牛肝β-糖苷酶是一种能催化核苷类化合物区域选择性糖基化反应合成二糖核苷的生物催化剂。在已有的研究报道中,采用的生物催化剂都是游离酶,不利于其大规模应用。交联酶聚合物(CLEAs)作为一种新型的无载体固定化酶,具有制备简便、成本低、体积酶活高等优点。本文研究牛肝β-糖苷酶CLEAs的制备,并对其酶学性质和结构进行了研究,探讨了其在二糖核苷合成中的应用。最适的沉降剂、交联剂及交联时间分别为70%饱和度的(NH4)2SO4、50%(V/V)葡聚糖多醛及8 h。在最适条件下,CLEAs的活性回收率为58%。该CLEAs的最适p H、温度、Vmax及Km分别为8.5、60℃、0.13μmol/(min·mg)及1.43 m M。并且该CLEAs具有较好的操作稳定性,重复利用6批次后,其催化合成5’-O-β-葡萄糖基-2’-脱氧尿苷的相对产率仅下降20%。牛肝β-糖苷酶CLEAs呈无定形态。
