王正茂
- 作品数：9 被引量：12H指数：2
- 供职机构：南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 真核细胞表达单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白B及其抗原性与免疫原性分析
- 2010年
- 为在真核细胞中表达并纯化I型单纯疱疹病毒(HSV I)包膜糖蛋白gB,并分析其抗原性和免疫原性,化学合成了包膜糖蛋白gB1胞外区基因片段,构建真核表达载体,并转染至HEK293细胞,表达的蛋白用羊抗HSV1+HSV2血清作为一抗,用ELISA检测其抗原性;用纯化的gB1蛋白免疫昆明小鼠,观察诱发抗体产生的时间及其效价,并用ELISA和Western blot检测小鼠抗gB1多克隆抗体特异性识别重组gB1抗原的能力,评价其免疫原性。结果显示在HEK293细胞中成功表达重组gB1蛋白,ELISA证实羊抗HSV1+HSV2多抗能够识别重组gB1蛋白;重组gB1蛋白免疫小鼠7周后,小鼠血清中多克隆抗体效价达到5×103,表明在真核细胞中高效表达并纯化的重组gB1蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV检测试剂和疫苗研究提供了理论基础。
- 王正茂李琳管文燕李越希
- 关键词：单纯疱疹病毒真核表达抗原性免疫原性
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型包膜糖蛋白D的表达及免疫学活性研究
- 目的表达单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)包膜糖蛋白D(gD)胞外区,研究其免疫学活性,探讨其保护活性和疫苗候选分子的可能性。方法化学合成含强抗原决定簇的HSV-ⅠgD胞外区的基因序列,并在N端添加人IgG轻链可变区的信号肽...
- 管文燕王正茂李琳李越希
- HSV1糖蛋白B胞外区编码基因的真核表达及纯化鉴定
- 应用基因工程技术构建、纯化单纯疱疹病毒1型截短(胞外区)糖蛋白B的亚单位疫苗。方法：通过对HSV1—gB蛋白的抗原表位分析,化学合成HSV1—gB胞外区含信号肽序列的基因序列。定向插入真核表达质粒pCEP4载体中,构建出...
- 管文燕王正茂李琳李越希
- 关键词：单纯疱疹病毒1型真核表达纯化鉴定疫苗免疫
- HSV1gD及HSV2gD两种糖蛋白真核表达载体的构建及表达
- 单纯疱疹病毒(HSV)感染人体发病率高,复发率也高,对人体危害严重,可导致不孕、新生儿死亡.本文已用原核系统表达了HsvgD1及HSVgD2两种蛋白，为了使得到具有更好的生物学活性的HSV1gD及HSV2gD重组蛋白，将...
- 李越希吕敏潘明洁戚菁王正茂潘英
- 关键词：疱疹病毒糖蛋白真核表达基因序列
- HSV1gD胞外区抗原性分析及表达鉴定
- 单纯疱疹病毒(HSV)是危害人类健康的常见病原体,本文通过计算机分析单纯疙疹病毒1型糖蛋白D(HSV1gD)胞外区的抗原性，筛选出抗原性强的亲水性蛋白片段，选用真核和原核均偏爱的密码子，化学合成基因片段。利用DNA重组技...
- 潘英李越希吕敏潘明洁戚菁王正茂
- 关键词：单纯疱疹病毒抗原性分析基因表达结合蛋白
- 丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶在大肠杆菌中可溶性表达条件的优化被引量：5
- 2010年
- 为了提高丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶蛋白(HCV-RdRp)在大肠杆菌中的可溶性表达,对影响蛋白可溶性表达水平的多种因素进行了优化。探讨了诱导时机、诱导温度及时间、诱导剂IPTG浓度等对重组蛋白可溶性表达的影响,筛选出了提高可溶表达该蛋白的最适条件。结果表明,在菌体密度OD600约为1.6时,加入终浓度为0.20 mmol/L的诱导剂IPTG,25℃下诱导表达16 h,可以获得最多的可溶性表达蛋白,获得了纯化较好并有特异性的HCV-RdRp重组蛋白,为建立其体外活性测定方法及抑制剂的筛选奠定了基础。
- 李琳潘英王正茂傅雅丽李越希
- 关键词：丙型肝炎病毒可溶性表达
- 单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白D胞外区的真核表达及生物学活性分析被引量：7
- 2010年
- 单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)包膜糖蛋白D(glycoprotein D,gD)是HSV的结构蛋白之一,具有重要抗原表位,是目前疫苗研究的热点。为了分离纯化HSV gD1糖蛋白胞外区片段并对其生物学活性进行分析,本研究将化学合成的gD1胞外区基因片段克隆至真核表达载体pCEP4,重组质粒转染HEK293细胞进行瞬时表达,产物经Western blotting检测后用亲和层析法进行分离纯化,ELISA检测其抗原性。以纯化的重组蛋白作为抗原免疫小鼠,ELISA测血清特异性抗体效价以评价其免疫原性。构建的重组质粒经测序显示基因序列完全正确。表达产物的Western blotting分析发现,在相对分子量约46kDa处有外源蛋白表达,与预期蛋白带一致。用Ni柱得到了纯化的重组gD1蛋白,ELISA检测显示其具有良好的抗原性,免疫小鼠7周后血清中抗体效价达到5×103。重组gD1蛋白的抗原性及免疫原性分析为HSV检测试剂和基因重组亚单位疫苗的研制提供了实验依据。
- 王正茂李琳管文燕李越希
- 关键词：单纯疱疹病毒真核表达抗原性
- 单纯疱疹病毒Ⅱ型糖蛋白D胞外区片段在哺乳动物细胞中的表达及其免疫活性
- 2011年
- 目的在哺乳动物细胞中表达单纯疱疹病毒Ⅱ型(Herpes simplex virus type-2,HSV-2)糖蛋白D(GlycoproteinD,gD)胞外区片段,并分析其免疫活性。方法化学合成HSV-2 G株gD蛋白胞外区片断的基因序列gDt,以pCEP4作为表达载体,构建N-末端带His标签的重组表达质粒pCEP4-gDt,转染至HEK293细胞进行表达。表达的蛋白采用镍离子柱亲和层析纯化,ELISA法检测目的蛋白的抗原性。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多抗血清,间接ELISA法检测效价。结果重组表达质粒经PCR、双酶切和DNA测序证实构建正确;表达产物经Western blot分析,在相对分子质量约46 000处可见目的蛋白条带;纯化的重组蛋白浓度约为45μg/ml,经ELISA检测证实具有良好的抗原性,免疫小鼠5周后,血清中特异性抗体效价达5×103。结论已在哺乳动物细胞中表达了HSV-2 gD胞外区片段,其具有良好的抗原性和免疫原性,为HSV基因重组亚单位疫苗的研制奠定了基础。
- 管文燕王正茂李琳李越希
- 关键词：单纯疱疹病毒哺乳动物细胞免疫活性
- 单纯疱疹病毒糖蛋白哺乳动物细胞表达系的建立、纯化鉴定及免疫原性分析
- 人类单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus, HSV)感染在全世界都非常普遍,并且在生命的任何阶段都可能发生。HSV I型感染主要引起生殖器以外的皮肤、粘膜(口腔粘膜)和器官(脑)的感染。HSV II型感...
- 王正茂
- 关键词：糖蛋白D哺乳动物细胞纯化免疫原性
- 文献传递
