吴滔
- 作品数：4 被引量：19H指数：3
- 供职机构：中国药科大学生物制药学院更多>>
- 发文基金：博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 低特异性L-苏氨酸醛缩酶基因工程菌的构建被引量：3
- 2000年
- 应用PCR技术从E coliJM 10 5中扩增出长约 1kb的低特异性L 苏氨酸醛缩酶基因 ,将其插入高表达载体 pET 11c的NdeI/BamHI位点 ,转化E coliBL 2 1(DE3) ,构建高产低特异性L 苏氨酸醛缩酶基因工程菌。SDS PAGE和薄层扫描表明 ,经IPTG诱导 2h ,工程菌低特异性L 苏氨酸醛缩酶的表达量占菌体总可溶性蛋白的 72 9%。酶活测定结果表明 ,39株工程菌低特异性L 苏氨酸醛缩酶的活力比宿主菌均有不同程度的提高 ,其中 86号是宿主菌的 31倍。
- 韦平和吴滔吴梧桐余霁
- 关键词：基因工程菌
- 新型降钙素的分子设计被引量：2
- 2000年
- 以人和鲑鱼降钙素为先导物 ,根据多肽类药物设计原理 ,借助多肽蛋白质计算机分析软件辅助设计了一种新的人降钙素类似物 ,简称新型降钙素 .计算机分析结果表明 :该新型降钙素等电点提高 (pI 8.7) ,C 末端亲水性增加 ,抗原表位分析图谱与人降钙素的相同 .利用基因工程法制备新型降钙素 。
- 张玉彬吴梧桐王旻吴滔
- 关键词：降钙素分子设计抗骨质疏松药
- 新型降钙素的基因合成与克隆表达被引量：8
- 1999年
- 借助计算机辅助设计了一种新的人降钙素类似物 (新型降钙素 )。根据密码子偏爱性原理及基因工程操作原则设计了它的基因 ,运用化学法和酶法相结合的技术合成了该基因 ,并克隆到质粒 pUC19中 ,DNA测序验证正确。该基因被克隆到融合型表达载体pGEX 2T中 ,重组融合型表达载体nCT/ pGEX 2T转化E coliBL2 1,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 310 0 0的融合蛋白带 ,融合蛋白占细胞内总蛋白的 34%。WesternBlotting分析证明该新型降钙素获得表达。
- 张玉彬吴滔王吴梧桐郑珩张兆林刘晓军
- 关键词：降钙素基因工程
- 新型降钙素的制备及活性测定被引量：13
- 2000年
- 新型降钙素 (一种人降钙素类似物 )基因工程菌nCT/ pGEX 2T/E .coliBL2 1经 2 0L规模发酵 ,离心收集细胞 ,反复冻融裂解细胞 ,裂解液经G Sepharose 4B亲和层析纯化得到融合蛋白。融合蛋白进行磺酸化和溴化氰裂解后 ,用S Sepharose纯化得到新型降钙素前体 ,其纯度为 97 6 %。选用羧肽酶Y(CPY)将其前体转化为C 末端酰胺化的新型降钙素 ,转化率为 34 %。转化液经HPLC分离纯化得到新型降钙素。大鼠体内降血钙试验表明新型降钙素具有显著降血钙活性。
- 张玉彬吴梧桐王旻吴滔何南郭长缨
- 关键词：工程菌发酵纯化活性
