毛亮
- 作品数:64 被引量:46H指数:4
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- 相关领域:医药卫生农业科学更多>>
- 可诱导稳定表达大电导钙激活钾通道的细胞系构建及蛋白质纯化
- 2017年
- 目的:旨在构建稳定表达人大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))的稳定细胞系并对重组蛋白分离纯化。方法:利用基因工程技术将人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)编码基因克隆到表达载体pcDNA5/FRT/TO/FLAG,并转染Flp-InTMT-RExTM-293宿主细胞,用潮霉素B筛选建立稳定表达的单克隆细胞系。BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后,用anti-FLAG抗体对表达的BK_(Ca)蛋白质进行纯化。用western blot检测BK_(Ca)通道蛋白质的表达,用单通道膜片钳检测通道的电生理特性。结果:BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系经四环素诱导后表达了高水平的BK_(Ca)-FLAG融合蛋白,BK_(Ca)通道电导值为213.39±9.52pS(n=15,cell-attached)和225.72±10.61pS(n=13,inside-out),BK_(Ca)通道具有典型的大电导特性、电压依赖性、Ca2+依赖性及IbTX敏感性,与在体的人肠系膜动脉平滑肌BK_(Ca)通道具有相同的特征。纯化后的BK_(Ca)蛋白质条带单一,纯度约为89%。结论:成功构建BK_(Ca)-pcDNA5-293细胞系并获得纯化的BK_(Ca)蛋白质,为进一步深入研究通道功能及药物筛选奠定了重要的基础。
- 毛亮程俊黄文俊谭晓秋党喜同曾晓荣杨艳
- 关键词:膜片钳
- A型钾离子通道对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖的影响被引量:3
- 2017年
- 目的:探究A型钾离子(Potassium,K^+)通道抑制后对舌鳞状细胞癌株(Tca8113)细胞的影响。方法:全细胞膜片钳技术记录和分析A型K^+通道阻滞剂4-氨基吡啶(4-AP)对Tca8113细胞K^+电流的影响;MTT检测A型K^+通道对细胞增殖的作用。结果:在终浓度为2 mmol/L 4-AP作用下,A型K^+电流的峰值从(267.04±13.84)pA降到(124.81±5.24)pA。在一定范围内,不同浓度4-AP能抑制Tca8113细胞在体外的增殖,且抑制程度随药物浓度和作用时间的增加而增强。结论:A型K^+通道参与Tca8113细胞增殖的过程,且A型K^+通道阻滞剂能抑制Tca8113细胞的增殖。
- 张晓艳程俊许华丽毛亮聂敏海
- 关键词:舌肿瘤4-氨基吡啶电压门控细胞增殖
- 蛋白激酶C对心房颤动患者心房肌小电导钙激活钾通道的影响
- :小电导钙激活钾通道(Small conductance calcium-activated potassium channels,SK channels)是近年来在心房肌细胞新发现的离子通道,其中以SK2表达最为丰富....
- 范学慧李妙龄李涛谭晓秋毛亮杨艳曾晓荣
- 关键词:心房颤动小电导钙激活钾通道电流调节蛋白激酶C
- ELISA方法检测慢性心房颤动患者心房肌中SK2蛋白的表达被引量:5
- 2012年
- 目的探讨慢性心房颤动患者与窦性心律患者心房组织SK2蛋白表达水平的差异。方法将22例接受体外循环手术患者常规切除的右心耳组织作为研究对象,根据心房颤动的定义将标本分为2组:窦性心律组(n=12)、心房颤动心律组(n=10),提取患者心房组织的总蛋白,采用二辛可宁酸(BCA)方法检测总蛋白浓度,应用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测心房组织SK2蛋白水平。结果每孔上样量总蛋白为0.1mg的条件下,窦性心律组患者心房组织SK2蛋白浓度为(1.13±0.12)ng/mL,心房颤动心律组患者心房组织SK2蛋白浓度为(3.98±0.48)ng/mL,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性心房颤动患者心房肌组织SK2蛋白的表达水平明显高于窦性心律患者。
- 李涛毛亮谭晓秋李妙龄杨艳刘智飞曾晓荣
- 关键词:心房颤动酶联免疫吸附测定
- 抑制SRC家族激酶在头颈鳞癌可以减少髓源抑制细胞
- 目的:SRC家族激酶(SFK),一组非受体酪氨酸激酶,调节多种细胞功能,例如细胞增殖,分化和代谢。SFK在人类癌症的进展期中显示异常活性。但是,SFKs在头颈鳞状细胞癌(HNSCC)信号网络中的准确作用还不清楚。方法及结...
- 毛亮邓伟伟于光涛卜琳琳刘建锋马思锐武磊Ashok B Kulkarni张文峰孙志军
- 关键词:头颈鳞癌
- 蛋白激酶A在慢性心房颤动患者2型小电导钙激活钾通道调控中的作用被引量:1
- 2013年
- 目的:探讨心房颤动(AF)时心房肌细胞2型小电导钙激活钾通道(SK2通道)功能的改变及蛋白激酶A(PKA)相关途径对SK2通道电流的调节。方法:从体外循环手术中获取右心耳组织,应用改良的急性酶分离法获得人心房单个心肌细胞,采用膜片钳全细胞记录模式进行SK2通道电流记录。对比窦性心律(SR)组和AF组SK2通道电流密度及其在混合电流中所占比例的变化。观察PKA特异性抑制剂H-89对SK2通道电流的作用。采用BCA法和ELISA法检测心房组织总蛋白和PKA的含量。结果:(1)SR组和AF组的SK2通道电流均呈现内向整流特性。AF组SK2通道电流密度明显增高,且在混合电流中所占比例增加。在-130 mV钳制电压下,SR组和AF组SK2通道电流密度分别为(-2.61±0.14)pA/pF和(-6.21±0.59)pA/pF,在混合电流中所占比例分别为(20.01±1.44)%和(42.87±1.79)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)H-89能够降低SR组和AF组SK2通道电流密度,且对AF组SK2通道电流密度的抑制更明显。在-130 mV钳制电压下,H-89对SR组和AF组SK2通道电流密度的抑制率分别为(39.27±4.08)%和(76.32±2.94)%;SK2通道电流在混合电流中比例亦下降,抑制率分别为(37.48±4.77)%和(56.40±3.66)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)AF使PKA含量下降。SR组和AF组PKA含量分别为(511.91±7.22)ng/L和(444.09±7.88)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:AF患者心房肌细胞SK2通道电流密度及其在混合电流中比例升高,是AF发生和维持的基础之一,电流改变参与了心房电重构过程。PKA能够通过一定途径调节SK2通道功能,且对AF心房肌细胞SK2通道的调节更为显著。
- 张丽李涛李妙龄毛亮谭晓秋杨艳曾晓荣
- 关键词:心房颤动小电导钙激活钾通道蛋白激酶A
- 用重叠PCR策略构建抑制NF-κB活性的IKBA基因突变体
- 2017年
- 目的:用重叠PCR方法将IKBA基因三个碱基进行点突变A94G、G95C、T106G。方法:根据重叠PCR原理设计IKBA基因两条末端引物及A94G、G95C、T106G突变引物,从HUVEC细胞克隆IKBA基因,将其作为模板进行第一次PCR,将第一次PCR产物稀释10 000~50 000倍后作为模板,扩增突变体IKBAm,并克隆到p LVX-IRES-Zs Green载体,用双酶切及DNA测序筛选阳性质粒。结果:从HUVEC细胞克隆的IKBA基因及其突变体IKBAm基因长度均为954 bp,编码317个氨基酸,与IKBA基因相比,突变体IKBAm基因3个位点发生突变94A→G,95G→C,106T→G,编码的32/36位氨基酸由Ser突变为Ala。结论:成功克隆人IKBA基因及其32/36 Ser→Ala突变体IKBAm。
- 毛亮黄文俊黄鹂李雪党喜同
- 关键词:重叠PCR点突变NF-ΚB
- 头颈鳞癌选择性阻断B7-H3可以通过减少髓源抑制细胞加强抗肿瘤免疫效果
- 目的:未成熟髓源细胞包括髓源抑制细胞(MDSC)和肿瘤相关巨噬细胞(TAM)通过促进肿瘤转化和血管生成,以及抑制抗肿瘤效应器免疫反应促进肿瘤生长和转移。因此,设计用于减少MDSC和TAMs积累及其活化的策略是潜在有价值的...
- 毛亮范腾飞武磊于光涛邓伟伟陈磊卜琳琳马思锐刘冰边岩松Ashok B Kulkarni张文峰孙志军
- 关键词:头颈鳞癌免疫治疗肿瘤相关巨噬细胞
- 文献传递
- 抑制SRC家族激酶在头颈鳞癌可以减少髓源抑制细胞
- 目的:SRC家族激酶(SFK),一组非受体酪氨酸激酶,调节多种细胞功能,例如细胞增殖,分化和代谢。SFK在人类癌症的进展期中显示异常活性。但是,SFKs在头颈鳞状细胞癌(HNSCC)信号网络中的准确作用还不清楚。方法及结...
- 毛亮邓伟伟于光涛卜琳琳刘建锋马思锐武磊Ashok B Kulkarni张文峰孙志军
- 关键词:头颈鳞癌
- 文献传递
- 卵母细胞双电极电压钳技术的建立及其记录到的内源性外向电流
- 2013年
- 目的:建立卵母细胞双电极电压钳记录技术。方法:建立双电极电压钳技术平台,并应用此平台,在去除滤泡膜的中国四川牛蛙卵母细胞上,记录内源性的外向离子电流。结果:卵母细胞孵育在正常ND96溶液中,将细胞膜钳制在-80 mV膜电位,给予一系列的去极化刺激可诱发出一个外向电流。在细胞外液中加入10 mM的TEA可阻断该电流80%以上,洗脱后电流幅值恢复至90%左右。将正常ND96溶液替换为无钙ND96溶液后,电流没有变化。结论:成功建立了卵母细胞双电极电压钳记录技术。去极化刺激在牛蛙卵母细胞上诱发出的外向电流为钾电流。
- 王娜杨艳兰欢毛亮陈唐葶曾晓荣
- 关键词:TEA