袁雪凌 作品数:25 被引量:74 H指数:5 供职机构: 中国人民解放军总医院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 国家自然科学基金 国家重点基础研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
兔膝骨关节炎进程中软骨下骨血管生成的实验研究 被引量:13 2013年 目的探讨兔膝骨关节炎发展进程中软骨下骨血管生成的时间依从性的变化,研究软骨下骨血管新生在OA发病机制中的作用。方法 30只新西兰大白兔随机分为前交叉韧带切除组(ACLT组)、对照组,每组15只。ACLT组右膝前交叉韧带切除造模,对照组不作任何处理。分别于术后4周、8周、12周取材。取兔膝关节标本进行大体观察,切片行组织学番红O染色及OARSI病理评分,评价软骨退变。行免疫组化VEGF染色,观察软骨下骨中血管生成情况,同时用Image Pro Plus6.0图像分析软件进行骨软骨交界血管数量密度的计数检测。结果 ACLT组术后4周即可见软骨退变,8周和12周时退变进一步加重,番红O染色基质丢失、软骨变薄及裂隙生成、软骨下骨裸露。对照组无明显软骨退变,不同组关节软骨OARSI评分有统计学差异(F=440.828,P<0.01)。切片免疫组化血管内皮生长因子(VEGF)染色示ACLT组阳性表达,ACLT组的血管入侵软骨数目明显高于对照组,且OA各时间点之间有统计学差异(F=72.733,P<0.01)。结论软骨下骨的血管生成是OA的早期病变,OA中骨-软骨复合单元的血管增生与软骨退变相关。血管侵入软骨的数量密度与OA发展呈时间依从性增加变化。 袁雪凌 汪爱媛 孟昊业 王永成 李丙岩 王程 彭江 郭全义 陈继营 卢世璧关键词:骨关节炎 软骨 新生血管化 病理性 关节软骨源性微载体生物相容性及异位成软骨特性观察 2013年 目的 观察改良后软骨源性微载体的微观结构及主要成分,其对软骨细胞增殖的影响及体内异位成软骨特性.方法 将新鲜猪软骨片粉碎后,梯度筛滤后得到直径大200~400 μm的软骨源性微载体,经1%十二烷基硫酸钠(SDS)脱细胞处理后,Hoechst 33258荧光染色观察其DNA残留,采用扫描电镜对其微结构进行观察,通过甲苯胺蓝、番红花O组织学染色和Ⅱ型胶原免疫荧光染色观察微载体的主要成分;体外复合软骨细胞后,通过MTT观察软骨源性微载体对软骨细胞增殖的影响;将复合有软骨细胞的软骨源性微载体包埋于裸鼠皮下观察其异位成软骨能力.结果 改良后的微载体形态近似椭圆形,直径200~400 μm,微丝覆盖其表面,微丝长度40~90 nm;脱细胞处理后Hoechst 33258荧光染色阴性;甲苯胺蓝和番红花O组织学染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性;在MTT检测细胞增殖中,第1天以后软骨源性微载体组及条件培养基组的OD值均高于完全培养基组(P〈0.05);复合有软骨细胞的软骨源性微载体具有异位成软骨能力.结论 本实验成功制备的软骨源性微载体,可作为天然微载体高效扩增软骨细胞,可为组织工程提供优质种子细胞;其具有异位成软骨能力,有望成为软骨组织工程的新型支架. 李丙岩 彭江 王鑫 王玉 苟文隆 袁雪凌 徐峰 黄靖香 陈继营 卢世璧关键词:细胞外基质 软骨细胞 细胞增殖 人股骨头骨坏死骨微观结构、力学特性及成、破骨细胞活性的区域性分布特征 目的 对人股骨头骨坏死标本不同区域的骨微观结构以及成、破骨细胞活性进行分析比较。方法 收集我院201 1年至2013年非创伤性股骨头骨坏死病人行全髋关节置换术后的股骨头标本10例(Ficat Ⅳ期),其中男性6例,女性4... 王程 徐小龙 袁雪凌 苟文隆 彭江 卢世璧关键词:骨坏死 股骨头 MICRO-CT 纳米压痕 生物反应器中的力学刺激促进组织工程软骨再生 被引量:5 2016年 背景:软骨组织工程已被广泛用来实现体外软骨组织再生,并用来修复软骨缺损。软骨组织工程主要由软骨细胞、软骨支架和体外培养环境3部分组成。目的:实验通过体外模拟体内关节软骨生长环境,为进一步提高组织工程软骨的仿生性及更好地修复损伤软骨提供理论依据。方法:2月龄新西兰大白兔,用于分离培养膝关节软骨细胞,取第2代细胞以1×106 L-1细胞浓度接种于去细胞软骨基质支架上制备细胞-支架复合物。实验分为实验组和对照组,对照组单纯细胞支架复合静态培养1 d,实验组于Instron生物反应器中培养,加以力学刺激(力学加载参数为3 h/d,1 Hz,压缩量为10%)7,14,21,28 d。结果与结论:(1)随着培养时间的延长,实验组细胞-支架复合物厚度、弹性模量及最大负荷均显著高于对照组(P<0.05)。(2)实验组组织切片苏木精-伊红染色均可见软骨细胞增殖及软骨陷窝形成,番红"O"染色见细胞-支架复合物的细胞外基质中有大量蛋白聚糖形成,随力学刺激时间延长而逐渐增加,并与蛋白聚糖试剂盒检测结果相符。(3)实时荧光定量PCR检测示,实验组Ⅰ,Ⅱ型胶原表达均高于对照组(P<0.05),实验组中力学刺激21 d时Ⅰ型胶原表达最高(P<0.05);Ⅱ型胶原在力学刺激28 d表达最高(P<0.05)。(4)结果证实细胞-支架复合物通过生物反应器的力学加载,可以产生更多的胶原和蛋白聚糖等细胞外基质成分,并增强其力学特性,使其更加复合人体软骨生长环境,并提高其与正常软骨的仿生性,从而使细胞支架复合物能更好的修复损伤软骨。 余晓明 孟昊业 孙振 尹合勇 袁雪凌 郭全义 彭江 汪爱媛 卢世璧关键词:软骨 软骨组织工程 生物反应器 软骨支架 蛋白多糖 骨性关节炎患者膝关节软骨及软骨下骨中miR-214的表达 被引量:7 2015年 目的探讨不同Kellgren-Lawrence X线分级的骨性关节炎患者膝关节软骨及软骨下骨中Micro RNA-214(mi R-214)的表达,为进一步研究mi R-214在骨性关节炎发生和发展中的作用提供依据。方法收集截肢患者及骨性关节炎全膝关节置换患者膝关节胫骨平台40例,根据K-L评分标准将其分为Ⅰ级组(10例)、Ⅱ级组(10例)、Ⅲ级组(10例)、Ⅳ级组(10例)。将样本进行软骨及软骨下骨分离后,运用实时定量PCR检测不同分组中软骨及软骨下骨中mi R-214的表达情况。结果在所有软骨及软骨下骨中均能检测到mi R-214的表达。比较4组之间mi R-214的表达情况,发现4组软骨中mi R-214的表达有明显差异(P<0.05),并且呈现逐渐升高的趋势;骨性关节炎发展的严重程度与mi R-214的表达水平密切相关。Ⅲ级组中软骨下骨中的mi R-214的表达量明显高于其他3组(P<0.05)。结论 mi R-214的表达水平与骨性关节炎发展的严重程度密切相关,表明mi R-214可能与骨性关节炎的发生、发展有密切联系。 余晓明 袁雪凌 孟昊业 孙振 尹合勇 郭全义 彭江 汪爱媛 卢世璧关键词:骨性关节炎 软骨 软骨下骨 兔骨软骨缺损自发性修复模型中软骨下骨重塑与软骨再生的关系 被引量:2 2014年 目的探讨兔骨软骨缺损自发性修复模型中软骨下骨重塑与关节软骨再生之间的关系。方法取6月龄健康新西兰大白兔24只,于单侧股骨髁间关节面制造直径4mm、深3mm的骨软骨缺损,不作任何处理,于术后1、4、12、24周分别处死实验动物取材,行大体、组织学及免疫组织化学染色观察,根据国际软骨修复协会(ICRS)组织学评分标准进行评分,micro-CT扫描重建分析软骨下骨组织形态计量学参数,评估软骨修复效果以及与软骨下骨重塑的相关性。结果骨软骨损伤可自发性修复,随时间推移,缺损区逐渐被修复组织填充平整,缺损区内软骨下骨板逐渐向上迁移,骨矿物质密度、骨体积分数、组织矿化密度、骨小梁数量、骨小梁厚度均逐渐增加,而骨小梁间隙宽度逐渐下降,除骨小梁厚度4、12周间比较差异无统计学意义(P〉0.05)外,其余各指标各时间点间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。组织学表现为纤维性修复为主,透明软骨少见;随时间推移,术后标本ICRS组织学评分逐渐增加,除4、12周间比较差异无统计学意义(P〉0.05)外,其余各时间点间比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。软骨下骨组织形态计量学参数中,除骨小梁间隙宽度与ICRS组织学评分成负相关(r=0.584,P=0.039)外,其余各参数均与其成正相关(r=0.680~0.891)。结论兔骨软骨缺损自发性修复模型中,软骨下骨重塑与软骨再生既密切相关又独立发生,软骨下骨的快速重塑可能对关节软骨修复效果有负面影响。 王永成 孟昊业 袁雪凌 彭江 郭全义 卢世璧 汪爱媛关键词:骨软骨损伤 关节软骨 软骨下骨 膝关节原发性骨关节炎软骨-软骨下骨复合单元改变的实验研究 被引量:6 2014年 [目的]观察膝关节原发性骨关节炎(osteoarthritis,OA)胫骨平台软骨和软骨下骨病理改变特点,评价不同OA期别的骨形态计量学,探讨软骨和软骨下骨在OA发病机制中的相互作用。[方法]取人工全膝关节置换术后的膝原发性OA患者(n=40)自愿捐赠的新鲜胫骨平台标本。大体观察后在胫骨平台内、外侧中央负重区取软骨一软骨下骨复合体并切割等分为A、B两组。A组行番红O/固绿染色,参照Mankin评分标准评分并分1~4期,观察软骨及软骨下骨病理改变。B组用Mirco—CT扫描测量骨形态计量学参数。[结果]根据Mankin评分,I期OA可见软骨浅表层纤维化、潮线复制,Ⅱ期OA可见软骨磨损腐蚀、微骨折形成、血管侵入钙化软骨层,Ⅲ期OA可见多发性裂隙深达软骨下骨、软骨内囊肿、血管越过潮线生长、明显增厚的软骨下骨,Ⅳ期OA可见软骨全层缺失、软骨内化骨、软骨下骨暴露。随OA发展的期别增高,骨矿化密度(bone mineral density,BMD)、骨体积分数(bone volume fraction,BV/TV)、组织矿化密度(tissue mineralized density,TMD)、骨小梁数目(trabecula number,Tb.N)、骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)呈增长趋势,骨小梁间隔(trabecular spacing,Tb.Sp)及结构模型指数(structure model index,SMI)呈下降趋势,且OA各期之间有显著统计学差异(P〈0.05)。评价软骨退变的Makin评分与BMD、BVF、Tb.Th呈显著正相关(P〈0.001),与SMI呈显著负相关(P〈0.001)。[结论]软骨和软骨下骨构成结构和功能上的复合单元,在OA进展中相互影响。异常力学载荷引发骨重塑,微裂隙和血管等连接通道的存在提示软骨和软骨下骨间存在物质传递和分子交流。软骨下骨的特异性改变和软骨退变密切相关。 袁雪凌 孟昊业 王永成 彭江 郭全义 许文静 李丙岩 王程 汪爱媛 卢世璧关键词:骨关节炎 软骨下骨 软骨 可注射型壳聚糖/软骨细胞外基质多孔微球复合骨髓干细胞构建组织工程软骨微单元修复动物关节软骨缺损 目的 关节软骨无血管和神经供应,自身修复能力极为有限。早期软骨损伤修复十分必要。可注射多孔微载体可更好增殖细胞及维持细胞分化表型,修复组织缺损并减少手术创伤。本研究以软骨细胞外基质(ECM)及壳聚糖(CS)为原料构建多孔... 袁雪凌 禹坤 孟昊业 彭江 郭全义 汪爱媛 卢世璧关键词:多孔微球 软骨修复 早期股骨头骨坏死标本分析及骨坏死塌陷机制研究 目的 比较早期股骨头骨坏死标本不同区域的骨微观结构的改变及成骨、破骨活性的区域分布特征.方法 收集临床行全髋关节置换的非创伤性早期股骨头骨坏死患者术后的股骨头标本8例(Ficat Ⅱ-Ⅲ期).根据影像学检查将每个标本划分... 王程 鲁长风 赵斌 刘若西 孟昊业 袁雪凌 郭全义 彭江 卢世壁关键词:MICRO-CT 成骨 破骨 细胞外基质与能量代谢在骨性关节炎衰老机制中的作用综述 被引量:2 2017年 骨性关节炎发病原因众多,其中至关重要的因素是衰老相关的退变。本文主要针对关节软骨中能量代谢障碍和细胞外基质改变进行综述,这些变化导致了炎症反应,加速分解代谢,并伴随关节组织的退变,最终促进骨性关节炎的进展。 刘若西 袁雪凌 王程 全琦 苌彪 孟昊业 汪爱媛 郭全义 卢世璧 彭江关键词:骨性关节炎 能量代谢障碍 细胞外基质