石敏
- 作品数：14 被引量：30H指数：3
- 供职机构：北京大学深圳医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- TGIF亚类基因在小鼠睾丸中的表达特征
- 典型同源异型盒蛋白 TGIF 亚类对 Retinoic acid 及 TGF-β介导的基因转录起调节作用。取出生后6d,15d,30d, 50d,150d 及300d 小鼠睾丸,提取 RNA 转录成 cDNA,用实时定量...
- 石敏桂耀庭蔡志明
- 文献传递
- 诱导小鼠胚胎干细胞定向分化为雄性生殖细胞
- 目的：探讨诱导小鼠胚胎干细胞成为生精细胞,并最终能够在雄性不育小鼠曲精细管中重建精子发生的有效方法。方法：采用悬滴培养法使表达绿色荧光蛋白的小鼠 XY 型胚胎干细胞形成拟胚体,诱导胚胎干细胞分化为原始生殖细胞。采用酶消化...
- 崔光辉郭新秦洁石敏叶炯贤蔡志明
- 文献传递
- 人胚胎干细胞H1培养条件的优化被引量：1
- 2008年
- 目的:采用不同培养基和饲养层培养人胚胎干细胞H1,建立适合H1细胞增殖的最佳条件并分析其基本生物学特性。方法:鼠源性饲养层采用ICR品系小鼠胚胎成纤维细胞(MEF),人源性饲养层采用人胚胎成纤维细胞系(HFF-1)。H1基本培养基配制分别采用传统DMEM/F12和改良培养基Knock-outTM DMEM。实验共分为MEF+DMEM/F12、MEF+K-DMEM、HFF+DMEM/F12、HFF+K-DMEM组。H1基本生物学特性检测采用免疫荧光、RT-PCR、碱性磷酸酶和核型分析。结果:MEF+DMEM/F12组中H1克隆形态规则,不发生分化,增殖速度快;而MEF+K-DMEM组细胞克隆传代后第4日发生分化;HFF+DMEM/F12组和HFF+K-DMEM组细胞传代后第3日就显示出分化趋势,克隆变扁。MEF+DMEM/F12组中H1细胞保持正常核型和基本生物学特性。结论:不同的人胚胎干细胞系最佳培养条件是不同的,建立的MEF+DMEM/F12组培养条件最适合H1细胞增殖。
- 郭新秦洁张键荣唐爱发余振东石敏桂耀庭蔡志明
- 关键词：人胚胎干细胞细胞培养
- 精子发生相关基因的筛选和功能研究
- 桂耀庭唐爱发蔡志明余振东郭新张立兵张键荣李贤新石敏李世勤朱辉于洁房家智
- 该课题筛选出小鼠睾丸组织年龄依赖性表达基因2058个，鉴定8个人体睾丸特异性表达新基因，对8个功能未知的睾丸特异性表达新基因和5个已知基因进行深入研究，确定了它们在小鼠和人体睾丸组织的表达特征。发现同源盒基因-A10，表...
- 关键词：
- 关键词：精子发生基因筛选
- 人睾丸中各级生精细胞的鉴定被引量：2
- 2006年
- 目的:建立人睾丸生精细胞鉴定方法。方法:用机械法离散人睾丸细胞,涂片,用D iff-Qu ik法染色显示细胞形态。在Hoffm an光学镜头下根据细胞形态进行活细胞分类,选取各类细胞分别涂片,行17号染色体着丝粒探针化学显色原位杂交和c-k it抗原表达免疫细胞化学染色。结果:在配置Hoffm an镜头的倒置显微镜下人睾丸圆形细胞主要可分为4群:支持细胞(Sertoli)细胞,粗线期初级精母细胞,精原细胞,圆形精子细胞。原位杂交结果为:Sertoli细胞、粗线期初级精母细胞、精原细胞均显示2个着丝粒信号,圆形精子细胞及精子显示单个着丝粒信号。抗c-k it抗体免疫化学染色显示:粗线期初级精母细胞、精原细胞反应呈阳性,Sertoli细胞、圆形精子细胞、精子反应呈阴性。结论:人睾丸各类细胞在活体形态、染色形态、染色体倍性、抗原表达上均有各自显著的特征,其中据Hoffm an成像形态区分各级生精细胞是在活体状态下一种简便有效的鉴别人生精细胞的方法。
- 石敏李贤新宋博龙云桂耀庭蔡志明
- 关键词：睾丸精细胞原位杂交免疫组织化学
- MiR-15a-5p在肾癌中的表达分析及临床意义研究被引量：1
- 2016年
- 目的检测肾癌及癌旁配对组织、肾癌及正常肾细胞系中mi R-15a-5p的表达水平,比较配对组织及细胞系之间的表达水平,分析表达水平与患者临床特征之间的关系,探究mi R-15a-5p作为肾癌标记物应用于临床的可能性。方法提取肾癌及正常肾细胞系、36对肾癌与配对癌旁组织标本中的总RNA,经反转录、q PCR检测mi R-15a-5p的表达,使用统计软件分析组织间、细胞系之间mi R-15a-5p的表达差异,分析mi R-15a-5p表达水平与患者临床特征间的关系。通过转染mi R-15a-5p干扰敲低肾癌细胞中mi R-15a-5p表达水平,利用流式细胞术评估其对肾癌细胞的凋亡影响。利用SPSS 19.0进行配对t检验及Fisher确切概率检验。结果 mi R-15a-5p在肾癌组织中表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05),癌组织中表达水平为癌旁组织的(9.95±0.92)倍。肾癌细胞系(786-O、ACHN)中mi R-15a-5p表达量分别是正常肾细胞系(HEK-293T)的(8.40±1.74)倍、(2.94±0.11)倍(P<0.05)。标本中共有26例(72.2%)肾癌标本mi R-15a-5p表达上调,癌组织中mi R-15a-5p表达水平与肾癌临床分期相关(P<0.05)。敲低mi R-15a-5p表达水平可诱导肾癌细胞凋亡,786-O细胞凋亡率为(14.01±0.81)%(敲低mi R-15a-5p)和(2.47±0.28)%(阴性对照)(P<0.05),ACHN细胞凋亡率为(20.30±0.47)%(敲低mi R-15a-5p)和(11.45±0.61)%(阴性对照)(P<0.05)。结论 mi R-15a-5p在肾癌组织及细胞系中表达明显上调,且和肾癌分期相关,mi R-15a-5p可调节肾癌细胞凋亡,提示其在肾癌的发生发展中起着一定的作用,有作为肾癌标记物应用于临床的可能。
- 金露李一帆何韬胡佳刘家驹石敏亓英桂耀庭毛向明杨尚琪来永庆
- 关键词：肿瘤分期微小RNA
- 体外培养方法诱导大鼠精母细胞减数分裂
- 2007年
- 目的:探讨大鼠睾丸精母细胞在体外减数分裂、分化为精子细胞或精子的可能性。方法:取出生后20-22dWistar大鼠睾丸组织,经胶原酶消化分离细胞,分别用含2%胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培养基(对照组)和含2%FBS的DMEM/F12培养基+多种性激素+多种细胞生长因子等(实验组)作体外培养,于培养后d3、d7、d14收集细胞,采用流式细胞技术,检测培养前后生精细胞染色体倍体的变化;RT-PCR法检测精子细胞特异性基因过渡蛋白1(TP1)mRNA的表达。结果:培养d2,可见支持细胞贴壁生长,生精细胞粘附于支持细胞表面,实验组生精细胞存活率>90%,对照组<5%;培养14d,实验组可见长有鞭毛的长形精子细胞。流式细胞检测结果显示,培养前生精细胞为二倍体和四倍体细胞群,培养d14实验组单倍体细胞占总细胞数的6.2%,对照组未见单倍体峰。RT-PCR结果显示与流式细胞技术检测结果一致:培养前生精细胞未检测到TP1mRNA的表达,培养7d后实验组可检测到该基因的表达,培养14d,其表达量显著增加。结论:采用生精细胞与支持细胞混合培养并在培养液中添加性激素、细胞生长因子等的方法,大鼠精母细胞可以在体外进行减数分裂,分化成长形精子细胞。
- 桂耀庭聂栋石敏蔡志明
- 关键词：精子发生减数分裂体外培养
- 人生精细胞体外分化的研究进展
- 2008年
- 哺乳动物生精细胞体外培养技术发展迅速,在人类,已经有体内发育阻滞生精细胞经体外培养发生分化,帮助生精阻滞患者生育遗传学后代的报道。研究较多的生精细胞体外培养和诱导分化的技术包括:生精小管片段培养、生精细胞-支持细胞共培养、生精细胞-Vero细胞共培养。人生精细胞体外分化由于研究例数少,目前技术还很不成熟,人体组织不易获得是限制人生精细胞体外分化研究的瓶颈。最新研究表明,通过建立人精原干细胞系,将有望为人生精细胞体外分化研究提供源源不断的研究材料。
- 石敏桂耀庭蔡志明
- 关键词：体外培养分化精原干细胞
- 剂量敏感的性别反转先天性肾上腺发育不良基因1与雄激素受体相互作用的研究被引量：1
- 2014年
- 目的：剂量敏感的性别反转-先天性肾上腺发育不良基因1（dosage-sensitive sex reversal, adrenal hypoplasia critical region, on chromosome X, gene 1, DAX1）和雄激素受体（androgen receptor, AR）在男性生殖系统中均发挥着不可替代的作用，以往研究证明二者之间存在某些联系，本实验主要检测DAX-1和AR蛋白在细胞内的相互作用情况。方法构建人的带HA多肽标签的DAX-1真核表达载体,以脂质体方式将该质粒和雄激素受体真核表达质粒共转染至非洲绿猴肾成纤维细胞（COS-7）中，转染48h后收集细胞提取总蛋白，利用免疫共沉淀技术检测DAX-1和AR蛋白在细胞内的相互作用。结果成功构建了人DAX-1真核表达载体；免疫共沉淀实验结果显示DAX-1和AR蛋白在COS-7细胞内可以相互作用。结论 DAX-1与AR蛋白在细胞内可能存在相互作用，为后续研究DAX-1功能、突变致病及DAX-1与AR的作用机制奠定基础。
- 杨丽华李俞池王旭亮石敏江智茂桂耀庭
- 不育男性精子形态与体外受精妊娠结局的相关性研究被引量：13
- 2012年
- 目的探讨不育男性精子形态与体外受精妊娠结局的关系。方法按照WHO《人类精液及精子．宫颈粘液相互作用实验室检验手册》要求对573例接受辅助生殖技术治疗的男性不育患者的精子形态进行分析，根据患者正常精子形态百分比分为2组（〈15％：≥15％），分别采用体外受精（IvF）或卵泡浆内单精子注射（ICSI）的受精方式，观察精子形态对IVF及ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率和流产率等的影响。结果采用IVF（327例）受精方式下，两形态组精子的受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠率差异均有统计学意义（P〈0．05），但流产率差异无统计学意义（P〉0．05）；而采用ICSI（246例）受精方式下，两形态组精子的上述指标比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论不育男性精子形态异常影响IVF治疗结局，但对ICSI治疗结局无影响，对于精子形态异常的患者应采用ICSI的受精方式。
- 王贺周亮石敏余浩邹德学
- 关键词：精子形态体外受精男性不育
