李秋萍
- 作品数：22 被引量：122H指数：6
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技基础条件平台建设计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物高通量筛选模型的建立和应用被引量：6
- 2012年
- 目的建立以肽脱甲酰基酶(PDF)为靶点的抗结核药物高通量筛选模型,应用该模型筛选得到活性微生物发酵液粗提物样品。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,扩增肽脱甲酰基酶的基因片段def,构建表达载体pET-28a-def,表达并纯化结核分枝杆菌PDF酶;基于PDF水解三肽底物for-Met-Ala-Ser释放出游离NH2,而游离NH2可与荧光胺反应产生荧光的原理,利用测定所产生荧光值的方法,建立高通量药物筛选模型;使用该模型对12400个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,同时以耻垢分枝杆菌为检定菌,平板纸片法检测样品的抗菌活性,并检测所得阳性样品的细胞毒性。结果成功构建了表达载体pET-28a-def;所建立的模型稳定可行,可用于以肽脱甲酰基酶为靶点的抗结核药物的高通量筛选;用该模型对12400个微生物发酵液粗提物样品进行筛选,最终得到8个对肽脱甲酰基酶抑制活性和抗耻垢分枝杆菌活性均较好的阳性样品,阳性率0.06%;其中5个样品的细胞毒性较小。结论建立了灵敏度好、稳定性高的结核分枝杆菌肽脱甲酰基酶抑制剂高通量药物筛选模型,应用该模型所得到的阳性样品具有进一步深入研究的意义。
- 张丽蓉赵莉莉魏玉珍李秋萍王莉宁余利岩
- 关键词：分枝杆菌结核抗结核药临床前
- 以SecA动力泵为靶点的抗革兰氏阴性细菌药物筛选模型及用途
- 本发明涉及一种高效表达革兰氏阴性细菌例如绿脓杆菌secA基因的secA缺失的温度敏感型重组大肠杆菌，一种以SecA动力泵为靶点的新型抗革兰氏阴性细菌药物微生物细胞水平筛选模型，其利用高效表达绿脓杆菌secA基因的secA...
- 余利岩赵莉莉司书毅孙承航李秋萍魏玉珍张玉琴刘红宇
- 文献传递
- Actinoplanes sichuanensis03-723发酵产物95-1的分离纯化及结构鉴定被引量：1
- 2011年
- 对游动放线菌(Actinoplanes sichuanensissp.nov.)03-723菌株发酵产物中的95-1成分进行分离纯化与结构鉴定。采用乙酸乙酯萃取,硅胶柱层析、半制备HPLC等方法,对获得的95-1组分进行理化性质、UV、MS、1H-NMR、13C-NMR等数据分析及活性测定。结果:从03-723发酵产物中分离得到95-1,纯度达100%。经理化性质及波谱分析,确定95-1为Nb-乙酰色胺,其对PDF酶和E.faecium19434菌株有较弱的抑制作用和抗菌活性。结论:首次从游动放线菌03-723的发酵产物中分离纯化到Nb-乙酰色胺。
- 董国霞张玉琴王玉成贺晓波魏玉珍李秋萍刘红宇余利岩司书毅张月琴
- 关键词：分离纯化
- 醛糖还原酶抑制剂筛选模型的建立和初步应用被引量：21
- 2002年
- 本研究从牛晶状体中提取醛糖还原酶（AR），以DL-甘油醛为底物、还原型辅酶Ⅱ（NADPH）为辅酶，应用96孔石英板建立了醛糖还原酶抑制剂（ARI）微量高效筛选模型。酶促反应体系体积为200μ1，其组成成分为：50mmol/L磷酸盐缓冲液（pH6．2）、400mmol／L硫酸锂、5mmol／L 2-巯基乙醇、0． 24mmol／L NADPH、1、2mg粗酶、2mmol/L DL-甘油醛，用蒸馏水补足体积。反应温度为37°C，规定反应体系吸光度每分钟下降0．001为一个酶活力单位。以不含底物的样品为空白对照。开展了从微生物代谢产物中筛选ARI的工作，已经累计筛选真菌和稀有放线菌发酵样品约1500个，其中获得阳性样品6个，阳性率约为0．4％。
- 杨喆余利岩左联田睿李秋萍姚天爵宋京
- 关键词：醛糖还原酶抑制剂微生物来源并发症糖尿病
- 植物内生阿维链霉菌I06A-01716次生代谢产物的研究
- 2010年
- 目的分离鉴定阿维链霉菌I06A-01716发酵液中抗植物病原真菌活性成分,并进行抗真菌、抗肿瘤和免疫抑制活性研究。方法在抗真菌活性指导下,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、HPLC等分离手段对活性组分进行分离;通过高分辨质谱,1D-NMR和2D-NMR对其结构进行鉴定;采用琼脂平板纸片法,进行抗植物病原真菌的最低抑制浓度测定;采用MTT法检测其对肿瘤细胞生长的抑制作用;采用流式细胞仪测定其对细胞周期的影响。结果分离得到2个活性组分:1716-1和1716-2。1716-1和1716-2对人肝癌细胞HepG2的IC50值分别为2.42μg/mL和3.42μg/mL;对人口腔上皮癌细胞KB的IC50值分别为1.64μg/mL和6.73μg/mL。细胞周期研究表明,随着1716-2的浓度增加,在KB细胞中,G2/M期比例由对照组的15.23%逐步升高到36.53%;在HepG2细胞中,G2/M期比例由对照组的4.39%升高到35.78%。结论1716-1和1716-2结构分别与寡霉素B和寡霉素A一致。1716-1和1716-2有抗多种植物病原真菌活性。1716-1和1716-2在较低浓度下能够抑制人肝癌细胞HepG2和人口腔上皮癌细胞KB生长。1716-2使HepG2细胞和KB细胞阻滞在G2/M期。
- 李舟郑光辉闫蕾蕾张玉琴余利岩魏玉珍李秋萍姜翠霞韩宁宁何琪杨刘少伟高红孙承航
- 关键词：抗肿瘤活性抗真菌活性
- 广西山口红树林内生放线菌的分离、筛选及初步鉴定被引量：40
- 2010年
- 从广西山口国家红树林生态自然保护区采集8种真红树植物和5种半红树植物的根、茎、叶及胚轴等组织样品共计41份。经过表面消毒后粉碎,分别以几丁质、腐殖酸、木聚糖等作为主要营养及能量来源设计了8种分离培养基,从植物组织中分离得到118株放线菌。使用6种新药筛选模型对分离菌株进行了生理活性筛选,77株放线菌的发酵液样品在一个或多个药物筛选模型中显示为阳性,初筛阳性率为65.3%。对77株筛选阳性菌株进行的初步分类研究结果显示,其中44株属于链霉菌属,25株为小单孢属的菌株,3株属于糖丝菌属,3株为诺卡氏属菌株,1株是拟诺卡氏属菌株,1株是伦茨氏菌属的菌株。对一株在抗多重耐药检定菌HH22和降血脂模型上都显示出良好活性的菌株I07A-01824进行表型和基因型分析,确定I07A-01824为黄白链霉菌(Streptomyces albidoflavus)菌株。该研究显示,红树植物内生环境不仅仅孕育了丰富多样的内生放线菌,而且红树植物内生放线菌也是新型天然生理活性次级代谢产物的有效来源。
- 魏玉珍张玉琴赵莉莉李秋萍苏静刘红宇孙承航余利岩
- 关键词：红树内生放线菌
- 以SecA为靶点的新型抗绿脓杆菌药物细胞水平筛选模型的建立和应用被引量：9
- 2008年
- Sec途径(即分泌途径secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径。其中,最为关键的组分之一是SecAATP酶,是蛋白质转运途径中的"动力泵",通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜,在细菌中是不可缺少的。我们推测抑制SecAATP酶活性的化合物,必然会在一定程度上抑制蛋白质的转运和分泌。通过绿脓杆菌与大肠杆菌SecA蛋白的互补作用,利用本实验室构建的高效表达SecA蛋白的基因工程菌,建立了SecA蛋白ATP酶活性抑制剂的细胞水平筛选模型。利用所纯化的绿脓杆菌SecA蛋白的ATP酶活测定体系,验证了所建立的细胞水平筛选模型具有一定的特异性。研究结果表明其中两个酯相组分在细胞水平和蛋白水平均具有活性,值得进行深入的研究。
- 赵莉莉李秋萍魏玉珍张玉琴余利岩
- 关键词：药物筛选绿脓杆菌蛋白转运
- 一种筛选PknB抑制剂的反应体系及其筛选方法
- 本发明提供一种用于筛选PknB抑制剂的反应体系，以及利用该体系筛选PknB抑制剂的方法。本发明的筛选方法包括配置反应体系、设置反应组、制备荧光素酶反应液和筛选。本发明PknB抑制剂的筛选方法简单可靠，效率高，成本低，是一...
- 余利岩黄彬赵莉莉苏静李秋萍魏玉珍张玉琴
- 文献传递
- 两株游动放线菌及其在抗细菌中的应用
- 本发明提供了两株游动放线菌及其应用，该游动放线菌Actinoplanes sp.PDF-1和PDF-2的保藏号分别为CGMCC No.4692和CGMCC No.4693。它们具有抗细菌尤其是抗耐药细菌的作用。本发明提供...
- 余利岩张月琴董国霞李子强孙薇张玉琴李秋萍魏玉珍
- 文献传递
- 具有产生安莎类抗生素潜能的放线菌的筛选和初步鉴定
- 具有良好抗肿瘤和抗病毒活性的格尔德霉素的发现和研究再次激起了微生物药学工作者对筛选新结构的安莎类抗生素的研究兴趣。通过应用PCR方法从2200株新分离放线菌菌株中筛选得到了39株AHBA合酶阳性菌株,阳性率占1.77%。...
- 张玉琴余利岩张会图武临专魏玉珍李秋萍张月琴
- 文献传递
