于艺雪
- 作品数：7 被引量：29H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠白细胞介素17A的克隆、表达及活性鉴定
- 2010年
- 目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白。方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的编码序列并构建到pMD18-T载体中,再亚克隆至原核表达载体pHisSUMO Express中,经DNA测序鉴定后转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定。纯化后的蛋白处理3T3-L1前体脂肪细胞,real time PCR鉴定白细胞介素6(IL-6)的表达变化。结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致。成功构建了pHisSUMO Express-mIL-17A原核表达质粒以包涵体形式表达了重组mIL-17A蛋白,且Western blot证实为目的蛋白。所得蛋白上调3T3-L1细胞表达IL-6。结论:获得具有生物活性的mIL-17A蛋白,为进一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基础。
- 张薇高红梅叶贤龙于艺雪刘铭瑶王文飞任桂萍李德山
- 关键词：克隆包涵体活性鉴定
- 治疗Ⅱ型糖尿病创新药物的研究
- 李德山任桂萍李璐刘向宇王文飞刘铭瑶孙国鹏李晋南姜媛媛高华山侯玉婷于艺雪王菁
- 分别克隆了鼠源FGF-21基因和人源FGF-21，在原核系统进行表达，利用融合标签纯化有活性的鼠源FGF-21和人源FGF-21。以鼠成纤维细胞3T3-L1为细胞模型，发现FGF-21具有调节脂肪细胞吸收葡萄糖的作用。在...
- 关键词：
- 关键词：创新药物胰岛素
- 成纤维细胞生长因子(FGF)-21改善胰岛素抵抗肝细胞对葡萄糖的吸收和肝糖原的合成被引量：21
- 2009年
- 在体外建立胰岛素抵抗肝细胞模型,探讨在胰岛素抵抗状态下成纤维细胞生长因子(FGF)-21对模型细胞糖代谢的影响及机制.将HepG2细胞置于10-7mol/L的胰岛素培养基中培养24h,建立胰岛素抵抗细胞模型.分别用不同浓度的胰岛素和FGF-21处理模型细胞,采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(GOD-POD)法检测细胞对葡萄糖的摄取情况,并检查胰岛素与FGF-21的协同作用.利用实时荧光定量PCR检测FGF-21对模型细胞葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA表达的影响,蒽酮法检测模型细胞糖原合成量,探讨FGF-21对胰岛素抵抗细胞模型葡萄糖摄取的影响及机制.结果发现,用高浓度胰岛素处理HepG2细胞24h后,细胞对胰岛素的敏感性显著降低,说明成功建立了胰岛素抵抗细胞模型,抵抗状态可维持48h,未发现细胞形态学变化.FGF-21能改善胰岛素抵抗模型细胞的葡萄糖摄取,参与肝糖原的合成,并与胰岛素产生协同作用.实时荧光定量PCR结果发现,FGF-21作用模型细胞后,细胞的GLUT1mRNA表达量显著增加,说明FGF-21促进模型细胞摄取葡萄糖的作用机制与其增加GLUT1的表达有关.
- 刘铭瑶王文飞于艺雪侯玉婷任桂萍李德山
- 关键词：胰岛素抵抗HEPG2FGF-21
- FGF-21通过上调肝脏LDL受体的表达降低血浆中LDL水平被引量：3
- 2010年
- 目的成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)可降低实验动物血浆中的低密度脂蛋白(LDL)的浓度,但其作用机制尚不清楚,本实验试图通过研究FGF-21对LDLR的调节作用揭示FGF-21调节血浆LDL浓度的机制。方法向谷氨酸钠(MSG)肥胖大鼠连续注射FGF-21蛋白40d后,检测其血浆中LDL的变化,并用荧光定量PCR的方法结合免疫荧光检测FGF-21对肝脏组织中LDLR mRNA及蛋白的影响。结果 MSG肥胖鼠经FGF-21处理,血浆内的LDL降低18%,其肝脏组织中LDLR mRNA含量提高9倍;HepG2细胞内的LDLR mRNA表达量随FGF-21处理时间增加而提高,且呈剂量依赖性;流式细胞仪检测显示,经FGF-21处理后HepG2细胞表面LDLR蛋白数量增加。结论 FGF-21通过增加肝细胞的LDLR表达量从而降低血浆中LDL浓度。
- 于艺雪任桂萍王文飞王菁孙国鹏张巧刘铭瑶李德山
- 关键词：低密度脂蛋白低密度脂蛋白受体HEPG2细胞
- 重组成纤维细胞生长因子-21调节糖代谢的功能与机理的研究
- 2005年Kharitonenkov等人首次报道成纤维细胞生长因子(FGF)-21具有调节血糖的功能，有望成为解决胰岛素抵抗，治疗2型糖尿病的新型基因药物，从此，FGF-21成为糖尿病研究领域的热点。
为深入研...
- 李德山任桂萍刘铭瑶孙国鹏王文飞侯玉婷于艺雪李晋南叶贤龙
- 关键词：胰岛素FGF-21胰岛素抵抗成纤维细胞生长因子基因药物
- 文献传递
- 人IL-1β的克隆及其高效可溶性表达被引量：5
- 2009年
- 目的:从人淋巴细胞中克隆白介素-1β(IL-1β)cD-NA,通过原核可溶性表达纯化,获得具有生物活性的可溶性IL-1β,为深入研究和利用IL-1β基因奠定基础。方法:从人PBMC中克隆出人成熟IL-1β基因,并插入到原核表达载体pSUMO中SUMO标签的下游,构建重组表达载体pSUMO-hIL-1β。将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达hIL-1β/SUMO融合蛋白,经Ni-NTA Agarose纯化后,表达产物用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,用protease-1切去SUMO标签,用Real time-PCR鉴定其对人T细胞表达的细胞因子的影响。结果:SDS-PAGE分析表明表达产物的相对分子质量(Mr)为37000,成熟蛋白Mr为17000,与理论值相符。灰度扫描分析融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的约30%左右,主要以可溶形式存在。Western blot证实该蛋白为hIL-1β。成熟蛋白纯化产物纯度超过90%以上。通过RT-PCR检测证明其具有刺激人T细胞大量表达多种细胞因子(IL-1β,IL-4,IL-10,IL18,IFN-γ,TGF-β,TNF-α)的活性。结论:利用大肠杆菌表达系统完全可以高效可溶性表达较高纯度的具有生物活性的hIL-1β蛋白。
- 尹成凯于艺雪任桂萍李宁姜媛媛徐彤李德山
- 关键词：IL-1ΒSUMOREAL融合蛋白活性检测
- 成纤维细胞生长因子-21调节血浆LDL水平的机制研究
- 于艺雪
- 关键词：HEPG2细胞
