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王萌
作品数:
4
被引量:13
H指数:2
供职机构:
天津医科大学基础医学院天津市生命科学中心实验室
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发文基金:
天津市自然科学基金
国家自然科学基金
国家高技术研究发展计划
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
汤华
天津医科大学基础医学院天津市生...
刘民
天津医科大学基础医学院天津市生...
吴海东
天津医科大学基础医学院天津市生...
李欣
天津医科大学基础医学院天津市生...
苏畅
天津医科大学基础医学院天津市生...
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原核表达
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天津医科大学
作者
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王萌
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刘民
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汤华
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李欣
2篇
孔鹏洲
2篇
苏畅
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吴海东
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李超
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佟小莺
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李倩
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郑安洁
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侯志丽
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汤石明
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纪伟华
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赵蓉
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李海芳
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浦永
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张强
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赵一璠
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王菲菲
传媒
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国际免疫学杂...
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中国寄生虫病...
1篇
细胞与分子免...
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2010
1篇
2005
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翻译控制肿瘤蛋白TPT1的原核表达、纯化、抗体制备和初步应用
被引量:7
2010年
目的:原核表达并纯化翻译控制蛋白TPT1,免疫日本大耳白兔制备其抗体。方法:构建原核表达质粒pRSE-TA2-TPT1,转化大肠杆菌BL21(DE3),TPT1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni-NTA树脂亲和纯化后免疫兔子制备抗体血清。以间接ELISA法检测抗体效价,Western blot和免疫荧光染色鉴定抗体特异性。结果:在大肠埃希菌中诱导出高水平表达的TPT1融合蛋白,经亲和树脂纯化后免疫大白兔,获得了高特异性的抗TPT1抗血清。结论:成功构建原核表达质粒pRSETA2-TPT1,表达并纯化TPT1蛋白,制备出高滴度、高特异性的多克隆抗体.为进一步研究TPT1在肿瘤等疾病发生、发展过程及治疗中的作用奠定基础。
赵一璠
李海芳
汤石明
王萌
吴海东
刘民
李欣
汤华
关键词:
原核表达
纯化
抗体
肿瘤
实验小鼠体内寄生虫感染情况调查
被引量:6
2005年
李超
郑安洁
张强
李倩
王萌
侯志丽
赵蓉
纪伟华
佟小莺
关键词:
体内寄生虫
实验小鼠
人兽共患疾病
实验动物中心
动物感染
清洁级
PIWIL4的克隆及其抗体制备和初步应用
2010年
目的制备兔抗人PIWIL4的多克隆抗体,鉴定其特异性,并应用该抗体检测内源性PIWIL4在人各细胞系中的表达差异及细胞定位。方法构建原核表达质粒pGEX-5X-1.PIWIL4,转化大肠杆菌BL21,PIWIL4蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过切胶纯化后免疫家兔制备抗体血清。以间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,Westernblot鉴定抗体特异性及检测PIWIL4在各细胞系中的表达差异,免疫荧光染色观察PIWIL4的细胞定位。结果成功构建原核表达质粒,表达并纯化PIWIL4蛋白。免疫大白兔后得到PIWIL4多克隆抗体,ELISA检测抗体效价为1:20000,Westernblot和免疫组化确定抗体具有高度特异性,并成功地应用该抗体检测到PIWIL4在人多种细胞系中的表达差异及细胞定位。结论PIWIL4蛋白及其多克隆抗体的成功制备,为进一步研究PIWIL4的生物学功能奠定了基础。
苏畅
浦永
孔鹏洲
王萌
刘民
汤华
关键词:
原核表达
抗体
肿瘤
纤维连接蛋白1的原核表达、纯化及抗体的制备
2010年
目的构建人纤维连接蛋白1(FN1)基因的原核表达载体,诱导其表达并纯化该蛋白,制备特异性抗体。方法利用RT—PCR方法扩增人FN1编码序列450bp的片段,包含FN1羧基端的150个氨基酸。构建原核表达质粒pRSETA2-FN1,转化大肠杆菌BL21(DE3),FN1蛋白经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。融合蛋白通过Ni^2+-NTA树脂亲和纯化后免疫兔制备抗体血清。蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫组化检测其特异性。结果成功构建重组质粒pRSETA2-FN1,限制性内切酶酶切鉴定及DNA测序均显示插入片段正确。SDS—PAGE凝胶显示表达的融合蛋白相对分子质量约为20000(FN1-His标签),与预期结果一致。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价约为1:10000,Western blot显示可以特异性地检测出人血浆和肝癌细胞系HepG2全细胞裂解液中相对分子质量约250000的纤维连接蛋白。免疫组织化学可显示FN1在正常肺及肺癌组织中的特异性分布。结论成功地原核表达了FN1C-末端蛋白,并免疫获得了抗FN1特异性抗体。
王菲菲
苏畅
吴海东
王萌
孔鹏洲
刘民
李欣
汤华
关键词:
纤维连接蛋白
基因表达
抗体
癌症
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