⅱ型胶原酶体外分离并培养成年小鼠血管纹边缘细胞
- 2011年
- 目的探讨单纯Ⅱ型胶原酶消化法体外分离并培养成年小鼠耳蜗血管纹边缘细胞(marginal cell,MC)的方法。方法选取6只出生75±3 d的健康C57BL/6J小鼠,显微分离其耳蜗血管纹组织,以Ⅱ型胶原酶原代消化培养边缘细胞。倒置显微镜观察细胞形态,噻唑蓝(MTT)法测细胞生长曲线,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫荧光法检测上皮细胞标志物——中间丝角蛋白18(CK18)和耳蜗血管纹的独特标志物KCNQ1的表达,RT-PCR法检测CK18和KCNQ1mRNA的表达。结果接种24～48 h后可见细胞贴壁增殖,形成大小不等的细胞岛,一周后细胞迅速生长,相互融合,紧密连接,形成单层极性上皮层,呈典型的"铺路石"样外观。透射电镜观察可见多角形细胞表面有较多微绒毛,胞浆内线粒体、内质网等细胞器丰富。免疫荧光检测显示CK18和KCNQ1蛋白表达阳性,RT-PCR结果示CK18和KCNQ1mRNA均有表达。结论采用原代消化培养技术可成功建立成年小鼠耳蜗血管纹MC的体外原代培养,为进一步研究成年期MC的功能和某些内耳疾病的发病机制提供了实验基础。
- 王燕褚汉启周良强陈金李志勇刘云张平王春芳黄孝文崔永华
- 关键词：成年小鼠边缘细胞酶消化法细胞培养
