李德山
- 作品数：154 被引量：342H指数：9
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金黑龙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- 定点突变FGF21提高表达量研究被引量：2
- 2013年
- FGF21是一类具有重要糖脂代谢调节功能因子,是治疗2型糖尿病候选药物。但其在大肠杆菌中表达量低且主要以包涵体形式表达,为此根据FGF21与FGF家族同源序列差异,对FGF21进行定点突变以提高其表达量。以pSUMO-FGF21表达载体为模板,在突变位点两端设计引物,采用定点突变方法,将FGF21141位甘氨酸(G)突变为苯丙氨酸(F),构建突变FGF21表达载体pSUMO-mutFGF21;在大肠杆菌中进行表达,纯化mutFGF21蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot鉴定分析突变蛋白,HepG2细胞糖吸收试验检测突变蛋白活性。结果成功对pSUMO-hFGF21进行突变,突变蛋白在大肠杆菌中成功表达,经SDS-PAGE分析,主要以可溶形式表达;与野生型FGF21(hFGF21)相比,表达量提高50%。Western blot表明mutFGF21可与FGF21抗体特异性反应。糖吸收试验显示mutFGF21具有与hFGF21一样生物活性并存在剂量依赖性,相比hFGF21,mutFGF21活性略有提高,说明定点突变FGF21(141位G突变为F)可显著提高FGF21表达量。
- 李德山曹荣邱高华山任桂萍刘明瑶
- 关键词：定点突变表达量
- 表达鸡IL2重组新城疫病毒及其在疫苗中的应用
- 本发明公开了一种鸡新城疫病毒毒株及其在制备鸡新城疫病疫苗中的应用。本发明提供的鸡新城疫病毒毒株，其制备方法包括如下步骤：将重组质粒pBrClone30-chIL2、pBL-N质粒、pBL-P质粒和pBL-L质粒共转染哺乳...
- 冯明芳李德山张天援王卉何金娇
- 文献传递
- 有机污染物的微生物修复研究进展被引量：1
- 2012年
- 多芳香烃(PAHs)、环硝胺类物质(RDX、HMX、Tetryl和CL-20)、多氯联苯(PCBs)、烷烃类化合物、氯乙烯类、硝基化合物等的有机污染物增多,对自然界和人类生活造成极大危害,自二十世纪七十年代便出现了利用微生物降解有机污染物的生物修复研究,但传统的有机污染物生物修复存在效率不高、难以维持等问题。二十世纪九十年代以来,随着分子生物学技术的迅速发展,其在污染生物修复中得到越来越多的应用,并有效地提高了生物修复效率。本文总结了近年来有机污染物污染修复中应用上述方法的研究,重点分析整理了一系列典型石油污染物降解途径中的加氧酶及其参考菌株,为今后有机污染物的生物修复提供参考。
- 王文飞刘铭瑶李德山
- 关键词：有机物污染物微生物
- 利用细菌展示技术系统地筛选猪圆环病毒2型衣壳蛋白的线性抗原区域被引量：4
- 2016年
- 为了系统的筛选位于猪圆环病毒2型（PCV2）Cap蛋白上的抗原优势区域,本研究将缺少N端核定位信号的Cap蛋白基因分成7个连续重叠的DNA片段cap（1~7）,然后分别克隆于细菌展示载体APEx中,IPTG诱导重组蛋白片段表达于细菌内膜外侧,采用流式细胞仪检测各片段和抗PCV2 Cap蛋白的多克隆抗体的结合能力。结果表明,cap（1~7）均可以和抗该Cap蛋白的多抗结合,并且cap6的结合能力最强。将cap6片段进一步分为连续不重叠的3段（cap6-1、cap6-2、cap6-3）,以同样的方法鉴定抗原表位。结果显示,cap6-2与抗PCV2 Cap蛋白的多抗结合能力最强。此外,应用western blot的方法对细菌展示结果进行了验证。本研究利用细菌展示技术以及流式细胞仪快速的筛选了PCV2b Cap蛋白上的抗原优势区域,cap（1~7）片段均包含抗原表位,并且cap6是Cap蛋白上的抗原优势区域,cap6-2可能是抗原优势表位。
- 徐文娟张瑛杰李青青吴强于向纺郭笑辰尹杰超任桂萍李德山
- 关键词：猪圆环病毒CAP蛋白多克隆抗体抗原表位
- 鞭毛蛋白及鸡GM-CSF重组新城疫病毒对鸡的免疫增强作用被引量：1
- 2015年
- 为评价鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC)以及鸡GM-CSF(chGM-CSF)对新城疫病毒(NDV)弱毒疫苗的免疫增强效果,本实验通过PCR扩增fliC,并合成chGM-CSF编码基因,分别构建重组质粒pBrClone30-fliC和pBrClone30-GM-CSF,拯救获得重组病毒rClone30-fliC和rClone30-GM-CSF。RT-PCR和ELISA检测结果表明:fliC和chGM-CSF基因正确插入重组病毒,并获得稳定表达;重组病毒免疫7 d后重组NDV HI抗体效价检测显示,实验组平均HI效价分别达到4.5 log2和4.8 log2,而r Clone30组和空白组HI效价仅为3 log2和1 log2;免疫7 d后攻毒,空白组SPF鸡均死亡,rClone30组有两例发病,实验组SPF鸡全部存活并且无任何临床症状。本研究结果表明,FliC和chGM-CSF作为佐剂能够有效提高弱毒疫苗的免疫效果。
- 王卉张天援吕政孙田尹杰超吴云舟刘云野吴金任桂萍李德山
- 关键词：鞭毛蛋白新城疫病毒反向遗传操作技术
- SUMO-cFGF-21发酵工艺优化及其降糖效果研究
- 2019年
- 研究旨在优化SUMO-cFGF-21发酵工艺,同时检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果。通过SDS-PAGE电泳分析发酵条件(菌种、工程菌OD600、诱导时间、诱导温度、诱导剂IPTG浓度)对SUMOcFGF-21蛋白表达的影响。结果表明,22号菌种蛋白表达量最高,达到上清蛋白30.5%,可作为一级菌种。发酵过程中,当工程菌OD600值约为2、诱导时间6 h、诱导温度23℃、诱导剂IPTG终浓度1 mmol·L^(-1)时,上清中SUMOcFGF-21蛋白表达量最高,达到上清蛋白19.7%。经Ni柱亲和层析,酶切去掉SUMO标签后成功制备cFGF-21蛋白。将不同剂量cFGF-21持续注射糖尿病小鼠两周,以有效剂量cFGF-21持续注射糖尿病犬两周,观察降糖效果。结果表明,与模型对照组相比,有效剂量cFGF-21均可极显著降低糖尿病小鼠和犬的血糖(P<0.01)。研究成功优化SUMO-cFGF-21蛋白中试发酵工艺,并检测cFGF-21蛋白对糖尿病小鼠和犬血糖的降糖效果,为临床应用cFGF-21治疗犬糖尿病提供依据。
- 任桂萍王耀群姜兴昊刘世杰李德山
- 关键词：发酵工艺纯化
- 一种高效表达anti-hEGFR基因的真核表达载体构建方法
- 本发明公开了一种高效表达anti‑hEGFR基因的真核表达载体构建方法，属于分子生物学领域。针对重组人表皮生长因子受体抗体(anti‑hEGFR)基因的克隆及高效真核表达载体构建，以含anti‑hEGFR全长基因的质粒为...
- 任桂萍李德山刘春香王宇阳
- 文献传递
- 用于预防和治疗鸡传染性法氏囊病(IBDV)的重组鸡源抗体
- 李德山
- 鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)引起的高度接触性传染病。是危害世界养禽业的主要传染病之一。近年来IBDV超强毒的流行给养禽业造成了巨大的损失。疫苗接种是预防IBD的主要手段，但所有的疫苗均对接...
- 关键词：
- 关键词：传染性法氏囊病免疫治疗
- 突变的成纤维细胞生长因子及在治疗II型糖尿病中的用途
- 本发明公开了突变的成纤维细胞生长因子（FGF-21）及其在治疗内分泌疾病中的用途。本发明突变的成纤维细胞生长因子-21的氨基酸序列为SEQIDNO:2所示，其编码基因序列为SEQIDNO:1所示。本发明以野生型FGF-2...
- 王文飞吴云舟刘铭瑶李德山何昆任桂萍
- 文献传递
- 靶向IL‑17和TNFα的新型融合多肽及其应用
- 本发明公开了一种靶向IL‑17和TNFα的新型融合多肽及其应用。本发明所提供的新型融合多肽是通过抗体的铰链区将抗人IL‑17的单链抗体与可溶性肿瘤坏死因子受体1相连接，并且在所述可溶性肿瘤坏死因子受体1的C端连接免疫球蛋...
- 李德山任桂萍刘芝航阚方明韩晓辉
