吴菲
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组汉坦病毒核蛋白的原核表达及纯化被引量：3
- 2016年
- 目的原核表达重组汉滩型病毒（Hantaanvirus，HTNV）核蛋白（recombinant HTNV nuclear protein，rHTNNP）和重组汉城型病毒（Seoulvirus，SEOV）核蛋白（recombinant SEOV nuclear protein，rSEONP），并进行纯化。方法从HTNVPS-6株和SEOVL-99株灭活病毒液中提取总RNA，依据病毒S片段多变区基因序列两端保守序列设计引物，用逆转录PCR法扩增此S基因片段，构建原核表达质粒pET-Trx-his—HTNNP和pET-Trx-his—SEONP，并在大肠埃希菌中诱导表达。表达产物经凝胶电泳初步鉴定和镍柱亲和层析纯化后，用双向免疫扩散试验检测其抗原特异性。结果重组表达质粒经菌落PCR分析和测序证明构建正确。表达的rHTNNP和rSEONP相对分子质量约为26000，表达量分别约占菌体总蛋白的30％和20％，主要以可溶性形式表达，且纯度可达约70％。双向免疫扩散试验证实，这2种重组蛋白具有较好的抗原性。结论成功构建了表达rHTNNP和rSEONP的原核表达质粒，并获得了较高纯度的rHTNNP和rSEONP，为汉坦病毒型别鉴定试剂盒的开发奠定了基础。
- 常东英张健锋吴菲王玉霞王振萍迟祥贾媛曹玉锋陈子杨刘国瑞唐剑光时成波
- 关键词：汉坦病毒属基因表达质粒纯化
- 人胰岛素样生长因子-1的融合表达及纯化
- 2013年
- 目的利用原核表达系统融合表达人胰岛素样生长因子-1(human insulin-like growth factor-1,hIGF-1),并进行纯化及鉴定。方法根据大肠埃希菌密码子偏好性对hIGF-1天然基因序列进行同义突变,并人工合成,PCR扩增后,克隆至pET48b(+)载体,构建重组原核表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的融合蛋白Trx A-hIGF-1经Ni2+亲和层析进行纯化,纯化产物经肠激酶酶切后,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET48b-Trx A-hIGF-1经菌落PCR及测序证实构建正确;表达融合蛋白相对分子质量约为26 000,表达量约为菌体总蛋白的40%,主要以可溶形式存在于菌体裂解上清中,可溶性蛋白占总目的蛋白的比例不低于90%,纯化后纯度不低于90%,蛋白浓度为0.5 mg/ml;纯化的Trx A-hIGF-1融合蛋白可被肠激酶切割为相对分子质量约为8 000的hIGF-1蛋白和18 000的Trx A蛋白,hIGF-1蛋白可与兔抗hIGF-1多克隆抗体特异性结合。结论成功表达了hIGF-1融合蛋白,为其生物学活性的研究及规模化生产奠定了基础。
- 曹玉锋李霄培陈子杨王健常东英贾媛张健锋吴菲王伟善时成波
- 关键词：胰岛素样生长因子-1融合蛋白原核细胞基因表达
