郭茉
- 作品数：9 被引量：21H指数：3
- 供职机构：东北农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省博士后科研启动基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 犬干扰素-γ的可溶表达及其产物的活性鉴定被引量：1
- 2013年
- 为研究犬干扰素-γ(CaIFN-γ)的可溶表达,本研究应用SUMO表达系统高效稳定、可溶地表达了SUMO-CaIFN-γ蛋白。以MDCK细胞为靶细胞,MTT法检测CaIFN-γ对该细胞增殖的抑制作用。结果表明,CaIFN-γ对MDCK具有明显的抑制作用。Real time法检测CaIFN-γ刺激MDCK细胞后,细胞内源p53 mRNA水平的变化,结果显示,p53的表达量与CaIFN-γ的剂量和时间呈依赖性关系。本研究为进一步研究CaIFN-γ的生物学特性、研制新型CaIFN-γ用于我国犬类疾病的治疗及CaIFN-γ生物制剂的生产奠定了基础。
- 韩阳郝志超王琪王文飞赵景壮郭茉吴云舟叶贤龙任桂萍李德山
- 关键词：SUMOMTTP53
- 基于抗原-抗体共表达的细菌展示技术的优化
- 2013年
- 目的建立细菌周质内抗原抗体共表达系统。方法将人白介素-1β(hIL-1β)基因和抗人白介素1β单链抗体(anti-hIL-1βscFv)基因分别插入到细菌展示载体pBFD的pelB前导肽(游离型前导肽)和NlpA前导肽(锚定型前导肽)下游构建出重组载体pBFD-Ab-Ag。将pBFD-Ab-Ag转入到E.coli DH5α中诱导表达,抗原和抗体蛋白相互结合而被锚定到细菌内膜外侧,破除细菌外壁(原生质球制备)后与适当浓度的FITC标记的小鼠抗hIL-1β抗体进行孵育,最后经流式细胞仪检测荧光信号,根据荧光信号强弱分析抗原抗体表达和相互作用情况。结果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很强的荧光信号,阳性率获得了大大的提高。结论成功建立了建立细菌周质内抗原抗体共表达系统,实现了抗体和抗原细菌周质内的正确折叠和相互识别。简化了现有的抗体筛选的流程,为蛋白质相互作用的研究提供了新的技术手段。
- 徐黎明郭茉任桂萍尹杰超李德山
- 关键词：蛋白相互作用
- 成纤维细胞生长因子21在抵抗素引发胰岛素抵抗的肝细胞模型中的糖代谢调节作用被引量：3
- 2013年
- 抵抗素是2001年Steppan等发现的一种与胰岛素抵抗有密切联系的细胞因子.本研究探讨了成纤维细胞生长因子21(FGF-21)在抵抗素过表达导致胰岛素抵抗的肝细胞中的糖代谢调节作用.构建人抵抗素真核表达载体,转染HepG2细胞,利用流式细胞仪筛选出过表达抵抗素的HepG2模型细胞,分别用不同浓度的胰岛素和FGF-21刺激细胞,用GOD-POD法检测细胞的葡萄糖摄取情况,利用实时荧光定量PCR方法检测抵抗素转染后及FGF-21处理后细胞GLUT1、PPAR-γmRNA表达的变化.PCR鉴定结果表明过表达抵抗素的HepG2模型细胞构建成功.GOD-POD法检测结果证明,模型细胞对胰岛素敏感性降低,但FGF-21仍能有效调节模型细胞的葡萄糖摄取,且呈现剂量依赖关系.实时荧光定量PCR方法检测发现,抵抗素转染后HepG2细胞GLUT1 mRNA表达增加,经FGF-21刺激后模型细胞与对照细胞相比GLUT1 mRNA的表达仍有上升趋势,PPAR-γ的变化不显著.上述结果表明,抵抗素过表达的肝细胞,对胰岛素敏感性降低,产生胰岛素抵抗,但FGF-21仍能有效调节其葡萄糖代谢.
- 刘淼王文飞刘铭瑶赵景壮白银郭茉任桂萍李德山
- 关键词：抵抗素胰岛素抵抗HEPG2
- 抗IL-1βscfv抗体与TNF—α可溶性受体融合蛋白的构建及其生物学活性分析被引量：2
- 2012年
- 目的设计原核表达抗人白细胞介素．1B单链抗体（IL-1βscfv）与TNF．仪可溶性受体的融合蛋白，并分析其生物学活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。方法利用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增了人肿瘤坏死因子I型受体胞外区基因片段，与抗人IL-1βscfv通过抗体铰链区融合，克隆至pET27b（＋）表达载体中，构建成pET-IL-1scfv：TNFR1质粒；转化大肠杆菌Rosetta进行表达。从包涵体中纯化得到IL-1scfv：TNFR1蛋白，进行IL-1scfv：TNFR1的鉴定及活性检测。结果ELISA结果证明，IL-1scfv：TNFRl可以分别结合hIL-1β和hTNF-α，并呈现剂量依赖性，表明IL-1scfv：TNFR1的单链抗体部分和可溶性受体部分可以各自形成正确的空间构象；免疫斑点分析证明，IL-1scfv：TNFRl与hTNF—α结合后仍可以结合hIL-1β，具有同时结合hlL-1β和hTNF-α的两种靶分子的能力，表明IL-1scfv：TNFR1的两个部分不会相互影响与靶分子的结合。活性测定结果表明，IL-1scfv：TNFRl可以有效封闭肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒效应，具有显著抑制hlL-1β促进L929细胞增殖的活性，IL-1scfv：TNFR1对两种靶分子的拮抗作用均呈现明显的剂量依赖性。结论成功构建了能够同时结合hIL-1β和hTNF-α两种靶因子的双特异性IL-1scfv：TNFR1融合蛋白，并能有效抑制hTNF-α和IL-1β的生物活性，为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物。
- 阚方明任桂萍郭茉韩阳齐剑英张宇张雅坤李德山
- 关键词：白细胞介素1Β肿瘤坏死因子Α类风湿关节炎
- 抗人IL-1β单链抗体的构建及其中和活性的检测被引量：2
- 2013年
- 目的:原核表达抗人IL-1β(hIL-1β)的scFv,并对纯化后抗体的特异性、亲和力以及中和活性进行检测,为研制治疗类风湿关节炎的小分子抗体药物奠定基础。方法:使用PCR方法从含有抗hIL-1β抗体基因的质粒中获得抗hIL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达载体pET-27b-A-hIL-1β-scFv。将该载体转化大肠杆菌Rosetta后诱导表达,经包涵体变性、复性得到可溶的抗hIL-1βscFv蛋白。利用高效液相色谱仪对其纯度进行分析后使用Western blot和ELISA方法测定scFv抗体对抗原特异性结合能力和亲和力,使用MTT的方法检测scFv抗体中和人IL-1β蛋白的能力。结果:成功地对抗hIL-1β单链抗体进行构建、诱导、表达和纯化。得到纯度为72.05%、相对分子质量约为28 ku的目的蛋白。ELISA和Western blot结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力。MTT实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断hIL-1β刺激L929细胞的增殖。结论:通过原核表达系统得到的抗hIL-1β单链抗体,纯化后,鉴定其与hIL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和hIL-1β的活性,为进一步研究治疗RA的小分子抗体奠定了基础。
- 李天鹤任桂萍徐黎明周兵郭茉齐剑英张宇赵景壮于引航尹杰超李德山
- 关键词：单链抗体包涵体复性中和活性MTT
- 基于细菌展示技术的高通量抗原表位筛选方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：本研究旨在利用细菌表面展示技术结合流式细胞术建立一种快速直观的抗原表位的新方法。方法：本研究以传染性法氏囊病毒结构蛋白VP2作为目标蛋白，对该方法的可行性进行检测。将VP2基因分为连续不重叠的5个基因片段（V1～V5）。将各段基因分别克隆至细菌展示载体pAPEx中．转化大肠杆菌DH5a，利用IPTG诱导使蛋白片段锚定表达于大肠杆菌细胞间质侧的内膜上，利用溶菌酶破除细菌外膜（原生质球制备），使蛋白片段暴露于原生质球表面。将该原生质球先后与传染性法氏囊病毒多克隆抗体和FITC标记的兔抗鸡抗体进行孵育，利用流式细胞仪（Flowcytometer，FC）检测原生质球的荧光信号强度。结果：FC结果显示，除V2片段外其余片段均有很强的荧光信号，其荧光强度为V3最强，Vl、V4、V5其次。该结果说明V1、V3、V4、V5段存在抗原表位，V2段中无表位。为验证Fc结果，本研究利用传统方法对各基因片段进行表达、纯化及Westernblot鉴定，结果显示V3与多抗的结合能力最强，v2段无阳性反应，与FC结果相符。此外，本研究利用抗原表位分析软件对各蛋白片段潜在抗原表位进行预测，其结果与FC结果相一致。结论：本研究利用Fc对抗原表位筛选过程进行实时监测，通过荧光信号强弱即可判断抗原表位是否存在及强弱，与传统抗原表位筛选方法相比，节省了时间提高了效率。利用该方法可以快速地筛选出优势表位，对于流行病病原的基础研究及疫苗的研制具有重意义。
- 郭茉徐黎明周兵尹杰超任桂萍李德山
- 关键词：抗原表位流式细胞术
- 抗鸡传染性法氏囊病病毒单链抗体库的构建及其中和抗体的筛选被引量：4
- 2014年
- 为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的细菌展示单链抗体（scFv）库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv。本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA，采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列，插入含有（Gly4Ser）3 linker的pTlinker载体中，再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中。以FITC标记的VP2 蛋白为诱饵，通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv，其氨基酸同源性为82.16 %～87.27 %。将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b（＋）中，构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv。将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达，该5株scFv相对分子质量均约为28 ku。此外，利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体，检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力。而且通过体外中和试验结果表明，仅有一株scFv具有病毒中和活性，可以有效阻断IBDV（B87 株）对鸡胚成纤维细胞（DF1）的感染。该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础。
- 周兵李天鹤李宁徐黎明郭茉马蕾张瑛杰叶贤龙赵景壮衣春霖韩晓辉丁良君李德山
- 关键词：IBDV单链抗体中和活性
- 基于内部核糖体进入位点提高重组NDV表达IBDV VP2基因的研究被引量：4
- 2013年
- 为提高重组新城疫病毒(NDV)外源基因表达量,本研究采用内部核糖体进入位点序列(IRES)构建表达鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vvIBDV)H LJ07株V P2双拷贝基因的重组NDV(rClone30-V P2-IRES-V P2),同时构建表达单拷贝V P2基因的重组NDV(rClone30-V P2)作为对照。间接免疫荧光试验表明V P2蛋白在感染两种重组病毒的鸡胚成纤维细胞(DF-1)中得到表达。Real-time PCR检测结果表明rClone30-VP2-IRES-V P2中VP2 mRNA转录水平明显高于rClone30-VP2。生长曲线分析表明,两株重组病毒株与亲本NDV LaSota(Clone30)株在细胞培养中可以同样稳定复制。重组病毒株在鸡胚中多次传代之后仍稳定表达VP2蛋白。本研究通过建立NDV的反向遗传操作系统构建了独立表达IBD V双拷贝V P2基因的重组NDV,并证明双拷贝基因的表达水平优于单拷贝基因,为提高重组NDV外源基因的表达量提供了新的思路。
- 何金娇刘雪莹吴云舟郭茉韩晓辉尹杰超安莹任桂萍李德山
- 关键词：重组新城疫病毒VVIBDVVP2基因IRES
- scBsAb1/17双特异性抗体对小鼠类风湿性关节炎模型的治疗效果被引量：5
- 2013年
- 目的比较不同剂量scBsAb1/17对Ⅱ型胶原(CII)诱导类风湿性关节炎(CIA)模型小鼠的治疗效果,及scBsAb1/17双特异性抗体与单价抗体(anti-IL-1βscFv和anti-IL-17scFv)在CIA模型小鼠中的治疗效果。方法利用CII建立小鼠类风湿性关节炎模型,小鼠成模后开始治疗,每2 d给药1次,治疗29 d。治疗结束后对小鼠关节炎指数进行临床评分,检测各组小鼠血清中CII抗体、CII特异性刺激的脾细胞增殖指数和脾脏中IL-2、IL-1β、IFN-γ、IL-6和TNF-α等细胞因子的表达水平。结果与CIA模型对照组相比,所有治疗组都能明显减轻CIA小鼠的临床症状,并明显降低血清中CII抗体水平、脾细胞增殖指数及脾脏中TNF-α、IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量。相同剂量下scBsAb1/17治疗组的脾细胞增殖指数明显低于anti-IL-1βscFv治疗组(P<0.05);并且scBsAb1/17治疗组小鼠脾脏中IL-6、IL-2、IL-1β和IFN-γ的表达量明显低于anti-IL-1βscFv和anti-IL-17AscFv单独治疗组(P<0.01或P<0.05)。结论 scBsAb1/17及单价抗体对CIA模型小鼠都有治疗效果;不同剂量scBsAb1/17对CIA模型鼠的治疗效果呈剂量依赖性;相同剂量条件下,scBsAb1/17的治疗效果要优于单价抗体。
- 齐剑英郭茉叶贤龙阚方明张宇郝智超徐黎明任桂萍王文飞李德山
- 关键词：双特异抗体IL-1Β
