王圆圆
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 新型低抗原性葡激酶的构建、表达及功能分析被引量：4
- 2007年
- 目的：降低野生型葡激酶（wild-type staphylokinase，wt-SAK）的抗原性，获得新型溶栓剂。方法：利用生物信息学分析野生型SAK抗原表位，将其分子内主要的抗原决定簇编码序列定点突变为丙氨酸密码子，将其N端抗原性较强的前10位氨基酸缺失。经过筛选从系列突变体中得到突变体NSAKV。结果：生物信息学分析突变后分子抗原性，结果表明其主要抗原表位消失。该突变体（NSAKV）与原核表达载体pET17b重组后，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导获得高效表达，NSAKV占全茵总蛋白的40％-50％，以可溶性形式存在。经进一步纯化，纯度达98％以上，分子量与理论值相符。比活性2．616×10^4 AU／mg。经ELISA法和溶圈法测定，NSAKV与wt-SAK制备的兔抗wt-SAK抗血清的免疫反应性显著降低，经抗血清温育后wt-SAK活性下降程度远高于NSAKV。结论：突变体（NSAKV）保持了野生型SAK的活性，同时抗原性下降。
- 王旻王圆圆邹民吉徐涛刘深吴琛王嘉玺徐东刚
- 关键词：葡激酶抗原性突变纯化
- 重组SRH融合蛋白工程菌发酵的工艺研究被引量：1
- 2012年
- 目的通过对影响表达SRH融合蛋白工程菌发酵的主要因素的研究,建立适宜SRH融合蛋白工程菌的发酵工艺。方法通过对发酵过程中的pH、溶氧调控、诱导温度、诱导时机及诱导时间进行优化建立SRH蛋白的发酵工艺,利用SDS-PAGE电泳分析表达情况。进一步利用离子交换和凝胶过滤层析对目的蛋白进行纯化,并对纯化后目的蛋白的溶栓活性和抗凝活性进行检测。结果优化后发酵条件为:发酵pH为7.0、溶氧为45%、菌体浓度达到OD600=8时开始诱导,诱导温度为41℃,诱导时间为4.5h。该发酵条件下得菌量为25g/L。SRH蛋白表达量为45%,并且90%以上为可溶性表达,纯化后蛋白纯度达95%以上,纯品SRH蛋白溶栓活性为1.80×104AU/mg,抗凝活性为100AU/mg。结论建立了SRH融合蛋白工程菌稳定的发酵工艺,该条件下SRH工程菌发酵蛋白表达量较高,多为可溶性表达,且杂蛋白较少,发酵产物具有生物学活性。
- 徐涛邹民吉王旻付文亮王圆圆刘深徐东刚
- 一种手足口病毒EV71核酸检测试剂盒
- 本发明公开了属于病毒检测技术领域的一种手足口病毒EV71核酸检测试剂盒。该试剂盒由N.BstNBI酶、T7RNA聚合酶、AMV反转录酶和RNase H、NASBA反应液、NASBA反应引物、RIDA探针、DEPC水、甲型...
- 徐东刚洪明王圆圆邢微微
- 一种手足口病毒EV71核酸检测试剂盒
- 本发明公开了属于病毒检测技术领域的一种手足口病毒EV71核酸检测试剂盒。该试剂盒由N.BstNBI酶、T7RNA聚合酶、AMV反转录酶和RNase H、NASBA反应液、NASBA反应引物、RIDA探针、DEPC水、甲型...
- 徐东刚洪明王圆圆邢微微
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