施柯
- 作品数：15 被引量：20H指数：3
- 供职机构：第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 高滴度表达抑制转录因子的重组腺相关病毒的制备
- 2004年
- 目的 获得表达小鼠抑制转录因子ROG(repressorofGATA -3)基因 ;构建表达ROG的重组腺相关病毒载体 ,制备腺相关病毒。方法 设计、合成引物 ,通过逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)从CTLL- 2细胞总RNA中扩增ROG基因 ,测序成功后 ,最终连接于pAAV- MCS ,双酶切、PCR鉴定阳性重组质粒 ,并在Hela细胞中表达 ;制备高滴度重组腺相关病毒。结果 成功扩增了小鼠ROG基因 ,构建表达ROG基因的重组腺相关病毒表达载体 ,并成功表达于Hela细胞。结论 本实验构建的小鼠ROG重组腺相关病毒将为哮喘的基因治疗研究奠定物质基础。
- 王桂芳杨丹榕修清玉施柯吴丹黎怀星孙树汉
- 关键词：重组腺相关病毒转录因子HELA细胞高滴度酶切总RNA
- BCG-DNA对哮喘患者外周血单个核细胞IFN-γ和IL-4产生的作用
- 2004年
- 目的 :研究免疫活性物质卡介苗基因组 DNA(BCG- DNA)对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC) IFN- γ和 IL- 4产生的影响。 方法 :分离哮喘患者 PBMC,分别加入 BCG- DNA、地塞米松刺激培养 ,EL ISA检测培养上清中 IFN- γ及 IL- 4含量 ,RT- PCR检测 PBMC IFN-γ m RNA及 IL - 4 m RNA的表达量 ,并与空白对照组相比较。结果 :地塞米松在体外对哮喘患者PBMC产生的 IFN-γ m RNA和蛋白、IL - 4 m RNA和蛋白均有抑制作用 ;BCG- DNA抑制哮喘患者 PBMC IL - 4 m RNA和蛋白的分泌 ,而促进 IFN -γ m RNA和蛋白的分泌 ,与对照组比较差异显著 (P<0 .0 1 ) ,且在体外对 PBMC无毒性。 结论 :BCG-DNA不仅具有和地塞米松相同的下调 IL - 4表达的作用 ,而且还具有地塞米松所没有的诱导 IFN -γ表达的作用 ,利于纠正哮喘患者体内存在的 Th1 / Th2比例失衡状态 。
- 商艳胡振林李强施柯刘忠令孙树汉
- 关键词：哮喘外周血单个核细胞IFN-RIL-4
- 56609株钩体lipL32基因的克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的初步表达
- 2003年
- 寇志华孙树汉施柯郭瀛军陈祖欢
- 关键词：钩端螺旋体病聚合酶链反应大肠杆菌基因克隆
- 表达ROG的重组腺相关病毒载体的构建及高滴度病毒的制备被引量：1
- 2005年
- 目的:获得表达小鼠ROG(repressor of GATA 3)基因的重组腺相关病毒载体,制备表达ROG的重组腺相关病毒。方法:设计、合成引物,通过RT PCR法从CTLL 2细胞总RNA中扩增ROG基因,测序确认后,连接于pAAV MCS载体,双酶切、PCR鉴定重组病毒载体;制备高滴度重组腺相关病毒。结果:成功扩增了小鼠ROG基因,构建可表达ROG基因的重组腺相关病毒载体,并获得表达ROG的重组腺相关病毒。结论:本实验获得的小鼠ROG重组腺相关病毒,将为支气管哮喘的基因治疗研究奠定基础。
- 王桂芳施柯杨丹榕陈吉泉修清玉黎怀星孙树汉
- 关键词：REPRESSORGATA-3重组腺相关病毒哮喘基因治疗
- 钩端螺旋体膜表面蛋白LipL41基因的克隆、序列分析及表达被引量：2
- 2002年
- 目的：进一步分析钩端螺旋体LipL－41的免疫原性。方法：通过PCR的方法，以我国特有的钩端螺旋体流感伤寒群临海型lin6株（56609）的 DNA为模板，扩增目的基因 LipL41，克隆至 PcDNA3载体上，以自动测序仪测序后进行序列分析，然后克隆至原核表达载体pGEX－5T进行原核表达，Western印迹分析其免疫原性。珐票：获得长 1068 hp的片段，DNA序列分析表明该菌株的LipL41基因与文献报道具有很高的同源性（95．0％～99．4％），在大肠杆菌中获得了表达，并与抗钩端螺旋体血清反应。结论：该抗原为致病性钩端螺旋体所具有的保守性抗原成分，可能在钩端螺旋体病的诊断和预防中发挥作用。
- 寇志华孙树汉郭嬴军陈祖欢施柯胡振林张洪英周凤娟
- 关键词：免疫原性钩端螺旋体外膜蛋白原核表达基因克隆
- 地高辛标记的DNA探针检测核酸疫苗中宿主菌基因组DNA的含量
- 2003年
- 将合成的引物与宿主菌的染色体模板 DNA进行 PCR扩增的核糖体 DNA片段 ,以地高辛进行标记 ,与待测 DNA样品进行点杂交 ,确定制备的乙肝 DNA疫苗中其宿主菌基因组含量 <15 ng/μg质粒 DNA。这提示地高辛标记的探针用于检测基因组 DNA的方法灵敏。
- 贺艳施柯孙树汉
- 关键词：地高辛标记DNA探针核酸疫苗宿主菌DNA含量
- IL-2调节人外周血T淋巴细胞CTLA-4表达
- 2003年
- 目的 探讨人外周血T淋巴细胞CTLA 4的表达情况及IL 2对其表达的调节作用。方法 采用流式细胞仪定量测定人外周血T淋巴细胞内及细胞膜上CTLA 4的水平 ,半定量RT PCR检测T淋巴细胞内CTLA 4mRNA的水平 ,并在体外用IL 2刺激T淋巴细胞后观察CTLA 4及CTLA 4mRNA水平的变化。结果 人外周血T淋巴细胞膜表面几乎不表达CTLA 4,7.6 %～ 18.0 %的T淋巴细胞有胞内表达 ,CD4+ T淋巴细胞表达CTLA 4的阳性比例略高于CD8+ T淋巴细胞 ;人T淋巴细胞可溶性形式的CTLA 4mRNA半衰期短于全长CTLA 4mRNA ;IL 2可以通过诱导人T淋巴细胞CTLA 4mRNA的转录上调CTLA 4的表达 ,IL 2诱导的细胞多为CD2 5 + T淋巴细胞。结论 CTLA 4多存在于人外周血T淋巴细胞内 ,参与T淋巴细胞活化过程的调节。IL 2的免疫抑制作用可能与其诱导T淋巴细胞内CTLA 4mRNA转录 ,从而上调CTLA 4的表达有关。
- 商艳王雄彪李强胡振林施柯孙树汉刘忠令
- 关键词：IL-2人外周血T淋巴细胞CTLA-4
- 卵清白蛋白特异性T辅助细胞1/T辅助细胞2细胞系的建立被引量：4
- 2005年
- 目的体外建立可长期培养的抗原特异性的T辅助细胞(Th)1/Th2克隆及细胞系,并分析其对抗原的反应情况及其产生细胞因子的情况。方法采用卵清白蛋白(OVA)免疫BALB/c小鼠,取淋巴结细胞在体外用同系脾细胞和OVA反复刺激,然后分别用白介素(IL)-2、γ干扰素(IFN-γ)及IL-2I、L-4共同培养,并同时加入同系脾细胞和OVA,进行Th1和Th2克隆的诱导,然后通过有限稀释法进行克隆化培养。对克隆化的细胞用酶联免疫吸附试验(ELISA)和流式细胞仪分别检测其分泌细胞因子的情况及细胞的表面标志。结果各获得2株Th1/Th2细胞系,它们分泌的细胞因子分别为IL-2、IFN-γ和IL-4I、L-5I、L-10等。结论成功建立抗原特异性Th1/Th2细胞系。
- 修清玉王桂芳杨丹榕施柯黎怀星孙树汉
- 关键词：克隆化培养卵蛋白
- 腺相关病毒介导的抑制转录因子GATA-3对支气管哮喘防治作用研究
- 修清玉王桂芳杨丹榕陈吉泉施柯黎怀星孙树汉陶莉莉
- 简要技术说明： 该研究应用抗原反复刺激和细胞因子诱导、通过单克隆技术，建立OVA特异性Th1和Th2细胞系和克隆，增殖试验及ELISA分析表明，所建立的5个克隆抗原特异性强，分泌特定的细胞因子；应用RT-PCR技术克隆...
- 关键词：
- 关键词：哮喘转录因子
- 钩端螺旋体鞭毛蛋白B(FlaB)基因flaB在大肠杆菌内的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 在大肠杆菌中高效表达钩端螺旋体内鞭毛蛋白 (FlaB)用于钩体病的诊断和预防。方法 将目的基因flaB定向克隆至原核表达载体 pGEX - 5T ,构建重组融合表达质粒 pGF ;Western -blot鉴定其特异性 ,ELISA法判定其用于钩体病诊断的可行性。结果 GST -FlaB主要以包涵体形式表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 4 0 % ;Western -blot结果显示该蛋白与FlaB抗血清能呈现明显的单一条带 ;包涵体经TritonX - 10 0及尿素纯化后 ,纯度可达 90 % ,并且能溶于包被缓冲液中 ;ELISA检测显示纯化后的GST -FlaB具有较好的特异性。结论 钩端螺旋体FlaB可以高效表达并可能用于ELISA检测及钩体病的预防。
- 寇志华张毅郭瀛军陈祖欢施柯孙树汉
- 关键词：钩端螺旋体基因大肠杆菌
