贾媛
- 作品数：13 被引量：46H指数：3
- 供职机构：长春生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：吉林省科技发展计划基金吉林省产业技术研究与开发项目长春市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组戊型肝炎病毒抗原ELISA检测方法的建立被引量：4
- 2011年
- 目的建立重组戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于HE疫苗中HEV抗原含量的检测。方法以重组HEV病毒样颗粒作为免疫原,免疫母鸡,制备抗HEV-IgY多克隆抗体,纯化后作为包被抗体,HRP标记的抗HEV单克隆抗体作为检测抗体,建立HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,并对其进行验证。用建立的方法检测3批HE疫苗成品的HEV抗原含量,计算HEV抗原对氢氧化铝的吸附率。结果建立的ELISA方法线性范围为2～128 ng/ml,最低定量限为2 ng/ml;该方法检测冻干甲肝减毒活疫苗、重组人白介素-2(IL-2)、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人血白蛋白、小牛血清及健康人血清均无交叉反应;该方法检测3个浓度的HEV抗原内部参考品的回收率在95.13%～104.50%之间,试验内及试验间变异系数均<15%;包被抗HEV-IgY的酶标板于37℃放置5 d,其检测HEV抗原内部参考品的A450值及敏感性均未发生显著变化;3批HE疫苗成品中HEV抗原对氢氧化铝的吸附率均大于95%,符合相关质控要求。结论已成功建立了HEV抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,可用于HEV抗原含量的检测。
- 陈子杨吴业红张健锋常军亮时成波贾媛郭立君李春晖
- 关键词：肝炎病毒戊型病毒样颗粒IGY酶联免疫吸附测定
- 重组戊型肝炎疫苗菌种库的建立及其稳定性被引量：1
- 2012年
- 目的建立重组戊型肝炎疫苗工程菌三级种子库,并分析其稳定性。方法将工程菌株HEV179/BL21(DE3)复苏活化,经全面检测合格后冻干保存即为原始种子库;原始种子库传代扩增,经全面检定合格后,冻干保存即为主种子库;主种子库经传代扩增和全面检定合格后,甘油冻存即为工作种子库。对三级种子库进行全面检定,并对工程菌进行冻干及甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性检测。结果建立的三级种子库经全面检定合格;菌种冻干稳定性、甘油冻存稳定性、甘油冻存时间稳定性及质粒稳定性指标均合格,菌种生长特性、遗传和表达稳定性均未发生变化。结论成功建立了HEV179/BL21(DE3)工程菌三级种子库,菌种稳定性良好,适用于重组戊型肝炎疫苗的工业化生产。
- 曹玉锋徐军时成波孟多佳迟春萍王玉梅贾媛张剑锋常东英王伟善
- 关键词：疫苗种子库稳定性
- 福氏志贺菌IgY的抑菌作用被引量：5
- 2007年
- 目的探讨口服福氏志贺菌IgY在动物体内的抑菌作用。方法以福氏志贺菌制备免疫原,免疫母鸡,收集鸡蛋,提取IgY。以不同剂量的IgY口服免疫6日龄乳鼠,并分别以不同剂量的福氏志贺菌于不同时间攻击,观察体内抑菌作用。结果攻菌前口服特异性IgY的乳鼠,其直肠内分离菌的百分率明显低于攻击后口服IgY的乳鼠。抑菌作用随着口服IgY剂量的减少和攻菌量的增加而降低。口服大于3mg/只的特异性IgY,可使肠内特异菌减少50%以上。口服4mg/只可抵御10亿菌的攻击。结论福氏志贺菌特异性IgY可有效抑制该菌在乳鼠肠内的繁殖。
- 邵华陈子杨张勇王振远黄伟嵩贾媛郭立君郭凤云
- 关键词：福氏志贺菌卵黄抗体抑菌作用
- 重组戊型肝炎疫苗抗原P179表征分析被引量：2
- 2016年
- 目的对重组戊型肝炎疫苗（recombinant hepatitis E virus,rHEV）抗原P179表征进行分析。方法取3批HPLC及电泳纯度均为100%的rHEV抗原P179原液,采用SDS-PAGE法检测相对分子质量及二聚体含量;OPA-FMOC全自动柱前衍生-Amino Quant氨基酸分析法测定氨基酸组分;电喷雾-四极杆-飞行时间串联质谱（electrospray ionizationquadrupole time-of-flight-mass spectrometry,ESI-Q-TOF2-MS）法分析C-末端、Edman降解法测定N-末端氨基酸序列;HPLC法进行肽图分析;毛细管等电聚焦电泳法测定等电点;圆二色光谱仪分析其二级结构;透射电镜负染法观察蛋白颗粒状态;双抗体夹心ELISA法检测抗原活性。结果 3批rHEV抗原P179相对分子质量在17 500-21 300之间;二聚体占总蛋白的85%以上;氨基酸组分、C-末端氨基酸序列、N-末端氨基酸序列、肽图、等电点等均与预期相符;3批rHEV抗原P179二级结构中,α螺旋4.8%-5.6%,β折叠34.8%-36.4%,β转角20.8%-22.2%及无规卷曲37.7%-38.0%;透射电镜观察可见大小均一,粒径约20 nm的蛋白颗粒;抗原活性比值在5.0×10^5-2.0×10^6CCU/mg范围内。结论 3批r HEV抗原P179结构特征均一,与设计相符,为该疫苗的产业化奠定了基础。
- 迟祥李铮贾媛唐剑光宋昊陈子杨常东英迟春萍
- 关键词：戊型肝炎疫苗抗原
- HEV抗原ELISA检测方法的建立及初步应用
- 戊型肝炎(hepatitis E)是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)引起的病毒性肝炎,其在亚洲、非洲及中美洲等发展中国家是一种比较严重的传染病,占急性病毒性肝炎的50%,孕妇死亡率高达20%。...
- 吴业红陈子杨张健峰常军亮王莹迟春萍时成波徐军贾媛郭立君郭凤云
- 文献传递
- 毕赤酵母表达铜锌超氧化物歧化酶中试工艺研究被引量：3
- 2012年
- 正交设计优化铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母在摇瓶及30L发酵罐的诱导表达条件,用两步层析法纯化表达的目的蛋白,在不同温度下进行原液稳定性试验。用考马斯亮蓝检测蛋白含量,活性检测试剂盒检测目的蛋白活性。纯化后原液参照中华人民共和国药典三部2005版进行检测,用SDS-PAGE、HPLC检测纯度,免疫印迹法检测rhCu,Zn-SOD特异性,等点聚焦测定该酶等电点,地高辛法检测残余DNA含量,酶联免疫法测定残余蛋白含量。结果显示正交试验的大罐高密度发酵最适条件比摇瓶的最适条所获得的目的蛋白活性高8倍,纯化后,HPLC纯度为99.7%,原液比活性大于6.0×103 U/mg,各项检测指标达到生物制品检定标准。该酶在45、65、85、100℃的半衰期分别为240、120、30、15。具有良好的酶稳定性。本研究建立了发酵、纯化的中试工艺,获得高表达、高纯度及高比活的铜锌超氧化物歧化酶,为规模化生产奠定了基础。
- 迟春萍陈子杨徐军时成波曹玉峰李铮贾媛李雨桐郭立君田海山王小杰孙彪翟东冀长发李校堃
- 关键词：铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母高密度发酵纯化
- 甲型流感病毒DNA疫苗双表达载体的构建及表达被引量：1
- 2008年
- 目的:构建含有甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因的DNA疫苗双表达载体,为研究甲型通用流感疫苗奠定基础。方法:将甲型流感病毒(H1N1)接种鸡胚后收获尿囊液,提取流感病毒总RNA,RT-PCR法扩增M2基因;将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因插入到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将M2基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点,构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,酶切鉴定后测序;脂质体法转染COS7细胞并检测目的蛋白的表达。结果:成功扩增出M2基因(约300bp)、IRES基因(约580bp)和GM-CSF基因(约400bp),酶切鉴定结果表明构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,Western blotting检测证明流感病毒M2蛋白的表达。结论:成功构建出流感病毒DNA疫苗双表达载体pMIG。
- 彭丽萍赵大鹏戚凤春汪春义张雪梅贾媛匡科伟陈云波宋泽民赵晓红徐建国
- 关键词：流感病毒A型DNA疫苗
- 两种细胞培养流感病毒的滴度比较被引量：25
- 2006年
- 目的探讨甲1(A1)型流感病毒在Vero细胞和MDCK细胞培养的可行性,确定最佳培养条件。方法将流感病毒接种于Vero细胞和MDCK细胞,在含有不同浓度胎牛血清或胰酶维持液中培养,于不同时间收获病毒液,检测血凝素滴度(HA)。结果胎牛血清对病毒的繁殖有明显抑制作用。加入适量胰酶(约5μg/ml)可提高病毒产量。最佳收获病毒时间为72～96h。在MDCK细胞上的病毒HA滴度高于Vero细胞。结论两种组织细胞培养流感病毒结果相近,Vero细胞和MDCK细胞均可用于培养流感病毒。
- 戚凤春汪春义张雪梅王亚军李晓波贾媛赵大鹏盛军
- 关键词：流感病毒VERO细胞MDCK细胞滴度细胞培养
- 重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体的稳定性分析被引量：1
- 2016年
- 目的分析重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体在不同条件下的稳定性,为该抗原的纯化工艺及原液储存条件提供参考。方法将重组戊型肝炎疫苗原液置不同温度、不同p H、高盐浓度、高盐低p H条件下及低温长期储存后,通过透射电镜观察P179抗原蛋白颗粒状态,SDS-PAGE分析二聚体含量。结果 HEV抗原在不同温度、不同p H、高盐浓度、高盐低p H条件下,及低温储存不同时间,P179抗原蛋白颗粒维持在20 nm左右,二聚体含量不低于80%;P179抗原低温储存24个月,其蛋白颗粒及二聚体含量均未发生明显改变。结论重组戊型肝炎疫苗P179抗原蛋白颗粒及二聚体稳定性较好。
- 李铮贾媛迟祥宋昊唐剑光徐军陈子杨张健锋孟多佳韩顺子于爱东迟春萍时成波刘照惠
- 关键词：重组戊型肝炎疫苗二聚体稳定性
- 重组汉坦病毒核蛋白的原核表达及纯化被引量：3
- 2016年
- 目的原核表达重组汉滩型病毒（Hantaanvirus，HTNV）核蛋白（recombinant HTNV nuclear protein，rHTNNP）和重组汉城型病毒（Seoulvirus，SEOV）核蛋白（recombinant SEOV nuclear protein，rSEONP），并进行纯化。方法从HTNVPS-6株和SEOVL-99株灭活病毒液中提取总RNA，依据病毒S片段多变区基因序列两端保守序列设计引物，用逆转录PCR法扩增此S基因片段，构建原核表达质粒pET-Trx-his—HTNNP和pET-Trx-his—SEONP，并在大肠埃希菌中诱导表达。表达产物经凝胶电泳初步鉴定和镍柱亲和层析纯化后，用双向免疫扩散试验检测其抗原特异性。结果重组表达质粒经菌落PCR分析和测序证明构建正确。表达的rHTNNP和rSEONP相对分子质量约为26000，表达量分别约占菌体总蛋白的30％和20％，主要以可溶性形式表达，且纯度可达约70％。双向免疫扩散试验证实，这2种重组蛋白具有较好的抗原性。结论成功构建了表达rHTNNP和rSEONP的原核表达质粒，并获得了较高纯度的rHTNNP和rSEONP，为汉坦病毒型别鉴定试剂盒的开发奠定了基础。
- 常东英张健锋吴菲王玉霞王振萍迟祥贾媛曹玉锋陈子杨刘国瑞唐剑光时成波
- 关键词：汉坦病毒属基因表达质粒纯化
