黄保英
- 作品数：70 被引量：72H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学化学工程更多>>
- 基于多重PCR-质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法
- 本发明公开了基于多重PCR‑质谱的18种呼吸道病毒高通量检测引物组、试剂盒和检测方法，属于生物技术领域。本发明针对18种常呼吸道病毒分别设计扩增引物和延伸引物，并开发一种可以同时检测和特异性识别18种呼吸道病毒的高通量方...
- 谭文杰陆柔剑秦影黄保英翟德胜
- 广谱流感疫苗研究进展被引量：6
- 2008年
- 黄保英王文玲阮力
- 关键词：流感疫苗广谱呼吸道传染病流感病毒病毒亚型疫苗接种
- 甲型流感病毒核蛋白在大肠杆菌中的可溶性高效表达与纯化被引量：4
- 2011年
- 为了在大肠杆菌中高效表达甲型流感病毒A/京科/30/95(H3N2)核蛋白NP,以便对原核表达的NP蛋白进行免疫原性研究,本研究通过密码子优化及全基因合成等方法,将3种形式的NP基因:与6×His标签融合的NP基因NP(His)、非融合的野生型NP基因NPwt及非融合的按大肠杆菌优势密码子改造的基因NP(O)分别插入原核表达载体pET-30a,构建了表达3种形式NP基因的3种原核表达质粒并研究不同质粒中NP蛋白的表达形式、条件、纯化工艺及抗原性。限制性酶切反应与测序表明,三种形式的NP基因均正确插入原核表达质粒pET-30a;SDS-PAGE凝胶电泳显示,三种形式的NP基因均能在大肠杆菌中表达,NP(O)基因的表达量最高;在不同温度诱导条件下,NP蛋白呈现可溶性表达,NP(O)基因可溶性高效表达的条件为:T=25℃,t=10 h;经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化,可溶性表达的NP蛋白纯度可达90%;Western blot检测显示,纯化的NP能与流感病毒A/PR/8/34(H1N1)株感染小鼠的血清发生特异性结合。这些结果表明,非融合表达的密码子优化甲型流感病毒NP蛋白能在大肠杆菌中高效表达和纯化,同时保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王文玲王秀平蒋涛谭文杰阮力
- 关键词：甲型流感病毒核蛋白原核系统密码子优化蛋白质表达
- 表达呼吸道合胞病毒G蛋白胞外区的重组H1N1流感病毒单剂滴鼻免疫可在小鼠诱导强免疫应答与保护
- 2024年
- 目的基于重组流感病毒载体的呼吸道合胞病毒(RSV)疫苗的构建及在小鼠体内的免疫保护效果评价。方法构建并拯救表达RSV A2型G蛋白胞外结构域(Gecto)的重组甲型流感病毒,将其命名为PR8NAGecto/WSN。体外验证重组病毒G蛋白表达与病毒生长动力学后,单剂滴鼻免疫BALB/c小鼠,并评价体液免疫、黏膜免疫与细胞免疫。免疫4周后,分别用RSV A2与RSV B9320进行攻毒,通过小鼠体重变化、肺组织病毒滴度及病理评价免疫保护效果。结果单剂滴鼻免疫PR8NAGecto/WSN能在小鼠体内产生较强的体液免疫、黏膜免疫及细胞免疫。与对照组比较,免疫组小鼠经RSV A2或B9320两个亚型病毒攻毒后肺病毒载量与肺组织病理均明显改善。结论单剂滴鼻免疫重组PR8NAGecto/WSN疫苗可在小鼠体内诱导较强的RSV特异免疫应答与攻毒保护。本研究为新型RSV黏膜疫苗的研发提供新的思路与实验资料。
- 韩瑞雯王东红王瑭琪程雪婷邴佳洛翟程程孙树才邓瑶黄保英谭文杰
- 关键词：呼吸道合胞病毒流感病毒病毒载体G蛋白
- 广谱抗病毒药物吐根碱抑制HCoV-OC43的转录组分析
- 2024年
- 本研究旨在探索吐根碱对人冠状病毒OC43(Human coronavirus OC43, HCoV-OC43)的作用时相和抗病毒机制。首先,在MRC-5细胞上建立了HCoV-OC43病毒的体外感染复制动力学曲线,测定了药物的EC_(50)和CC_(50)。结果表明吐根碱能够在感染早期有效地抑制HCoV-OC43病毒在MRC-5细胞中的复制。通过转录组分析,发现HCoV-OC43感染和吐根碱处理均导致宿主基因表达的紊乱,并且两者共同激活了抗病毒通路。吐根碱可能通过激活OASL、Mx1和IFIT2等抗病毒基因来增强宿主对病毒的抵抗能力。此外,吐根碱还可能通过抑制TMEM41B表达而进一步影响病毒复制过程。这些研究结果为深入探究吐根碱作为抗冠状病毒药物的机制和潜在靶点提供了重要线索。
- 李涵张高倩吴长城张钟贤牛军伟霍恕婷叶飞邓瑶黄保英赵莉沈晓玲谭文杰
- 关键词：吐根碱抗病毒作用转录组学
- 石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用
- 本发明公开了石蒜碱在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用。本发明选用无毒性浓度的石蒜碱进行广谱抗冠状病毒研究，发现石蒜碱能在体外有效抑制β群冠状病毒HCoV‑OC43、MERS‑CoV、MHV‑A59以及α群冠状病毒HCoV‑...
- 谭文杰申梁黄保英牛军伟
- 甲型流感病毒NP和M2e融合蛋白高效表达和纯化
- 2015年
- 目的 探索甲型流感病毒NP-M2e融合蛋白在大肠埃希菌中可溶性高效表达和纯化的条件.方法 将NP-M2e融合基因（NM2e）经密码子优化后插入pET30a后获得pET30a-NM2e原核表达质粒,通过转化BL21（DE3）后的克隆筛选、诱导温度与诱导时间等条件的优化实现NM2e蛋白在大肠埃希菌中的可溶性高效表达;表达产物经离子交换层析与分子筛层析纯化并通过Western-Blot鉴定其抗原性.结果 NM2e基因正确插入pET30a中并能在大肠埃希菌中表达;25℃温度诱导下NM2e蛋白出现可溶性表达,诱导时间由4h延长至10 h可明显提高蛋白表达量;可溶性NM2e蛋白经阴离子交换和凝胶过滤层析两步纯化后的纯度可达90％,纯化产物能特异性结合NP鼠多抗及M2e鼠单抗.结论 甲型流感病毒NM2e融合蛋白能在大肠埃希菌中高效表达和纯化并保持良好的免疫反应活性。
- 黄保英王秀平谭文杰王文玲阮力
- 关键词：流感病毒A型原核细胞蛋白质工程
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因
- 一种编码甲型流感病毒NP蛋白和M2e多肽的融合基因。所属技术领域：1.生物技术，2.基因工程疫苗。本发明提供一种根据大肠杆菌偏爱密码子优化的人工合成的编码甲型流感病毒核壳蛋白NP和基质蛋白2胞外区M2e多肽的融合基因NM...
- 阮力王文玲黄保英王秀平
- 季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中的传代适应被引量：1
- 2015年
- 目的 探索季节性流感病毒H1N1和H3N2疫苗株在BALB/c小鼠中传代适应的可能性.方法 将2008-2009年度季节性流感病毒疫苗株滴鼻感染BALB/c小鼠,在病毒增殖高峰期取肺组织制备肺悬液,连续传代10代,并对野生型与鼠肺适应株在小鼠中的致死性与全基因组序列进行比较.结果 H3N2疫苗株感染BALB/c小鼠后均未在肺部检测到病毒;而H1N1疫苗株感染小鼠后第2天为病毒生长高峰期,病毒滴度随传代次数的增加而升高;全基因组序列分析结果表明HA-N142D突变与病毒毒力的的提高密切相关.结论 H3N2疫苗株难以在BALB/c小鼠中有效复制与适应;而H1N1疫苗株能够在BALB/c小鼠中有效复制,其毒力可以通过连续的鼠肺传代而提高,HA-N142D突变对H1N1疫苗株致病性的增加密切相关,为进一步研究流感病毒鼠肺适应的分子机理奠定了基础.
- 黄保英王秀平王文玲谭文杰阮力
- 关键词：流感病毒A型流感疫苗
- 甲型流感病毒X31(H3N2)小鼠适应后毒力增强与HA及PB2突变相关
- 2019年
- 流感小鼠适应毒株及感染模型是研究流感病毒致病机理、评价抗流感病毒药物和疫苗效果的重要工具。为建立甲型流感病毒X31(H3N2)的鼠肺适应毒株,并探讨其在小鼠适应过程中毒力增强的分子机制,本研究将X31在BALB/c小鼠肺组织中连续传代,通过观察病毒滴度测定、感染小鼠症状变化、体重改变和致死力等指标,发现X31经过鼠肺连续传代10次以后,病毒毒力逐渐增强,与原代病毒相比,鼠肺中病毒滴度提高10倍,半数致死量(50%lethal dose,LD50)提高大于1 000倍。确定获得高致病力的鼠肺适应毒株(Mouse adapted X31,X31MA);对X31MA毒株全基因组测序发现,血凝素(Hemagglutinin,HA)基因出现3个有义突变(P221H、V309I、K411T),聚合酶碱性蛋白2(Basic protein 2,PB2)基因出现1个有义突变(M483T)。结果表明,通过在小鼠肺组织中连续传代X31(H3N2)致病力增强,其HA和PB2蛋白中四个适应性突变位点可能与流感病毒X31MA毒力增加相关。本研究为流感疫苗评价及致病机制研究提供了重要技术支持。
- 鲁福娜王文玲张雅薇童贻刚刘科芳黄保英沈晓玲谭文杰
- 关键词：甲型流感病毒突变位点致病力
