邢伟
- 作品数：31 被引量：46H指数：4
- 供职机构：第三军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程更多>>
- 组蛋白去乙酰化酶2突变体构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响
- 背景：我们前期研究发现,组蛋白去乙酰化酶2 (HDAC2)具有独立的SUMO E3连接酶功能结构域,通过此酶介导,HDAC2可通过上调翻译起始因子eIF4E的SUMO化修饰,直接参与并促进蛋白质翻译起始复合物eIF4F的...
- 郭韡邢伟肖勇黄宏徐祥
- 关键词：L929细胞ODCC-MYC
- 高糖预处理内皮细胞条件培养基对脐带间充质干细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2015年
- 为了探讨体外高糖诱发内皮细胞损伤而继发性对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cell,h UC-MSC)增殖和凋亡的影响及其机制,该研究采用酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,h UVEC),制备不同糖浓度(5,30 mmol/L)培养h UVECs 24,48,72 h条件培养基(conditioned medium,CM);内皮细胞条件培养基(h UVEC-CM)培养h UC-MSC 3 d,实时细胞监测系统检测h UC-MSC的增殖;Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cl-Caspase3的表达。结果显示,条件培养基培养h UC-MSC 3 d后,与对照组相比,h UVEC-CM(HG)组h UC-MSC的增殖活力明显降低,凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bcl-2的表达明显减少,Bax及Cl-Caspase3的表达明显增加(P<0.05)。以上表明,h UVEC-CM(HG)能抑制h UC-MSC的增殖,并通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cl-Caspase3的表达诱导h UC-MSC凋亡。
- 李循龙皎月朱明邢伟郭黄宏徐祥
- 关键词：人脐静脉内皮细胞人脐带间充质干细胞
- 槲皮素活化mTOR信号通路对L929成纤维细胞增殖的影响被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨槲皮素(Quercetin,QU)对L929成纤维细胞增殖的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测QU对L929细胞增殖的影响,荧光素酶报告基因法检测QU对蛋白质翻译调控的影响、Western blot法检测QU对mTOR介导的蛋白质翻译调控通路关键基因mTOR、P-4E-BP1(翻译起始因子4E的结合蛋白)的磷酸化,细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达及mTOR通路阻断实验。结果:MTT法检测结果显示在36 h干预点,浓度为1×10-4、1.5×10-42、×10-4、2.5×10-4 mol/L时,QU可明显促进L929细胞增殖(P<0.01);荧光素酶报告基因检测系统结果显示:在36 h干预点,2.5×10-4 mol/L QU与对照组相比,RLU(相对光单位)值明显增加(P<0.001);Western blot法检测结果显示,mTORc、yclin、D1和P-4E-BP1的表达明显增加。100ng/ml的雷帕霉素作用36 h后,与对照组相比,QU组P-4E-BP1、mTORc、yclin D1蛋白表达明显增加,雷帕霉素组明显减少,雷帕霉素+QU组蛋白表达明显增加,但较QU组有所减少。结论:QU可通过诱导mTOR信号通路活化,进而促进细胞周期调控蛋白cyclin D1的表达,诱导L929细胞的增殖。
- 董海良张颖黄谢梅黄宏郭韡邢伟郝进徐祥
- 关键词：槲皮素MTOR信号通路细胞增殖
- 高糖预处理内皮细胞条件培养基对脐带间充质干细胞增殖和凋亡的影响
- 为了探讨体外高糖诱发内皮细胞损伤而继发性对人脐带间充质干细胞(humanumbilical cord-derived mesenchymal stem cell,hUC-MSC)增殖和凋亡的影响及其机制,该研究采用酶消化...
- 徐祥李循龙皎月朱明邢伟黄宏
- 关键词：人脐静脉内皮细胞人脐带间充质干细胞
- HDAC2磷酸化区域突变体的构建及其对小鼠成纤维细胞增殖的影响
- 2015年
- 目的应用片段缺失突变技术鉴定HDAC2自身磷酸化对其Sumo-E3连接酶活性及蛋白质翻译的影响。方法以前期获得的鼠源性HDAC2Sumo-E3连接酶结构域基因片段为模板,设计片段缺失突变引物,经长片段重叠延伸PCR技术扩增获得片段缺失突变基因片段,后于Top10大肠杆菌中自然连接扩增获得pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3连接酶磷酸化结构域缺失突变的真核表达载体。然后将载体转染于L929成纤维细胞瞬时过表达突变基因,再经翻译反应性荧光素酶报告基因实验和Western-blot鉴定HDAC2自身磷酸化修饰对Sumo-E3连接酶介导的报告基因和靶蛋白质表达的影响。最后通过MTT实验检测HDAC2自身磷酸化修饰对其Sumo-E3连接酶介导的L929细胞增殖的影响。结果成功构建获得磷酸化修饰完全缺失的HDAC2片段缺失突变体pcDNA3.1/HDAC2-Sumo-E3(DEL 394-424AA)。LUC报告基因检测结果显示,DEL 394-424AA片段缺失突变体促进LUC翻译是对照组的4.24倍,且能显著促进靶蛋白ODC和c-Myc的表达,以及L929小鼠成纤维细胞的增殖效应。结论 HDAC2自身磷酸化修饰对HDAC2Sumo-E3连接酶活性及其调节的蛋白质翻译和细胞增殖作用起负性调节作用。
- 肖勇黄宏郭韡邢伟李向云袁培淞徐祥
- 关键词：磷酸化修饰成纤维细胞
- 陆军部队基层卫生机构军医工作满意度调查被引量：3
- 2020年
- 目的调查陆军部队基层卫生机构军医工作满意度情况及其影响因素。方法采用工作满意度调查量表(JSS),对2018年5月至2019年9月参加某机构任职培训的基层军医进行整群随机抽样调查;描述性分析各维度及总体满意度的得分情况,采用单因素方差分析与多元线性回归分析相结合的方法探索各维度及总体满意度的相关因素。结果军医总体满意度得分为(115.76±22.54),各维度得分最高的3项是"规章制度""同事"和"管理者",分别为(14.28±4.60)、(13.97±2.91)、(13.96±3.79);多元线性回归分析显示,"生育子女情况""是否通过住院医师规范化培训""周末能否正常轮休""是否志愿献身国防入伍""入伍方式""能否按自己时间安排年休假"是影响总体满意度的主要因素。结论注重基层军医的职业发展,重视人员入伍动机的教育和引导,能有效提升军医的工作满意度。
- 韩治中陈勇王赓邢伟蒲傑刘诗莉梁胜翔丁睿恒李颖糜漫天王云贵
- 关键词：军医工作满意度部队卫生机构陆军
- 靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞的构建与功能鉴定被引量：3
- 2017年
- 目的:构建靶向GPC3阳性肝癌细胞的嵌合抗原受体修饰T细胞[chimeric antigen receptor-modified T cell,CAR-T cell],并评估其对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤效能。方法:选择偏爱密码子技术改造基因序列,以增强CAR分子表达效率,设计靶向GPC3抗原的CAR分子基因并构建携带GPC3-CAR基因的慢病毒表达载体p CDH-GPC3-CAR,感染T细胞;采用Western blotting、流式细胞术、实时细胞监测和ELISA技术分别检测GPC3-CAR分子在CAR-T细胞的表达、慢病毒感染T细胞效率、GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性肝癌细胞的杀伤活性和特异性。结果:双酶切p CDH-GPC3-CAR重组慢病毒质粒可见分子质量和GPC3-CAR分子一致的基因片段,成功构建p CDH-GPC3-CAR慢病毒质粒。约54.38%的GPC3-T细胞表达GPC3-CAR分子,称为GPC3-CAR-T细胞。GPC3-CAR-T细胞对GPC3阳性的肝癌细胞Huh-7比GPC3阴性的肝癌细胞SK-HEP-1具有更高效的杀伤能力[(78.96±4.76)%vs(6.87±3.15)%,P<0.01]。与GPC3阳性Huh-7肝癌细胞共培养的肝癌GPC3-CAR-T细胞分泌IFN-γ水平比Mock组高效[(21 371.4±1 808.3)vs(152.8±12.5)pg/ml,P<0.01],这可能是其高效杀伤肝癌细胞的机制之一。结论:靶向肝癌的GPC3-CAR-T细胞具有高效分泌IFN-γ细胞因子并特异高效杀伤GPC3阳性肝癌细胞的能力,为进一步推进GPC3-CAR-T临床前和临床研究奠定基础。
- 吴斯玮敖翔郭韡邢伟安天琛敖罗权胡雪停李战徐祥
- 关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3肝癌
- Akt/mTOR信号通路介导低浓度过氧化氢对小鼠表皮干细胞的促增殖作用
- 2015年
- 目的:探讨低浓度过氧化氢(H_2O_2)对小鼠表皮干细胞(mESCs)体外促增殖作用及其机制。方法:以酶消化法分离培养mESCs。免疫荧光技术鉴定第3代mESCsβ1整合素和角蛋白19(K19)表达,流式细胞术鉴定CD34的表达;以不同低浓度H_2O_2(0、25、50、100、150和200μmol/L)处理mESCs 48 h和72h。同时,另一组实验中在用不同浓度H_2O_2刺激的同时加入或不加入雷帕霉素(50 ng/ml)培养48 h。甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;Western Blot法检测H_2O_2刺激小鼠mESCs 48 h Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、P70s6k、e IF4E、4E-BP1、p-mTOR、p-Akt、p-P70s6k、p-eIF4E、p-4E-BP1和细胞增殖相关蛋白Cyclin D1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:免疫荧光技术检测分离培养的mESCs细胞100%表达β1整合素和K19;流式细胞术检测99.8%的mESCs表达CD34;MTT检测结果显示,48 h和72 h时25μmol/L和50μmol/L的H_2O_2可以有效地促进mESCs的增殖(P<0.05),而雷帕霉素能拮抗这一效应;但当H_2O_2浓度为200μmol/L时,则显著抑制mESCs增殖(P<0.05);免疫印迹结果显示低浓度H_2O_2处理mESCs 48 h后,Akt/mTOR信号通路关键蛋白mTOR、Akt、eIF4E、4E-BP1水平及其磷酸化水平(p-mTOR、p-eIF4E、p-4E-BP1)显著增加(P<0.05或P<0.01),当H_2O_2浓度为200μmol/L时则抑制其表达(P<0.05或P<0.01)。此外,50μmol/L的H_2O_2能上调细胞周期蛋白Cyclin D1和PCNA的表达,而雷帕霉素能拮抗这一作用。结论:低浓度的H_2O_2对mESCs有明显的促增殖作用,并且能激活Akt/mTOR通路。而低浓度H_2O_2对mESCs的促增殖作用至少部分是通过活化Akt/mTOR信号通路介导的。
- 亓俊华聂刚吴梅刘晓萍陈民佳朱明袁培松张娅宋昱庆郭韡邢伟李向云罗东林黄宏徐祥
- 关键词：表皮干细胞过氧化氢
- 葡萄糖通过mTORC1信号通路调控成纤维细胞增殖被引量：1
- 2013年
- 目的研究葡萄糖对小鼠皮肤成纤维细胞增殖的影响。方法将小鼠皮肤成纤维细胞培养在含不同浓度葡萄糖的培养基里,用MTT法检测细胞增殖,7-MGTP pulldown实验检测细胞翻译起始情况,Western blot检测mTORC1信号通路分子的活化。结果与培养基葡萄糖浓度为5.5 mmol/L相比较,当浓度为15 mmol/L时,促进细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译起始复合物增加,mTORC1信号通路活化;当25 mmol/L时,抑制细胞增殖,与7-MGTP结合的翻译始复合物减少,mTORC1信号通路中与细胞增殖相关的4EBP1和与细胞生存相关的Akt的磷酸化减弱。结论葡萄糖通过对mTORC1信号通路的双向调节作用调控成纤维细胞增殖。
- 宋娇吴登艳邢伟郝进徐祥黄宏
- 关键词：葡萄糖成纤维细胞
- HDAC2 sumo-E3连接酶活性在DLD1细胞迁移和增殖中的作用
- 2018年
- 目的:探讨HDAC2 sumo-E3连接酶对DLD1细胞迁移与增殖的影响和可能机制。方法:全基因合成HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488),并构建其重组慢病毒表达载体;感染DLD1hdac2-/-细胞(无内源性HDAC2表达),筛选稳定表HDAC2(325-488)的细胞克隆DLD1h325-488;RTCA实时细胞分析仪、Trans-well等检测DLD1h325-488稳定细胞的增殖和迁移能力;免疫印迹、q RT-PCR检测DLD1h325-488稳定细胞增殖和迁移相关基因的表达。结果:构建了稳定表达HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488)的细胞株DLD1h325-488,并获得稳定表达HDAC2 sumo-E3连接酶突变体HDAC2(325-488)的DLD1h325-488细胞。与对照组细胞相比,DLD1h325-488细胞增殖活性无显著变化,但是细胞的迁移能力和迁移相关蛋白MMP14的表达显著上升。结论:HDAC2 sumo-E3连接酶可能通过上调mmp14的表达而促进DLD1细胞的迁移。
- 马琳琳李玲荆昭李莹莹郭韡胡雪停邢伟徐祥
- 关键词：SUMO迁移
